Автономно реплицирующаяся последовательность

Автономно реплицирующаяся последовательность ( ARS ) содержит точку начала репликации в дрожжей геноме . Он содержит четыре региона (A, B1, B2 и B3), названные в порядке их влияния на стабильность плазмиды . A-домен высококонсервативен, любая мутация отменяет функцию происхождения. Мутации B1, B2 и B3 уменьшат, но не помешают функционированию источника.

Элемент A высококонсервативен и состоит из консенсусной последовательности:

5'- Т/АТТТАЙРТТТТ/А -3'

(где Y представляет собой пиримидин , а R представляет собой пурин ). Когда этот элемент мутирует, ARS теряет всякую активность.

Как видно выше, ARS значительно богаты АТ, что позволяет репликативным белкам легко разрушать Н-связи в этой области. Белковый комплекс ORC ( комплекс распознавания происхождения ) связывается с ARS на протяжении всего клеточного цикла , обеспечивая репликативным белкам доступ к ARS.

Мутационный анализ элементов ARS дрожжей показал, что любая мутация в областях B1, B2 и B3 приводит к снижению функции элемента ARS. Мутация в регионе А приводит к полной потере функции.

Плавление ДНК происходит внутри домена B2, индуцированное присоединением фактора связывания ARS 1 к B3. Домен A1 и B1 связывается с комплексом распознавания происхождения.

Чтобы идентифицировать эти последовательности, мутанты дрожжей, неспособные синтезировать гистидин, были трансформированы плазмидами, содержащими ген His и случайные фрагменты генома дрожжей. Если фрагмент генома содержал точку начала репликации, клетки могли расти в среде без гистидина. Эти последовательности были названы автономно реплицирующими последовательностями, поскольку они реплицировались и наследовались потомством без интеграции в хромосому хозяина .