✖


Jump to content

Лолин алкалоид

(Перенаправлено из алкалоидов Лолина )
Рисунок 1. Общая структура алкалоидов лолина, образующихся в травах, зараженных грибами комплекса Epichloë/Neotyphodium (epichloae endphytes); R' и R'' обозначают переменные заместители , которые могут включать метильные , формильные и ацетильные группы, приводящие к появлению различных видов лолина.

Алкалоид лолин является членом группы 1-аминопирролизидинов (часто называемых лолинами ), которые представляют собой биологически активные природные продукты с несколькими различными биологическими и химическими свойствами. Лолины представляют собой инсектицидные и отпугивающие насекомых соединения, которые вырабатываются в травах , зараженных эндофитными грибковыми симбионтами рода Epichloë ( анаморфный вид: Neotyphodium ). Лолины повышают устойчивость трав, инфицированных эндофитами, к травоядным насекомым , а также могут защищать инфицированные растения от стрессов окружающей среды, таких как засуха и пространственная конкуренция. Это алкалоиды , органические соединения, содержащие основные атомы азота. Основная химическая структура лолинов включает насыщенное пирролизидиновое кольцо, первичный амин у углерода C-1 и внутренний эфирный мостик — отличительную особенность лолинов, что редко встречается в органических соединениях — соединяющий два удаленных кольца (C- 2 и С-7) углерода (см. рис. 1). Различные заместители у амина C-1, такие как метильная , формильная и ацетильная группы, дают виды лолина, которые имеют переменные биологическая активность против насекомых. Помимо эндофитно-травяных симбионтов, алкалоиды лолина обнаружены и у некоторых других видов растений ; а именно Adenocarpus виды (семейство Fabaceae ) и Argyreia mollis (семейство Convolvulaceae ).

Открытие

[ редактировать ]

Член алкалоидов лолина был впервые выделен из травы Lolium temulentum и его элементный состав определен в 1892 году. Первоначально он был назван темулин , а позже переименован в норлолин . (Отзыв Шардла и др. (2007).) [ 1 ] Исследования 1950-х и 1960-х годов, проведенные российскими исследователями, установили название лолин и выявили характерный 2,7-эфирный мостик в его молекулярной структуре. [ 1 ] С тех пор аналитические методы очистки и анализа лолинов были усовершенствованы, и несколько различных видов лолинов были идентифицированы во многих лолиумах и родственных им травах, зараженных эндофитами Epichloë/Neotyphodium (epichloae). [ 2 ] [ 3 ] Лолины отсутствуют у травяных растений, которые не содержат эндофитов эпихлои, и не все эпихлои производят лолины. [ 1 ] Из-за очень тесной связи растения и эндофита и трудностей с воспроизведением условий симбиоза in vitro долгое время было неизвестно, является ли гриб продуцентом лолинов или они синтезируются растением в ответ на инфекцию эндофита. В 2001 году было продемонстрировано, что эндофит Neotyphodium uncinatum производит лолины в некоторых химически определенных питательных средах . [ 4 ] что позволяет предположить, что эндофит также является продуцентом лолин в травяном растении. Лолины также были обнаружены на некоторых растениях нескольких семейств растений . [ 5 ] [ 6 ] что позволяет предположить более широкое распространение этих соединений в природе.

Механизм действия

[ редактировать ]

Лолины обладают инсектицидным действием и отпугивают широкий спектр насекомых, включая виды Hemiptera , Coleoptera , Hymenoptera , Lepidoptera и Blattodea , такие как черемуховая овсяная тля (род Rhopalosiphum ), крупный клоп молочая ( Oncopeltus fasciatus ) и американский таракан ( Periplaneta americana ). [ 1 ] [ 7 ] LC 50 Значения N -формиллолина или N -ацетиллолина из экстрактов семян трав составляют 1-20 мкг/мл для тли и молочая, ухудшают развитие и плодовитость насекомых и вызывают избегание лолин-содержащих тканей травы. [ 7 ] Однако результаты тестов на кормление экстрактами трав иногда трудно интерпретировать из-за присутствия в этих экстрактах других эндофитных алкалоидов. [ 1 ] точные механизмы инсектицидного действия лолинов неизвестны. Лолины могут быть нейротоксичными для насекомых, а различия в химических группах C-1-амина приводят к разным уровням токсичности для насекомых; например, N -формиллолин (см. рис. 2), который в более высоких концентрациях встречается в зараженных эндофитами травянистых растениях, [ 7 ] обладает большей токсичностью для насекомых, чем некоторые другие лолины, которые встречаются в травяных растениях в более низких концентрациях. [ 1 ]

Рисунок 2. N -формиллолин, один из наиболее распространенных лолинов в травах, инфицированных эндофитами.

Биологическая активность лолинов демонстрирует некоторую неожиданную изменчивость в зависимости от их концентрации в тканях травы. Например, эндофит овсяницы тростниковой N. coenophialum связан с повышенной устойчивостью к мигрирующей корневой эндопаразитической нематоде Pratylenchus scribneri . В низких концентрациях N -формиллолин служит хемоаттрактантом для P. scribneri , но действует как репеллент в более высоких концентрациях. [ 8 ] Однако алкалоиды спорыньи также оказывают репеллентное и обездвиживающее действие на P. scribneri . [ 8 ] а эндофит многолетнего райграса, лишенный лолинов и генетически модифицированный так, чтобы не производить алкалоидов спорыньи, проявляет устойчивость к этой нематоде. [ 9 ] Таким образом, относительная важность алкалоидов лолина и спорыньи для устойчивости к нематодам остается неясной.

Многие эндофиты epichloae, в том числе N. coenophialum, симбиотические с Lolium arundinaceum (син. Festuca arundinacea , овсяница тростниковая), также производят алкалоиды спорыньи, токсичные для травоядных млекопитающих. Алкалоиды спорыньи встречаются в растении в относительно низких концентрациях, и их часто трудно обнаружить аналитически. Напротив, лолины часто накапливаются в тканях травы в очень высоких концентрациях. [ 1 ] и поэтому первоначально были также связаны с токсичностью для травоядных млекопитающих . [ 10 ] В частности, считалось, что лолины ответственны за токсические симптомы, называемые типчаковым токсикозом, которые проявляются при выпасе скота на травах, зараженных N. coenophialum . [ 10 ] ответственны только алкалоиды спорыньи, продуцируемые эндофитами . Однако впоследствии было показано, что за симптомы токсикоза овсяницы (или летнего синдрома ) [ 11 ] а не лолины, которые даже в высоких дозах оказывают лишь очень незначительное физиологическое воздействие на кормящихся млекопитающих. [ 12 ] Другая группа алкалоидов, алкалоиды сенецио-типа , вырабатываются различными растениями и, как и лолины, алкалоиды сенецио обладают пирролизидиновой кольцевой структурой. Однако, в отличие от лолинов, алкалоиды сенецио проявляют сильную гепатотоксичность . [ 13 ] из-за двойной связи между C-1 и C-2 в их кольцевой структуре. [ 13 ] Эта двойная связь отсутствует у лолинов, что объясняет отсутствие гепатотоксичности этой группы соединений. Было высказано предположение, что лолины подавляют прорастание семян или рост других растений ( аллелопатия ). [ 14 ] и для повышения устойчивости зараженных трав к засухе , но такие эффекты не были подтверждены в более естественных условиях выращивания или в местах обитания. [ 1 ] [ 15 ]

Производство и распространение на травяном заводе

[ редактировать ]
Рисунок 3. Neotyphodium coenophialum Гифы в ткани листьев овсяницы высокорослой. Лолины обычно накапливаются в симбиозе N. coenophialum и овсяницы тростниковой, обеспечивая защиту от насекомых и других стрессов окружающей среды. [ 1 ]

Лолины производятся в результате нескольких травяно-эндофитных симбиозов с участием видов epichloae, часто вместе с другими биологически активными метаболитами, включая алкалоиды спорыньи и индольные дитерпеноиды , а также необычный алкалоид пирролопиразина, перамин , который не встречается в других биологических сообществах или организмах. Однако лолины производятся в количествах, которые могут превышать 10 мг/г ткани травы (в диапазоне от 2 до 20 000 мкг/г). [ 1 ] [ 16 ] ), превышая концентрации других эндофитных алкалоидов более чем в 1000 раз. [ 7 ] Лолины, продуцируемые в травах Lolium pratense (син. Festuca pratensis , овсяница луговая) и овсяницы тростниковой, зараженных N. uncinatum и N. coenophialum (см. рис. 3), соответственно, имеют различную концентрацию в тканях травы. [ 2 ] [ 16 ] Более высокие концентрации лолина (100–1000 мкг/г) присутствуют в семенах и молодых тканях листьев, а уровни концентрации лолинов демонстрируют сезонные изменения по всему растению. [ 16 ] Периодическое появление тканей с высокими концентрациями лолина, таких как цветущие стебли и семена, способствует этим сезонным колебаниям. [ 16 ] Концентрации лолина часто увеличиваются в тканях травы, отросших после дефолиации и обрезки растений, что указывает на индуцируемый механизм защитной реакции, в котором участвуют оба симбиотических партнера. Однако это увеличение, по-видимому, связано с более высокими уровнями лолина в молодых листьях по сравнению со старыми листьями. [ 17 ] но также сообщалось об увеличении количества лолина, напоминающем индуцируемую защиту растений. [ 18 ] Изменение концентрации лолина в зависимости от стадии развития конкретных тканей травы. [ 16 ] предполагает регуляцию распределения in plantaloline , обеспечивая большую защиту вновь выращенных или эмбриональных тканей от атак насекомых. [ 1 ] Удивительно, но экзогенное применение растительного сигнального соединения метилжасмоната , которое обычно сигнализирует о хищничестве со стороны насекомых, снижает экспрессию генов лолинов. [ 19 ] Факторы, контролирующие выработку лолина, также различаются среди тканей травы, инфицированных эндофитами: в то время как поставляемые растениями аминокислоты, которые являются предшественниками лолина, ограничивают накопление лолина во многих тканях травы, [ 17 ] их продукция в тканях, несущих внешний рост мицелия для размножения грибов ( стромах ), регулируется экспрессией генов лолина. [ 20 ]

Биосинтез

[ редактировать ]

Лолины структурно сходны с пирролизидиновыми алкалоидами, вырабатываемыми многими растениями, особенно с нециновым кольцом, содержащим третичный амин . Это привело к ранней гипотезе о том, что биосинтез лолинов подобен биосинтезу растительных пирролизидинов, которые синтезируются из полиаминов . [ 21 ] Однако исследования по кормлению мечеными изотопом углерода аминокислотами или родственными молекулами в чистых культурах гриба-продуцента лолина N. uncinatum недавно показали, что путь алкалоида лолина фундаментально отличается от пути пирролизидинов растений. [ 1 ] Основная химическая структура аминокислот лолина формируется в несколько стадий биосинтеза из предшественников , L -пролина и L -гомосерина . [ 22 ] На предлагаемом первом этапе биосинтеза лолина эти две аминокислоты соединяются в реакции конденсации, связывающей γ-углерод в гомосерине со вторичным амином в пролине в реакции типа PLP ферментативно-катализируемой с образованием промежуточного соединения лолина, N -( 3-амино-3-карбокси)пропилпролин (НАЦФП). [ 23 ] Считается, что дальнейшие этапы биосинтеза лолина протекают с последовательным катализируемым PLP-ферментом и окислительным декарбоксилированием карбоксильных групп в гомосериновых и пролиновых фрагментах соответственно, циклизацией с образованием основной кольцевой структуры лолина и окислением C-2 и C. -7 атомов углерода, образуя кислородный мостик, охватывающий два пирролизидиновых кольца. [ 1 ] [ 24 ]

Генетические исследования согласуются с путями биосинтеза, установленными в экспериментах по кормлению предшественниками. [ 1 ] Исследования на основе AFLP с использованием скрещивания штаммов эндофита Epichloë festucae , которые различаются по способности производить лолины, показывают, что производство лолинов и защита травы Lolium giganteum от питания тлей Rhopalosiphum padi разделяются по менделевскому принципу. мода. [ 25 ] Наличие единственного локуса продукции лолина было позже подтверждено обнаружением того, что эндофиты эпихлои, продуцирующие лолин, содержат кластер генов ( кластер LOL ) по меньшей мере из одиннадцати генов. [ 20 ] [ 26 ] Гены LOL значительно и скоординированно активируются во время производства алкалоидов лолина. [ 24 ] а экспериментальные генетические тесты, включающие манипулирование выбранными генами LOL посредством РНК-интерференции и нокаута генов, напрямую подтвердили участие двух генов LOL в биосинтезе лолинов. [ 27 ] [ 28 ] Эти тесты и сходство пептидных последовательностей белков, кодируемых этими генами, с известными ферментами указывают на то, что один ген, называемый lolC , вероятно, необходим для первого этапа биосинтеза лолина (конденсация L -пролина и L -гомосерина для образования NACPP). , [ 27 ] и другой ген, LolP , вероятно, кодирующий монооксигеназу цитохрома P450 , для оксигенации одной метильной группы амина C-1 N -метиллолина, который дает наиболее распространенный лолин во многих симбионтах травы и эндофитов, N -формиллолин. [ 28 ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Jump up to: а б с д и ж г час я дж к л м н Шардл К.Л., Гроссман Р.Б., Нагабхиру П., Фолкнер-младший, Маллик У.П. (2007). «Лолиновые алкалоиды: валюты мутуализма». Фитохимия . 68 (7): 980–996. doi : 10.1016/j.phytochem.2007.01.010 . ПМИД   17346759 .
  2. ^ Jump up to: а б Йейтс, С.Г.; Петроски, Р.Дж.; Пауэлл Р.Г. (1990). «Анализ лолиновых алкалоидов в овсянице тростниковой, зараженной эндофитами, методом капиллярной газовой хроматографии». Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии . 38 : 182–185. дои : 10.1021/jf00091a040 .
  3. ^ Сигел, MR; Защелка, ГЦМ.; Буш, LP; Фаннин, ФФ; Роуэн, Д.; Таппер, бакалавр; Бэкон, CW; Джонсон, MC (1990). «Травы, зараженные грибковыми эндофитами: накопление алкалоидов и реакция тли». Журнал химической экологии . 16 (12): 3301–3315. дои : 10.1007/BF00982100 . ПМИД   24263431 . S2CID   12377076 .
  4. ^ Бланкеншип Дж.Д., Спиринг М.Дж., Уилкинсон Х.Х., Фаннин Ф.Ф., Буш Л.П., Шардл К.Л. (2001). «Продуцирование алкалоидов лолина эндофитом травы Neotyphodium uncinatum в определенных средах». Фитохимия . 58 (3): 395–401. дои : 10.1016/S0031-9422(01)00272-2 . ПМИД   11557071 .
  5. ^ Тоферн, Б; Калога, М; Витте, Л; Хартманн, Т; Эйх, Э. (1999). «Наличие алкалоидов лолина в Argyreia mollis (Convolvulaceae)». Фитохимия . 51 (8): 1177–1180. дои : 10.1016/S0031-9422(99)00121-1 .
  6. ^ Вин, Дж; Грейнвальд, Р; Канто, П; Витте, Л; Чиган, ФК (1992). «Алкалоиды сортов Adenocarpus hispanicus (Lam.) DC» . Журнал естественных исследований . 47 (5–6): 341–345. дои : 10.1515/znc-1992-0604 . S2CID   88333079 .
  7. ^ Jump up to: а б с д Дальман Д.Л., Эйхензер Х., Сигел М.Р. (1991). «Химические перспективы взаимодействия эндофитов и трав и их значение для травоядных насекомых». В Барбоза П., Кришник В.А., Джонс К.Г. (ред.). Микробное опосредование взаимоотношений растений и травоядных . Джон Уайли и сыновья. стр. 227–252. ISBN  0-471-61324-Х .
  8. ^ Jump up to: а б Басетти А., Снук М., Гленн А., Ноу Дж., Нагабхиру П., Бэкон С. (2009). «Нарушение хемотаксиса у Pratylenchus scribneri экстрактами корней овсяницы тростниковой и алкалоидами» . Журнал химической экологии . 35 (7): 844–850. дои : 10.1007/s10886-009-9657-x . ПМИД   19575265 . S2CID   6435250 .
  9. ^ Панакчоне Д.Г., Коткон Дж.Б., Шардл К.Л., Джонсон Р.Д., Мортон Дж.Б. (2006). «Алкалоиды спорыньи не необходимы для подавления популяции пораженной нематодой Pratylenchus scribneri, связанной с эндофитными грибами, на райграсе многолетнем». Нематология . 8 (4): 583–590. дои : 10.1163/156854106778614074 .
  10. ^ Jump up to: а б Джексон, Дж.А.; Хемкен, RW; Болинг, Дж.А.; Хармон, Р.Дж.; Бакнер, Р.К.; Буш, LP (1984). «Алкалоиды лолина в сене и семенах овсяницы высокорослой и их связь с летним токсикозом овсяницы» . Журнал молочной науки . 67 (1): 102–109. doi : 10.3168/jds.s0022-0302(84)81272-2 . ПМИД   6707297 .
  11. ^ Портер Дж. К., Томпсон Ф. Н. (1992). «Влияние овсяничного токсикоза на воспроизводство сельскохозяйственных животных» . Журнал зоотехники . 70 (5): 1594–1603. дои : 10.2527/1992.7051594x . ПМИД   1526927 . Архивировано из оригинала 6 сентября 2008 г. Проверено 14 мая 2009 г.
  12. ^ Джексон Дж.А., Варни Д.Р., Петроски Р.Дж., Пауэлл Р.Г., Буш Л.П., Сигел М.Р., Хемкен Р.В., Завос П.М. (1996). «Физиологические реакции крыс, которых кормили лолином и алкалоидами спорыньи из инфицированной эндофитами овсяницы тростниковой». Лекарственная и химическая токсикология . 19 (1–2): 85–96. дои : 10.3109/01480549609002198 . ПМИД   8804555 .
  13. ^ Jump up to: а б Фу П.П., Ся Ц., Линь Г., Чжоу М.В. (2004). «Пирролизидиновые алкалоиды - генотоксичность, ферменты метаболизма, метаболическая активация и механизмы». Обзоры метаболизма лекарств . 36 (1): 1–55. дои : 10.1081/DMR-120028426 . ПМИД   15072438 . S2CID   13746999 .
  14. ^ Петроски Р.Дж.; Дорнбос, ДЛ; Пауэлл Р.Г. (1990). «Прорастание и ингибирование роста райграса однолетнего (Lolium multiflorum L.) и люцерны (Medicago sativa L.) алкалоидами лолина и синтетическими производными N-ациллолина». Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии . 38 (8): 1716–1718. дои : 10.1021/jf00098a019 .
  15. ^ Буш Л.П., Уилкинсон Х.Х., Шардл К.Л. (1997). «Биопротекторные алкалоиды эндофитных симбиозов травяных грибов» . Физиология растений . 114 (1): 1–7. дои : 10.1104/стр.114.1.1 . ПМК   158272 . ПМИД   12223685 .
  16. ^ Jump up to: а б с д и Юстус, М; Витте, Л; Хартманн, Т. (1997). «Уровни и распределение в тканях алкалоидов лолина в инфицированной эндофитами Festuca pratensis». Фитохимия . 44 : 51–57. дои : 10.1016/S0031-9422(96)00535-3 .
  17. ^ Jump up to: а б Чжан, DX; Нагабхиру, П; Шардл КЛ (2009). «Регулирование химической защиты от травоядных, продуцируемых симбиотическими грибами травянистых растений» . Физиология растений . 150 (2): 1072–1082. дои : 10.1104/стр.109.138222 . ПМК   2689992 . ПМИД   19403726 .
  18. ^ Гонтье, Ти Джей; Салливан, Ти Джей; Браун, КЛ; Вурцель, Б.; Лаваль, Р.; ван ден Овер, К.; Бьюкен, З.; Бультман, Т (2008). «Эндофит, образующий строму, Epichloë gleceriae обеспечивает индуцируемую ранами устойчивость травоядных животных к своему травяному хозяину». Ойкос . 117 (4): 629–633. дои : 10.1111/j.0030-1299.2008.16483.x .
  19. ^ Саймонс Л., Бультман Т.Л., Салливан Т.Дж. (2008). «Влияние метилжасмоната и эндофитного гриба на устойчивость растений к травоядным насекомым». Журнал химической экологии . 34 (12): 1511–7. дои : 10.1007/s10886-008-9551-y . ПМИД   18925382 . S2CID   7083646 .
  20. ^ Jump up to: а б Чжан, DX; Нагабхиру П; Бланкеншип Джей Ди; Шардл КЛ (2010). «Регулируются ли уровни лолиновых алкалоидов в эндофитах травы экспрессией генов или наличием субстрата?» . Сигнализация и поведение растений . 5 (11): 1419–22. дои : 10.4161/psb.5.11.13395 . ПМК   3115243 . ПМИД   21051952 .
  21. ^ Буш, LP; Фаннин, ФФ; Сигел, MR; Дальман, Д.Л.; Бертон, HR (1993). «Химия, возникновение и биологические эффекты насыщенных пирролизидиновых алкалоидов, связанных с взаимодействием эндофитов и трав». Сельское хозяйство, экосистемы и окружающая среда . 44 (1–4): 81–102. дои : 10.1016/0167-8809(93)90040-В .
  22. ^ Бланкеншип Дж.Д., Хауснехт Дж.Б., Пал С., Буш Л.П., Гроссман Р.Б., Шардл К.Л. (2005). «Биосинтетические предшественники грибных пирролизидинов, лолиновых алкалоидов». ХимБиоХим . 6 (6): 1016–1022. дои : 10.1002/cbic.200400327 . ПМИД   15861432 . S2CID   13461396 .
  23. ^ Фолкнер-младший, Хуссаини С.Р., Бланкеншип Дж.Д., Пал С., Бранан Б.М., Гроссман Р.Б., Шардл К.Л. (2006). «О последовательности образования связей в биосинтезе лолиновых алкалоидов». ХимБиоХим . 7 (7): 1078–1088. дои : 10.1002/cbic.200600066 . ПМИД   16755627 . S2CID   34409048 .
  24. ^ Jump up to: а б Чжан Д.С., Стромберг А.Дж., Спиринг М.Дж., Шардл К.Л. (2009). «Совместно регулируемая экспрессия генов биосинтеза алкалоидов лолина в культурах Neotyphodium uncinatum». Грибковая генетика и биология . 46 (8): 517–530. дои : 10.1016/j.fgb.2009.03.010 . ПМИД   19366635 .
  25. ^ Уилкинсон Х.Х., Сигел М.Р., Бланкеншип Дж.Д., Мэллори А.С., Буш Л.П., Шардл К.Л. (2000). «Вклад грибных алкалоидов лолина в защиту от тли при травяно-эндофитном мутуализме». Молекулярные растительно-микробные взаимодействия . 13 (10): 1027–1033. дои : 10.1094/MPMI.2000.13.10.1027 . ПМИД   11043464 .
  26. ^ Кутил Б.Л., Гринвальд С., Лю Г., Спиринг М.Дж., Шардл К.Л., Уилкинсон Х.Х. (2007). «Сравнение кластеров генов алкалоидов лолина в грибковых эндофитах: прогнозирование мотивов корегуляторной последовательности и истории эволюции». Грибковая генетика и биология . 44 (10): 1002–10. дои : 10.1016/j.fgb.2007.04.003 . ПМИД   17509914 .
  27. ^ Jump up to: а б Спиринг М.Дж., Мун К.Д., Уилкинсон Х.Х., Шардл К.Л. (2005). «Кластеры генов инсектицидных алкалоидов лолина у травяного эндофитного гриба Neotyphodium uncinatum» . Генетика . 169 (3): 1403–1414. doi : 10.1534/genetics.104.035972 . ПМЦ   1449547 . ПМИД   15654104 .
  28. ^ Jump up to: а б Спиринг М.Дж., Фолкнер-младший, Чжан Д.С., Мачадо С., Гроссман Р.Б., Шардл К.Л. (2008). «Роль монооксигеназы цитохрома P450 LolP в биосинтезе алкалоидов лолина». Грибковая генетика и биология . 45 (9): 1307–1314. дои : 10.1016/j.fgb.2008.07.001 . ПМИД   18655839 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Loline_alkaloid&oldid=1171074595"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 35e8ff05c1fa34c04c4fc7b2de0c8142__1692386280
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/35/42/35e8ff05c1fa34c04c4fc7b2de0c8142.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Loline alkaloid - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)