Гепараназа

HPSE
Доступные структуры
ПДБ	Поиск ортологов: PDBe RCSB
showСписок идентификационных кодов PDB
	5E97, 5E9B, 5E8M, 5E98, 5E9C
Идентификаторы
Псевдонимы	HPSE , HPA, HPA1, HPR1, HPSE1, HSE1, гепараназа
Внешние идентификаторы	Опустить : 604724 ; МГИ : 1343124 ; Гомологен : 68528 ; GeneCards : HPSE ; ОМА : HPSE – ортологи
showМестоположение гена ( человек )
Chr.	Chromosome 4 (human)
End	83,335,153 bp
showМестоположение гена ( Мышь )
Chr.	Chromosome 5 (mouse)
End	100,867,582 bp
show экспрессии РНК Характер
	Top expressed in
	monocyte; ; gums; ; gingival epithelium; ; blood; ; human penis; ; oral cavity; ; granulocyte; ; germinal epithelium; ; gonad; ; minor salivary glands;
	Top expressed in
	iris; ; stria vascularis; ; mesenteric lymph nodes; ; blood; ; calvaria; ; lumbar spinal ganglion; ; stroma of bone marrow; ; esophagus; ; otolith organ; ; set of bones of free part of upper limb;
	More reference expression data
	More reference expression data
showГенная онтология
Molecular function	protein dimerization activity; heparanase activity; beta-glucuronidase activity; hydrolase activity, acting on glycosyl bonds; protein binding; syndecan binding; hydrolase activity;
Cellular component	intracellular membrane-bounded organelle; membrane; nucleoplasm; lysosomal membrane; lysosomal lumen; membrane raft; lysosome; nucleus; extracellular region; specific granule lumen; extracellular matrix;
Biological process	positive regulation of osteoblast proliferation; positive regulation of protein kinase B signaling; heparan sulfate proteoglycan catabolic process; regulation of hair follicle development; positive regulation of hair follicle development; wound healing; vascular wound healing; cell adhesion; positive regulation of blood coagulation; proteoglycan metabolic process; glycosaminoglycan catabolic process; positive regulation of vascular endothelial growth factor production; cell-matrix adhesion; angiogenesis involved in wound healing; neutrophil degranulation;
	Sources:Amigo / QuickGO
hideОртологи
	10855
	15442
	ENSG00000173083
	ENSMUSG00000035273
	Q9Y251
	Q6YGZ1
	НМ_006665 ; НМ_001098540 ; НМ_001166498 ; НМ_001199830
	НМ_152803
	НП_001092010 ; NP_001159970 ; НП_001186759 ; НП_006656
	НП_690016
	Викиданные
Просмотр/редактирование человека	Просмотр/редактирование мыши

Гепараназа , также известная как HPSE , представляет собой фермент , который действует как на клеточной поверхности , так и внутри внеклеточного матрикса, расщепляя полимерные молекулы гепарансульфата с более короткой цепью на олигосахариды . ^{[ 5 ]}^{[ 6 ]}

Синтез и структура

Белок первоначально синтезируется в неактивной форме прогепараназы 65 кДа в аппарате Гольджи и переносится в поздние эндосомы / лизосомы для транспорта на клеточную поверхность. В лизосоме он протеолитически перерабатывается в активную форму. Протеолитическая обработка приводит к получению трех продуктов:

линкерный пептид
фрагмент прогепараназы 8 кДа и
фрагмент прогепараназы массой 50 кДа

Фрагменты 8 кДа и 50 кДа образуют гетеродимер , и именно этот гетеродимер составляет активную молекулу гепараназы. ^{[ 7 ]} Линкерный белок назван так потому, что перед его вырезанием он физически связывает фрагменты прогепараназы массой 8 и 50 кДа. Полное удаление линкерного пептида, по-видимому, является предпосылкой полной активации фермента гепараназы.

Доступны кристаллические структуры как прогепараназы, так и зрелой гепараназы, показывающие, что линкерный пептид образует большой спиральный домен, который блокирует взаимодействие молекул гепарансульфата с гепараназой. ^{[ 8 ]} При удалении линкера на поверхности фермента появляется обширная щель, содержащая активный центр гепараназы . ^{[ 9 ]}

Функция

Гепараназа обладает эндогликозидазной активностью и расщепляет полимерные молекулы гепарансульфата во внутренних участках полимерной цепи. ^{[ 10 ]} Фермент разрушает гепарансульфатный каркас базальной мембраны и внеклеточного матрикса. Это также связано с воспалительным процессом, поскольку способствует экстравазации активированных Т-лимфоцитов. ^{[ 11 ]} В физиологии поверхности глаза эта активность действует как переключатель выключения/включения просекреторного митогена лакритина . Лакритин связывает гепарансульфат-протеогликан синдекан-1 клеточной поверхности только в присутствии активной гепараназы. Гепараназа частично или полностью расщепляет гепарансульфат, открывая сайт связывания в N-концевых 50 аминокислотах синдекана-1 . ^{[ 12 ]}

Клиническое значение

Успешное проникновение в слой эндотелиальных клеток , выстилающий внутреннюю поверхность кровеносных сосудов, является важным процессом в формировании метастазов опухоли, передающихся через кровь . гепарансульфата Протеогликаны являются основными компонентами этого слоя, и было показано, что повышенный метастатический потенциал соответствует повышенной активности гепараназы для ряда клеточных линий . ^{[ 13 ]}^{[ 14 ]} Из-за вклада активности гепараназы в метастазирование, а также в ангиогенез, ингибирование активности гепараназы считается потенциальной мишенью для противораковой терапии. ^{[ 15 ]}^{[ 16 ]}

Было показано, что гепараназа способствует артериальному тромбозу и тромбозу стента на моделях мышей из-за расщепления антикоагулянтных сульфата гепарана протеогликанов . ^{[ 17 ]}

Ссылки

^ Jump up to: ^а ^б ^с GRCh38: Версия Ensembl 89: ENSG00000173083 – Ensembl , май 2017 г.
^ Jump up to: ^а ^б ^с GRCm38: выпуск Ensembl 89: ENSMUSG00000035273 – Ensembl , май 2017 г.
^ «Ссылка на Human PubMed:» . Национальный центр биотехнологической информации, Национальная медицинская библиотека США .
^ «Ссылка на Mouse PubMed:» . Национальный центр биотехнологической информации, Национальная медицинская библиотека США .
^ Влодавский И., Фридман Ю., Элкин М., Айнгорн Х., Ацмон Р., Ишай-Микаэли Р., Битан М., Паппо О., Перец Т., Михал И., Спектор Л., Пекер I (июль 1999 г.). «Гепараназа млекопитающих: клонирование генов, экспрессия и функция в прогрессировании опухоли и метастазировании». Природная медицина . 5 (7): 793–802. дои : 10.1038/10518 . ПМИД 10395325 . S2CID 38895589 .
^ Хьюлетт, доктор медицинских наук, Фриман С., Хамдорф Б.Дж., Бейкер Р.Т., Харрис М.Дж., Пэриш Ч.Р. (июль 1999 г.). «Клонирование гепараназы млекопитающих, важного фермента инвазии и метастазирования опухолей». Природная медицина . 5 (7): 803–9. дои : 10.1038/10525 . ПМИД 10395326 . S2CID 20125382 .
^ Влодавский И, Илан Н, Нагги А, Касу Б (2007). «Гепараназа: структура, биологические функции и ингибирование производными гепарина миметиками гепарансульфата». Курс. Фарм. Дес . 13 (20): 2057–2073. дои : 10.2174/138161207781039742 . ПМИД 17627539 .
^ Ву Л, Цзян Дж, Джин Ю, Каллемейн В.В., Куо CL, Артола М, Дай В., ван Элк С, ван Эйк М, ван дер Марель Г.А., Коде JDC, Флореа Б.И., Аэртс JMFG, Оверклифт HS, Дэвис Г.Дж. (2017) ). «Зонды на основе активности для функционального исследования сохранения β-глюкуронидаз» (PDF) . Нат. хим. Биол . 13 (8): 867–873. дои : 10.1038/nchembio.2395 . ПМИД 28581485 .
^ Ву Л, Виола СМ, Бжозовский А.М., Дэвис Г.Дж. (2015). «Структурная характеристика гепараназы человека дает представление о распознавании субстрата» . Нат. Структура. Мол. Биол . 22 (12): 1016–1022. дои : 10.1038/nsmb.3136 . ПМК 5008439 . ПМИД 26575439 .
^ Пикас Д.С., Ли Дж.П., Влодавский И., Линдал У. (1998). «Субстратная специфичность гепараназ гепатомы и тромбоцитов человека» . Ж. Биол. Хим . 273 (30): 18770–7. дои : 10.1074/jbc.273.30.18770 . ПМИД 9668050 .
^ Ирония-Тур-Синай, Михал; Влодавский, Израиль; Бен-Сассон, Шмуэль А; Пинто, Флоренция; Сичич, Камилла; Бреннер, Тальма (15 января 2003 г.). «Синтетическое полианионное соединение, имитирующее гепарин, подавляет воспаление центральной нервной системы». Журнал неврологических наук . 206 (1): 49–57. дои : 10.1016/S0022-510X(02)00318-0 . ISSN 0022-510X . ПМИД 12480085 . S2CID 46339755 .
^ Ма П., Бек С.Л., Рааб Р.В., Маккаун Р.Л., Коффман Г.Л., Утани А., Кирико В.Дж., Рапрегер А.С., Лори Г.В. (сентябрь 2006 г.). «Гепараназное дегликанирование синдекана-1 необходимо для связывания ограниченного эпителием просекреторного митогена лакритина» . Журнал клеточной биологии . 174 (7): 1097–106. дои : 10.1083/jcb.200511134 . ПМК 1666580 . ПМИД 16982797 .
^ Накадзима М., Иримура Т., Николсон Г.Л. (1988). «Гепараназы и метастазы опухолей». Дж. Селл. Биохим . 36 (2): 157–167. дои : 10.1002/jcb.240360207 . ПМИД 3281960 . S2CID 9743270 .
^ Влодавский И., Гольдшмидт О., Жариа Е., Ацмон Р., Рангини-Гватта З., Элькин М., Перец Т., Фридман Ю. (2003). «Гепараназа млекопитающих: участие в метастазировании рака, ангиогенезе и нормальном развитии». Семинары по биологии рака . 12 (2): 121–9. дои : 10.1006/scbi.2001.0420 . ПМИД 12027584 .
^ Ян, Цзянь Мин; Ван, Хуэй-цзюй; Ду, Линг; Хан, Сяомэй; Йе, Цзай-юань; Фанг, Ён; Тао, Хоу-цюань; Чжао, Чжуншэн; Чжоу, Юн-ле (25 января 2009 г.). «Скрининг и идентификация новых эпитопов В-клеток в гепараназе человека и их противоинвазивных свойств при гепатоцеллюлярной карциноме» . Иммунология рака, иммунотерапия . 58 (9): 1387–1396. дои : 10.1007/s00262-008-0651-x . ISSN 0340-7004 . ПМК 11030199 . ПМИД 19169879 . S2CID 19074169 .
^ Чжан, ИЮНЬ; Ян, Цзяньминь; Хан, Сяомэй; Чжао, Чжуншэн; Ду, Линг; Ю, Тонг; Ван, Хуэйджу (2012). «Сверхэкспрессия множественного антигенного пептида 2 гепараназы связана с плохим прогнозом при раке желудка: потенциал для терапии» . Письма об онкологии . 4 (1): 178–182. дои : 10.3892/ол.2012.703 . ПМЦ 3398369 . ПМИД 22807984 . Проверено 29 марта 2016 г.
^ Бейкер А.Б., Гибсон В.Дж., Колачалама В.Б., Голомб М., Индольфи Л., Спруэлл С., Захария Е., Влодавский И., Эдельман Э.Р. (2012). «Гепараназа регулирует тромбоз при повреждении сосудов и нарушении кровотока, вызванном стентом» . Дж Ам Колл Кардиол . 59 (17): 1551–60. дои : 10.1016/j.jacc.2011.11.057 . ПМК 4191917 . ПМИД 22516446 .

Дальнейшее чтение

Жария Е, Мецгер С, Чаек-Шауль Т, Фридман Ю, Паппо О, Авив А, Элькин М, Пекер И, Перец Т, Влодавский И (2002). «Молекулярные свойства и участие гепараназы в прогрессировании рака и морфогенезе молочной железы». Журнал биологии молочной железы и неоплазии . 6 (3): 311–22. дои : 10.1023/А:1011375624902 . ПМИД 11547900 . S2CID 13292455 .
Влодавский И., Аббуд-Жаррус Г., Элкин М., Нагги А., Касу Б., Сасишекаран Р., Илан Н. (2006). «Влияние гепараназа и гепарина на метастазирование рака и ангиогенез». Патофизиология. Гемост. Тромб . 35 (1–2): 116–27. дои : 10.1159/000093553 . ПМИД 16855356 . S2CID 25204783 .
ван ден Ховен М.Дж., Ропс А.Л., Влодавский И., Левидиотис В., Берден Дж.Х., ван дер Влаг Дж. (2007). «Гепараназа при заболеваниях клубочков» . Почки Int . 72 (5): 543–8. дои : 10.1038/sj.ki.5002337 . ПМИД 17519955 .
Маруяма К., Сугано С. (1994). «Олиго-кэпирование: простой метод замены кэп-структуры эукариотических мРНК олигорибонуклеотидами». Джин . 138 (1–2): 171–4. дои : 10.1016/0378-1119(94)90802-8 . ПМИД 8125298 .
Сузуки Ю, Ёситомо-Накагава К, Маруяма К, Суяма А, Сугано С (1997). «Создание и характеристика библиотеки кДНК, обогащенной по полной длине и по 5'-концу». Джин . 200 (1–2): 149–56. дои : 10.1016/S0378-1119(97)00411-3 . ПМИД 9373149 .
Влодавский И., Фридман Ю., Элкин М., Айнгорн Х., Ацмон Р., Ишай-Микаэли Р., Битан М., Паппо О., Перец Т., Михал И., Спектор Л., Пекер И. (1999). «Гепараназа млекопитающих: клонирование генов, экспрессия и функция в прогрессировании опухоли и метастазировании». Нат. Мед . 5 (7): 793–802. дои : 10.1038/10518 . ПМИД 10395325 . S2CID 38895589 .
Хьюлетт, доктор медицинских наук, Фриман С., Хамдорф Б.Дж., Бейкер Р.Т., Харрис М.Дж., Пэриш Ч.Р. (1999). «Клонирование гепараназы млекопитающих, важного фермента инвазии и метастазирования опухолей». Нат. Мед . 5 (7): 803–9. дои : 10.1038/10525 . ПМИД 10395326 . S2CID 20125382 .
Кусси П.Х., Халмс Дж.Д., Людвиг Д.Л., Патель С., Наварро ЕС, Седдон А.П., Джорджио Н.А., Болен П. (1999). «Клонирование и функциональная экспрессия гена гепараназы человека». Биохим. Биофиз. Рез. Общий . 261 (1): 183–7. дои : 10.1006/bbrc.1999.0962 . ПМИД 10405343 .
Тоёсима М., Накадзима М. (1999). «Человеческая гепараназа. Очистка, характеристика, клонирование и экспрессия» . Ж. Биол. Хим . 274 (34): 24153–60. дои : 10.1074/jbc.274.34.24153 . ПМИД 10446189 .
Демпси Л.А., Пламмер Т.Б., Кумбс С.Л., Платт Дж.Л. (2000). «Экспрессия гепараназы в инвазивных трофобластах и острое повреждение сосудов» . Гликобиология . 10 (5): 467–75. дои : 10.1093/гликоб/10.5.467 . PMID 10764835 .
Донг Дж., Кукула А.К., Тоёшима М., Накадзима М. (2000). «Геномная организация и хромосомная локализация недавно идентифицированного гена гепараназы человека». Джин . 253 (2): 171–8. дои : 10.1016/S0378-1119(00)00251-1 . ПМИД 10940554 .
Хьюлетт, доктор медицинских наук, Хорнби-младший, Омс С.Дж., Зуэгг Дж., Фриман С., Гриди Дж.Э., Пэриш Ч.Р. (2001). «Идентификация остатков активного центра прометастатической эндогликозидазы гепараназы». Биохимия . 39 (51): 15659–67. дои : 10.1021/bi002080p . ПМИД 11123890 .
Гинат С., Менцер Дж., Фридман Ю., Айнгорн Х., Авив А., Таджима К., Дантес А., Глезерман М., Влодавский И., Амстердам А. (2001). «Экспрессия гепараназы, Mdm2 и erbB2 при раке яичников». Межд. Дж. Онкол . 18 (6): 1133–44. дои : 10.3892/ijo.18.6.1133 . ПМИД 11351242 .
Колиопанос А., Фрисс Х., Клефф Дж., Ши Х, Ляо К., Пекер И., Влодавский И., Циммерманн А., Бюхлер М.В. (2001). «Экспрессия гепараназы при первичном и метастатическом раке поджелудочной железы». Рак Рез . 61 (12): 4655–9. ПМИД 11406531 .
Сасаки М, Ито Т, Касима М, Фукуи С, Изумияма Н, Ватанабэ А, Сано М, Фудзивара Ю, Миура М (2002). «Модуляция эритромицином и кларитромицином индуцированной фактором роста экспрессии мРНК гепараназы на клетках рака легких человека in vitro» . Медиаторы воспаления . 10 (5): 259–67. дои : 10.1080/09629350120093731 . ПМЦ 1781717 . ПМИД 11759110 .
Цзян П., Кумар А., Паррилло Дж.Э., Демпси Л.А., Платт Дж.Л., Принц Р.А., Сюй Икс (2002). «Клонирование и характеристика промотора гена гепараназы-1 человека (HPR1): роль GA-связывающего белка и Sp1 в регуляции активности базального промотора HPR1» . Ж. Биол. Хим . 277 (11): 8989–98. дои : 10.1074/jbc.M105682200 . ПМИД 11779847 .
Надав Л., Эльдор А., Якоби-Зеви О., Замир Э., Пекер И., Илан Н., Гейгер Б., Влодавский И., Кац Б.З. (2003). «Активация, обработка и транспортировка внеклеточной гепараназы первичными фибробластами человека». Дж. Клеточная наука . 115 (Часть 10): 2179–87. дои : 10.1242/jcs.115.10.2179 . ПМИД 11973358 .

Внешние ссылки

Обзор всей структурной информации, доступной в PDB для UniProt : Q9Y251 (Heparanase) в PDBe-KB .

[refGRCh38Ensembl-1] Jump up to: ^а ^б ^с GRCh38: Версия Ensembl 89: ENSG00000173083 – Ensembl , май 2017 г.

[refGRCm38Ensembl-2] Jump up to: ^а ^б ^с GRCm38: выпуск Ensembl 89: ENSMUSG00000035273 – Ensembl , май 2017 г.

[3] «Ссылка на Human PubMed:» . Национальный центр биотехнологической информации, Национальная медицинская библиотека США .

[4] «Ссылка на Mouse PubMed:» . Национальный центр биотехнологической информации, Национальная медицинская библиотека США .

[pmid10395325-5] Влодавский И., Фридман Ю., Элкин М., Айнгорн Х., Ацмон Р., Ишай-Микаэли Р., Битан М., Паппо О., Перец Т., Михал И., Спектор Л., Пекер I (июль 1999 г.). «Гепараназа млекопитающих: клонирование генов, экспрессия и функция в прогрессировании опухоли и метастазировании». Природная медицина . 5 (7): 793–802. дои : 10.1038/10518 . ПМИД 10395325 . S2CID 38895589 .

[pmid10395326-6] Хьюлетт, доктор медицинских наук, Фриман С., Хамдорф Б.Дж., Бейкер Р.Т., Харрис М.Дж., Пэриш Ч.Р. (июль 1999 г.). «Клонирование гепараназы млекопитающих, важного фермента инвазии и метастазирования опухолей». Природная медицина . 5 (7): 803–9. дои : 10.1038/10525 . ПМИД 10395326 . S2CID 20125382 .

[7] Влодавский И, Илан Н, Нагги А, Касу Б (2007). «Гепараназа: структура, биологические функции и ингибирование производными гепарина миметиками гепарансульфата». Курс. Фарм. Дес . 13 (20): 2057–2073. дои : 10.2174/138161207781039742 . ПМИД 17627539 .

[8] Ву Л, Цзян Дж, Джин Ю, Каллемейн В.В., Куо CL, Артола М, Дай В., ван Элк С, ван Эйк М, ван дер Марель Г.А., Коде JDC, Флореа Б.И., Аэртс JMFG, Оверклифт HS, Дэвис Г.Дж. (2017) ). «Зонды на основе активности для функционального исследования сохранения β-глюкуронидаз» (PDF) . Нат. хим. Биол . 13 (8): 867–873. дои : 10.1038/nchembio.2395 . ПМИД 28581485 .

[9] Ву Л, Виола СМ, Бжозовский А.М., Дэвис Г.Дж. (2015). «Структурная характеристика гепараназы человека дает представление о распознавании субстрата» . Нат. Структура. Мол. Биол . 22 (12): 1016–1022. дои : 10.1038/nsmb.3136 . ПМК 5008439 . ПМИД 26575439 .

[10] Пикас Д.С., Ли Дж.П., Влодавский И., Линдал У. (1998). «Субстратная специфичность гепараназ гепатомы и тромбоцитов человека» . Ж. Биол. Хим . 273 (30): 18770–7. дои : 10.1074/jbc.273.30.18770 . ПМИД 9668050 .

[11] Ирония-Тур-Синай, Михал; Влодавский, Израиль; Бен-Сассон, Шмуэль А; Пинто, Флоренция; Сичич, Камилла; Бреннер, Тальма (15 января 2003 г.). «Синтетическое полианионное соединение, имитирующее гепарин, подавляет воспаление центральной нервной системы». Журнал неврологических наук . 206 (1): 49–57. дои : 10.1016/S0022-510X(02)00318-0 . ISSN 0022-510X . ПМИД 12480085 . S2CID 46339755 .

[pmid16982797-12] Ма П., Бек С.Л., Рааб Р.В., Маккаун Р.Л., Коффман Г.Л., Утани А., Кирико В.Дж., Рапрегер А.С., Лори Г.В. (сентябрь 2006 г.). «Гепараназное дегликанирование синдекана-1 необходимо для связывания ограниченного эпителием просекреторного митогена лакритина» . Журнал клеточной биологии . 174 (7): 1097–106. дои : 10.1083/jcb.200511134 . ПМК 1666580 . ПМИД 16982797 .

[13] Накадзима М., Иримура Т., Николсон Г.Л. (1988). «Гепараназы и метастазы опухолей». Дж. Селл. Биохим . 36 (2): 157–167. дои : 10.1002/jcb.240360207 . ПМИД 3281960 . S2CID 9743270 .

[14] Влодавский И., Гольдшмидт О., Жариа Е., Ацмон Р., Рангини-Гватта З., Элькин М., Перец Т., Фридман Ю. (2003). «Гепараназа млекопитающих: участие в метастазировании рака, ангиогенезе и нормальном развитии». Семинары по биологии рака . 12 (2): 121–9. дои : 10.1006/scbi.2001.0420 . ПМИД 12027584 .

[15] Ян, Цзянь Мин; Ван, Хуэй-цзюй; Ду, Линг; Хан, Сяомэй; Йе, Цзай-юань; Фанг, Ён; Тао, Хоу-цюань; Чжао, Чжуншэн; Чжоу, Юн-ле (25 января 2009 г.). «Скрининг и идентификация новых эпитопов В-клеток в гепараназе человека и их противоинвазивных свойств при гепатоцеллюлярной карциноме» . Иммунология рака, иммунотерапия . 58 (9): 1387–1396. дои : 10.1007/s00262-008-0651-x . ISSN 0340-7004 . ПМК 11030199 . ПМИД 19169879 . S2CID 19074169 .

[16] Чжан, ИЮНЬ; Ян, Цзяньминь; Хан, Сяомэй; Чжао, Чжуншэн; Ду, Линг; Ю, Тонг; Ван, Хуэйджу (2012). «Сверхэкспрессия множественного антигенного пептида 2 гепараназы связана с плохим прогнозом при раке желудка: потенциал для терапии» . Письма об онкологии . 4 (1): 178–182. дои : 10.3892/ол.2012.703 . ПМЦ 3398369 . ПМИД 22807984 . Проверено 29 марта 2016 г.

[17] Бейкер А.Б., Гибсон В.Дж., Колачалама В.Б., Голомб М., Индольфи Л., Спруэлл С., Захария Е., Влодавский И., Эдельман Э.Р. (2012). «Гепараназа регулирует тромбоз при повреждении сосудов и нарушении кровотока, вызванном стентом» . Дж Ам Колл Кардиол . 59 (17): 1551–60. дои : 10.1016/j.jacc.2011.11.057 . ПМК 4191917 . ПМИД 22516446 .

[1]

[2]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]

[ 13 ]

[ 14 ]

[ 15 ]

[ 16 ]

[ 17 ]