Пятно Романовского

Окрашивание по Романовскому — это прототип метода окрашивания , который был предшественником нескольких различных, но похожих окрасок, широко используемых в гематологии (изучение крови) и цитопатологии (изучение больных клеток). Окраска типа Романовского используется для дифференциации клеток при микроскопическом исследовании в патологических образцах, особенно в пленках крови и костного мозга . [ 1 ] и для обнаружения паразитов, таких как малярия, в крови. [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]
Техника окрашивания названа в честь русского врача Дмитрия Леонидовича Романовского (1861–1921), который одним из первых осознал ее потенциал для использования в качестве пятна крови. [ 6 ]
Пятна, родственные или производные от пятен типа Романовского, включают пятна Гимзы , Дженнера , Райта , Филда , Мэй-Грюнвальда , Паппенгейма и Лейшмана . Они различаются протоколами и добавками, и на практике их названия часто путают друг с другом.
Механизм
[ редактировать ]Ценность окрашивания по Романовскому заключается в его способности создавать широкий спектр оттенков, что позволяет легко дифференцировать клеточные компоненты. Это явление называется эффектом Романовского или, в более общем смысле, метахромазией . [ 7 ]
Эозиновая часть окраски отвечает за розово-оранжевый оттенок эритроцитов и гранул внутри цитоплазмы эозинофильных лейкоцитов .
Эффект Романовского
[ редактировать ]
В 1891 году Романовский [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] разработал краситель, используя смесь эозина (обычно эозина Y ) и выдержанных растворов метиленового синего , который образовывал оттенки, не связанные только с компонентами окрашивания: характерные оттенки фиолетового цвета в хроматине клеточного ядра и внутри гранул в цитоплазме некоторых лейкоцитов . Это стало известно как эффект Романовского. [ 11 ] [ 12 ] [ 6 ] [ 13 ] [ 4 ] Эозин и чистый метиленовый синий по отдельности (или в комбинации) не вызывают эффекта Романовского. [ 13 ] [ 4 ] а активными красителями, вызывающими такой эффект, теперь считаются азура Б и эозин. [ 14 ] [ 3 ] [ 13 ]
Полихромный метиленовый синий
[ редактировать ]Пятна типа Романовского могут быть изготовлены либо из комбинации чистых красителей, либо из метиленового синего, подвергшегося окислительному деметилированию , что приводит к расщеплению метиленового синего на множество других пятен, некоторые из которых необходимы для создания эффекта Романовского. . [ 15 ] [ 4 ] Метиленовый синий, подвергшийся этому окислительному процессу, известен как «полихромированный метиленовый синий». [ 15 ] [ 4 ] Полихромированный метиленовый синий может содержать до 11 красителей, включая метиленовый синий , лазурь А , лазурь Б, лазурь С, тионин , метиленвиолет Бернтезена, метилтионолин и тионолин. [ 4 ] Точный состав полихромного метиленового синего зависит от используемого метода, и даже партии красителя одного и того же производителя могут различаться по составу. [ 15 ]
Распространенный метод быстрого окисления предполагает повышение pH раствора с помощью карбоната калия воздуха и его кипячение, при котором вводится кислород . [ 16 ] Использовались и другие методы, такие как окисление в кислой среде дихромат-анионом .
Хотя было показано, что азур B и эозин являются необходимыми компонентами для создания эффекта Романовского, [ 14 ] [ 3 ] [ 13 ] эти красители в чистом виде не всегда использовались при составлении красящих растворов. [ 4 ] Первоначальными источниками азуры Б (одного из продуктов окисления метиленового синего) были растворы полихромного метиленового синего, которые обрабатывались окислителями или подвергались естественному старению, как в случае Романовского. [ 3 ] [ 13 ] Эрнст Малаховский в 1891 году был первым, кто намеренно использовал полихромный метиленовый синий для окрашивания по типу Романовского. [ 15 ] [ 17 ]
Типы
[ редактировать ]Пятно Райта
[ редактировать ]Краситель Райта можно использовать отдельно или в сочетании с красителем Гимзы, известным как пятно Райта-Гимзы. [ 1 ] Пятно Райта названо в честь Джеймса Гомера Райта, который в 1902 г. [ 18 ] опубликовали метод получения полихромного метиленового синего с использованием тепла, который сочетается с эозином Y. [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] [ 1 ] Полихромированный метиленовый синий смешивают с эозином и дают ему выпасть в осадок, образуя эозинат, который повторно растворяют в метаноле . [ 4 ] Добавление Гимзы к краске Райта увеличивает яркость «красновато-фиолетовой» окраски цитоплазматических гранул. [ 1 ] [ 21 ] Красители Райта и Райта-Гимзы — это два красителя типа Романовского, широко используемые в Соединенных Штатах и в основном используемые для окрашивания пленок крови и костного мозга. [ 21 ] [ 1 ]
пятно Дженнера
[ редактировать ]Краситель Дженнера используется в микроскопии для окраски мазков крови . Окраска темно-синего цвета, в результате чего образуется хорошо заметное четко окрашенное ядро.
Пятно по Гимзе
[ редактировать ]Краситель Гимзы состоит из «Azure II» и эозина Y с метанолом и глицерином в качестве растворителя. [ 15 ] Считается, что «Лазурь II» представляет собой смесь лазури B (которую Гимза назвал «лазурью I») и метиленового синего, хотя точный состав «лазури I» считается коммерческой тайной. [ 4 ] [ 15 ] Сопоставимые составы с использованием известных красителей опубликованы и коммерчески доступны. Окраска по Гимзе считается стандартной краской для обнаружения и идентификации малярийного паразита. [ 5 ]
Майское пятно Грюнвальда
[ редактировать ]Аппарат Май-Грюнвальда-Гимзы используется для окрашивания предметных стекол, полученных тонкоигольной аспирацией в гистопатологической лаборатории, для диагностики опухолевых клеток.
Пятно по Паппенгейму
[ редактировать ]Этот метод представляет собой комбинацию окраски по Май-Грюнвальду и Гимзе.
Пятно Лейшмана
[ редактировать ]В 1901 году Уильям Лейшман [ 22 ] разработал пятно, похожее на пятно Луи Дженнера, но с заменой чистого метиленового синего полихромным метиленовым синим. [ 19 ] [ 15 ] [ 4 ] Краситель Лейшмана готовят из эозината полихромного метиленового синего и эозина Y с использованием метанола в качестве растворителя. [ 4 ]
Пятно Филда
[ редактировать ]Полевая окраска используется для окрашивания толстых мазков крови с целью обнаружения малярийных паразитов.
Клиническое значение
[ редактировать ]Патологии крови и костного мозга
[ редактировать ]
Окраски типа Романовского широко применяются при исследовании крови, в виде мазков крови , при микроскопическом костного мозга исследовании биоптатов и мазков-аспиратов. [ 1 ] [ 23 ] Исследование крови и костного мозга может иметь значение в диагностике различных заболеваний крови. [ 1 ] [ 23 ] В США широко используются варианты окраски типа Романовского по Райту и Райту-Гимзе. [ 1 ] в то время как в Европе обычно используется окраска по Гимзе. [ 1 ]
Обнаружение малярии и других паразитов
[ редактировать ]Из окрасок типа Романовского окраска Гимзы особенно важна для обнаружения и идентификации малярийных паразитов в образцах крови . [ 5 ] [ 15 ] Тесты на выявление малярийного антигена являются альтернативой окрашиванию и микроскопическому исследованию мазков крови для выявления малярии. [ 5 ]
Использование в цитопатологии
[ редактировать ]Окраски типа Романовского также используются для окрашивания цитопатологических образцов, например, полученных из тонкоигольных аспиратов и спинномозговой жидкости из люмбальных пункций . [ 24 ]
История
[ редактировать ]
Хотя существуют споры о том, кто заслуживает похвалы за этот общий метод окрашивания, популярное мнение приписывает его Дмитрию Леонидовичу Романовскому . [ 14 ] [ 17 ] [ 19 ]
В 1870-х годах Пауль Эрлих использовал смесь кислотных и основных красителей, включая кислый фуксин (кислотный краситель) и метиленовый синий (основной краситель), для исследования мазков крови. [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ] [ 28 ] [ 17 ] В 1888 году Чеслав Иванович Чензинский использовал метиленовый синий, но заменил кислый фуксин, использованный Эрлихом, на эозин. [ 14 ] [ 27 ] [ 28 ] Комбинация красителей Чензинского смогла окрасить малярийного паразита (представителя рода Plasmodium ). [ 28 ] [ 19 ] Ни окраска Эрлиха, ни Хензинского не давала эффекта Романовского, поскольку используемый ими метиленовый синий не был полихромным. [ 17 ]
Дмитрий Романовский в 1890 году опубликовал предварительные результаты своего пятна крови (комбинации выдержанного метиленового синего и эозина), включая результаты при нанесении на кровь, зараженную малярией. [ 6 ] Такое использование полихромного метиленового синего отличало окраску Романовского (и последующие составы) от окраски Эрлиха и Хензинского, в которой отсутствовал фиолетовый оттенок, связанный с эффектом Романовского. [ 17 ] Публикация Романовского 1890 года не включала описания того, как он модифицировал раствор метиленового синего. [ 6 ] [ 17 ] но в своей докторской диссертации 1891 года он лучше всего описал метиленовый синий, используемый после того, как на поверхности начала образовываться плесень. [ 6 ] [ 17 ] За исключением использования выдержанного раствора метиленового синего, окраска Романовского была основана на технике окрашивания Чензинского. [ 17 ] Использование Романовским своего метода для изучения малярийных паразитов объясняется постоянным интересом к его методу окрашивания. [ 26 ]

Эрнсту Малаховскому приписывают независимое наблюдение той же комбинации пятен, что и Дмитрию Романовскому, в 1891 году. [ 6 ] [ 13 ] хотя ему также приписывают то, что он был первым, кто сделал это. [ 17 ] [ 19 ] Малаховский был первым, кто использовал сознательно полихромированный раствор метиленового синего. [ 15 ] чего Малаховский достиг, добавив буру . в красящую смесь [ 17 ] Сообщается, что Малаховский продемонстрировал пятно 15 июня 1890 года и в том же году опубликовал статью, «описывающую его публичную демонстрацию». [ 19 ] и Малаховского смогли окрасить ядро и цитоплазму малярийного паразита И методы Романовского , , тогда как до этого момента используемые красители окрашивали только цитоплазму. [ 19 ]

В 1899 году Луи Леопольд Дженнер разработал более стабильную версию окраски метиленовым синим и эозином, собирая осадок , образующийся в смесях на водной основе, и повторно растворяя его в метаноле . [ 28 ] [ 15 ] [ 4 ] Красители типа Романовского, приготовленные из собранных осадков, иногда называют эозинатами . [ 4 ] Помимо увеличения стабильности окраски, использование метанола при Дженнера фиксировало окраске образцы крови. [ 4 ] хотя версия пятна Дженнер не дает эффекта Романовского. [ 28 ] [ 19 ] [ 15 ]
Ричард Мэй и Людвиг Грюнвальд в 1892 году опубликовали версию пятна (теперь известную как пятно Мэя-Грюнвальда ), которая аналогична версии, предложенной Дженнером в 1899 году, и также не вызывает эффекта Романовского. [ 28 ] [ 19 ] [ 15 ]
В 1901 году Карл Рейтер и Уильям Лейшман [ 22 ] разработали пятна, в которых сочеталось использование спирта Луи Дженнером в качестве растворителя и использование Малаховским полихромного метиленового синего. [ 19 ] [ 15 ] [ 4 ] Окраска Рейтера отличалась от окраски Дженнера использованием этилового спирта вместо метанола, а окраска Лейшмана отличалась от окраски Дженнера использованием эозина B вместо эозина Y. [ 19 ] [ 4 ]
Джеймс Гомер Райт в 1902 году опубликовал [ 18 ] метод с использованием тепла для полихромирования метиленового синего, который он объединил с эозином Y. Этот метод известен как пятно Райта . [ 19 ] [ 20 ]
Имя Густава Гимзы также стало ассоциироваться с пятном, поскольку ему приписывают публикацию полезной формулировки и протокола в 1902 году. [ 13 ] [ 6 ] [ 26 ] Гимза попытался использовать комбинации чистых красителей, а не растворы полихромного метиленового синего, состав которых сильно варьируется. [ 20 ] [ 19 ] [ 15 ] Гимза продал права на производство своего пятна, но так и не опубликовал подробностей о том, как он его произвел. [ 19 ] хотя считается, что он использовал комбинацию азура Б и метиленового синего. [ 15 ] Гимза опубликовал ряд модификаций своих пятен между 1902 и 1934 годами. В 1904 году [ 29 ] он предложил добавить в пятно глицерин вместе с метанолом, чтобы повысить его стабильность. [ 23 ] [ 19 ]
Порошки-красители Гимзы, производимые в Германии, широко использовались в Соединенных Штатах до прекращения поставок во время Первой мировой войны , что привело к более широкому использованию метода Джеймса Гомера Райта для полихромирования метиленового синего. [ 19 ] [ 1 ]
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Jump up to: а б с д и ж г час я дж Тейл, Карл С. (2012). «Обработка костного мозга и нормальная морфология». Лабораторная гематологическая практика . стр. 279–299. дои : 10.1002/9781444398595.ch22 . ISBN 9781444398595 .
- ^ Бейн, Барбара Дж.; Бейтс, Имельда; Лаффан, Майк А. (11 августа 2016 г.). «Глава 4: Методы приготовления и окрашивания пленок крови и костного мозга». Практическая гематология Дэйси и Льюиса (12-е изд.). Elsevier Науки о здоровье. ISBN 978-0-7020-6925-3 .
- ^ Jump up to: а б с д Хоробин, Р.В. (2011). «Как работают пятна Романовского и почему они остаются ценными, включая предлагаемый универсальный механизм окрашивания Романовского и рациональную схему устранения неполадок». Биотехника и гистохимия . 86 (1): 36–51. дои : 10.3109/10520295.2010.515491 . ISSN 1052-0295 . ПМИД 21235292 . S2CID 207513741 .
- ^ Jump up to: а б с д и ж г час я дж к л м н тот п Маршалл, ПН (1978). «Окраски типа Романовского в гематологии». Гистохимический журнал . 10 (1): 1–29. дои : 10.1007/BF01003411 . ПМИД 74370 . S2CID 37939306 .
- ^ Jump up to: а б с д Ли, Цигуй; Вейна, Питер Дж.; Миллер, Р. Скотт (2012). «Анализ малярии». Лабораторная гематологическая практика . стр. 626–637. дои : 10.1002/9781444398595.ch48 . ISBN 9781444398595 .
- ^ Jump up to: а б с д и ж г Безруков, А.В. (2017). «Окрашивание Романовского, эффект Романовского и мысли по вопросу о научном приоритете». Биотехника и гистохимия . 92 (1): 29–35. дои : 10.1080/10520295.2016.1250285 . ISSN 1052-0295 . ПМИД 28098484 . S2CID 37401579 .
- ^ Рибатти, Доменико (2018). «Окрашивание тучных клеток: исторический обзор» . Международный архив аллергии и иммунологии . 176 (1): 55–60. дои : 10.1159/000487538 . hdl : 11586/227987 . ISSN 1018-2438 . ПМИД 29597213 .
- ^ Романовскiй Д.Л. (1890). "Къ вопросу о строенiи чужеядныхъ малярiи". Врачъ . 52 : 1171–1173.
- ^ Романовскiй Д.Л. Къ вопросу о паразитологіи и терапiи болотной лихорадки. Диссертацiя на степень доктора медицины. Спб. 1891 г., 118 с.
- ^ Романовский Д (1891). «К вопросу паразитологии и терапии малярии». Санкт-Петербургский медицинский еженедельник . 16 : 297–302, 307–315.
- ^ Хоробин Р.В., Уолтер К.Дж. (1987). «Понимание окрашивания Романовского. I: Эффект Романовского-Гимзы в мазках крови» . Гистохимия . 86 (3): 331–336. дои : 10.1007/bf00490267 . ПМИД 2437082 . S2CID 25723230 .
- ^ Воронцов-Дашков К.К. (2002). «Пятно Райта-Гимзы. Тайны раскрыты» . Клин Лаб Мед . 22 (1): 15–23. дои : 10.1016/S0272-2712(03)00065-9 . ПМИД 11933573 .
- ^ Jump up to: а б с д и ж г Виттекинд, Д.Х. (1983). «О природе окрашивания Романовского-Гимаза и его значении для цитохимии и гистохимии: общий взгляд». Гистохимический журнал . 15 (10): 1029–1047. дои : 10.1007/BF01002498 . ISSN 0018-2214 . ПМИД 6196323 . S2CID 23896062 .
- ^ Jump up to: а б с д Кукси, CJ (2017). «Особенности номенклатуры красителей. 8. Метиленовый синий, лазурный и фиолетовый». Биотехника и гистохимия . 92 (5): 347–356. дои : 10.1080/10520295.2017.1315775 . ISSN 1052-0295 . ПМИД 28598697 . S2CID 46746062 .
- ^ Jump up to: а б с д и ж г час я дж к л м н тот Лилли, Ральф Дугалл (1977). Биологические пятна HJ Conn (9-е изд.). Балтимор: Уильямс и Уилкинс. стр. 692с.
- ^ Гудпасчер, EW (1917). «Кислый раствор полихрома-метиленового синего для обычного и специального окрашивания» . Журнал Американской медицинской ассоциации . LXIX (12): 998. doi : 10.1001/jama.1917.25910390002016c . Проверено 16 января 2024 г.
- ^ Jump up to: а б с д и ж г час я дж Лилли, РД (1978). «Романовский-Малаховский окрашивает так называемое пятно Романовского: использование Малаховским в 1891 году щелочного полихромного метиленового синего для лечения малярийных плазмодий». Технология окраски . 53 (1): 23–28. дои : 10.3109/10520297809111439 . ПМИД 78544 .
- ^ Jump up to: а б Райт Дж. Х. (1902). «Быстрый метод дифференциального окрашивания пленок крови и малярийных паразитов» . J Med Res . 7 (1): 138–144. ПМК 2105822 . ПМИД 19971449 .
- ^ Jump up to: а б с д и ж г час я дж к л м н тот п Крафтс, КП; Хемпельманн, Э; Олексин, Б.Я. (2011). «Пурпурный цвет: от королевской власти к лаборатории, с извинениями перед Малаховским». Биотехника и гистохимия . 86 (1): 7–35. дои : 10.3109/10520295.2010.515490 . ISSN 1052-0295 . ПМИД 21235291 . S2CID 19829220 .
- ^ Jump up to: а б с Гейтенби, Дж.Б.; Балки, HW (1950). Vade-Mecum микротомиста (11-е изд.). Филадельфия: Компания Blackstone.
- ^ Jump up to: а б с Воронцов-Дашкофф К.К. (2002). «Пятно Райта-Гимзы. Тайны раскрыты» . Клин Лаб Мед . 22 (1): 15–23. дои : 10.1016/S0272-2712(03)00065-9 . ПМИД 11933573 .
- ^ Jump up to: а б Лейшман В. (1901). «Заметка о простом и быстром методе окрашивания по Романовскому малярийных и других мазков крови» . Бр Мед Дж . 2 (2125): 757–758. дои : 10.1136/bmj.2.2125.757 . ПМК 2507168 . ПМИД 20759810 .
- ^ Jump up to: а б с Петерсон, Пауэрс; Макнил, Шейла; Гулати, Джин (2012). «Клеточный морфологический анализ периферической крови». Лабораторная гематологическая практика . стр. 10–25. дои : 10.1002/9781444398595.ch2 . ISBN 9781444398595 .
- ^ Крафтс, КП; Памбучиан, ЮВ (2011). «Окрашивание Романовского в цитопатологии: история, преимущества и ограничения». Биотехника и гистохимия . 86 (2): 82–93. дои : 10.3109/10520295.2010.515492 . ISSN 1052-0295 . ПМИД 21395493 . S2CID 5168332 .
- ^ Эрлих П. (1880). «Методологический вклад в физиологию и патологию различных форм лейкоцитов» (PDF) . З Клин Мед . 1 :553-560. Архивировано из оригинала (PDF) 19 июля 2011 г.
- ^ Jump up to: а б с Брейсгедл, Брайан (1986). История микротехники: эволюция микротома и развитие подготовки тканей (2-е изд.). Science Heritage Ltd. Линкольнвуд, Иллинойс: ISBN 978-0940095007 .
- ^ Jump up to: а б Крафтс, Кристина; Хемпельманн, Эрнст; Олексин, Барбара Дж. (2011). «В поисках малярийного паразита». Паразитологические исследования . 109 (3): 521–529. дои : 10.1007/s00436-011-2475-4 . ISSN 0932-0113 . ПМИД 21660627 . S2CID 1823696 .
- ^ Jump up to: а б с д и ж Воронцов-Дашкофф, Кристина Полин Крафтс (1993). «Пятно Эрлиха-Хензинского-Плена-Малаховского-Романовского-Нохта-Дженнера-Мэй-Грюнвальда-Лейшмана-Рейтера-Райта-Гимзы-Лилли-Роу-Уилкокса: тайна разворачивается». Клиники лабораторной медицины . 13 (4): 759–771. дои : 10.1016/S0272-2712(18)30406-2 . ISSN 0272-2712 . ПМИД 7508837 .
- ^ Гимза Г (1904). «Упрощение и совершенствование моего метода окрашивания метилен азуром, метиленовым синим и эозином для окрашивания хроматина по Романовскому-Ноху». Centralbl F Bakt и т . д . 37 :308-311.