Капиллярный электрофорез

Капиллярный электрофорез
Акроним	ЭТОТ
Классификация	Электрофорез
Аналиты	Биомолекулы ; Хиральные молекулы
Другие методы
Связанный	гель-электрофорез ; Двумерный гель-электрофорез
через дефис	Капиллярный электрофорез, масс-спектрометрия

Капиллярный электрофорез ( КЭ ) — это семейство методов электрокинетического разделения, выполняемых в капиллярах субмиллиметрового диаметра, а также в микро- и наножидкостных каналах. Очень часто КЭ относится к капиллярному зональному электрофорезу ( КЗЭ ), но другие электрофоретические методы, в том числе капиллярный гель-электрофорез (КГЭ), капиллярное изоэлектрофокусирование (КИЭФ), капиллярный изотахофорез и мицеллярная электрокинетическая хроматография (МЭКК). к этому классу методов относятся и ^[1] В методах КЭ аналиты мигрируют через растворы электролитов под действием электрического поля . Аналиты могут быть разделены в соответствии с ионной подвижностью и/или разделением на альтернативную фазу посредством нековалентных взаимодействий . аналиты могут быть концентрированы или «сфокусированы» посредством градиентов проводимости Кроме того , и pH .

Инструментарий

Рисунок 1: Схема системы капиллярного электрофореза.

Инструментарий, необходимый для проведения капиллярного электрофореза, относительно прост. Базовая схема системы капиллярного электрофореза показана на рисунке 1 . Основными компонентами системы являются флакон с образцом, флаконы источника и назначения, капилляр, электроды , источник питания высокого напряжения , детектор, а также устройство вывода и обработки данных. Исходный флакон, целевой флакон и капилляр заполнены электролитом, например водным буферным раствором. Для введения образца капиллярное отверстие помещается во флакон, содержащий образец. Образец вводится в капилляр посредством капиллярного действия , давления, сифонирования или электрокинетически, а затем капилляр возвращается в исходную пробирку. Миграция аналитов инициируется электрическим полем, которое прикладывается между флаконами источника и назначения и подается на электроды от источника питания высокого напряжения. В наиболее распространенном режиме CE все ионы, положительные или отрицательные, протягиваются через капилляр в одном направлении под действием электроосмотический поток . Аналиты разделяются по мере их миграции из-за их электрофоретической подвижности и обнаруживаются вблизи выходного конца капилляра. Выходной сигнал детектора передается на устройство вывода и обработки данных, такое как интегратор или компьютер . Затем данные отображаются в виде электрофореграммы, которая показывает реакцию детектора как функцию времени . Разделенные химические соединения проявляются на электрофореграмме в виде пиков с разным временем миграции. ^[2] Эту технику часто приписывают Джеймсу В. Йоргенсену и Кринн ДеАрман Лукачу, которые впервые продемонстрировали возможности этой техники. ^[3] Капиллярный электрофорез был впервые объединен с масс-спектрометрией Ричардом Д. Смитом и его коллегами и обеспечивает чрезвычайно высокую чувствительность для анализа образцов очень малого размера. Несмотря на очень малые размеры образца (обычно в капилляр вводится всего несколько нанолитров жидкости), высокая чувствительность и острые пики достигаются отчасти благодаря стратегиям ввода, которые приводят к концентрации аналитов в узкой зоне возле входа в капилляр. капилляр. Это достигается либо давлением, либо электрокинетическими инъекциями, просто суспендируя образец в буфере с более низкой проводимостью ( например, с более низкой концентрацией соли), чем рабочий буфер. Процесс, называемый штабелированием образца с усилением в поле (разновидность изотахофореза ), приводит к концентрации аналита в узкой зоне на границе между образцом с низкой проводимостью и рабочим буфером с более высокой проводимостью.

Для достижения большей пропускной способности образцов используются инструменты с массивами капилляров для одновременного анализа множества образцов. Такие инструменты для капиллярного электрофореза (CAE) с 16 или 96 капиллярами используются для секвенирования капиллярной ДНК со средней и высокой производительностью, а входные концы капилляров расположены пространственно для приема образцов непосредственно из 96-луночных планшетов стандарта SBS. Определенные аспекты аппаратуры (например, обнаружение) обязательно более сложны, чем для однокапиллярной системы, но фундаментальные принципы конструкции и работы аналогичны показанным на рисунке 1.

Обнаружение

Разделение с помощью капиллярного электрофореза можно обнаружить с помощью нескольких детекторных устройств. Большинство коммерческих систем используют УФ или УФ-видимой области поглощение в качестве основного метода обнаружения. В этих системах в качестве детекторной ячейки используется часть самого капилляра. Использование обнаружения в пробирке позволяет обнаруживать разделенные аналиты без потери разрешения. Обычно капилляры, используемые при капиллярном электрофорезе, покрыты полимером ( часто полиимидом или тефлоном ) для повышения гибкости. Однако часть капилляра, используемая для обнаружения УФ-излучения, должна быть оптически прозрачной. Для капилляров с полиимидным покрытием сегмент покрытия обычно сжигают или соскабливают, чтобы получить голое окно длиной в несколько миллиметров. Этот голый участок капилляра может легко сломаться, поэтому доступны капилляры с прозрачным покрытием для повышения стабильности клеточного окна. Длина пути детекторной ячейки при капиллярном электрофорезе (~ 50 микрометров ) намного меньше, чем у традиционной УФ-ячейки (~ 1 см ). Согласно закону Бера-Ламберта чувствительность детектора пропорциональна длине пути кюветы. Для повышения чувствительности длину пути можно увеличить, однако это приведет к потере разрешения. Саму капиллярную трубку можно расширить в точке обнаружения, создав «пузырьковую ячейку» с большей длиной пути, или в точке обнаружения можно добавить дополнительные трубки, как показано на рисунке 2 . Однако оба эти метода уменьшают разрешение разделения. ^[4] Это уменьшение почти незаметно, если в стенке капилляра путем нагревания и повышения давления создается гладкая аневризма, поскольку пробковый кровоток может быть сохранен. Это изобретение Гэри Гордона (патент США 5061361) обычно увеличивает длину пути поглощения в три раза. При использовании с детектором УФ-поглощения более широкое поперечное сечение аналита в ячейке позволяет использовать освещающий луч в два раза больше, что снижает дробовой шум в два раза. Вместе эти два фактора повышают чувствительность детектора CE с пузырьковой ячейкой Agilent Technologies в шесть раз по сравнению с детектором с прямым капилляром. Этот элемент и его изготовление описаны на странице 62 июньского номера журнала Hewlett-Packard Journal за 1995 год .

Рисунок 2: Методы увеличения длины пути капилляра: а) пузырьковая ячейка и б) z-ячейка (дополнительная трубка). ^[2]

Обнаружение флуоресценции также можно использовать при капиллярном электрофорезе для образцов, которые флуоресцируют естественным образом или химически модифицированы для содержания флуоресцентных меток . Этот режим обнаружения обеспечивает высокую чувствительность и улучшенную селективность для этих образцов, но не может использоваться для образцов, которые не флуоресцируют. Для создания флуоресцентных производных или конъюгатов нефлуоресцентных молекул, включая белки и ДНК, используются многочисленные стратегии маркировки. Установка для обнаружения флуоресценции в системе капиллярного электрофореза может быть сложной. Метод требует, чтобы луч света был сфокусирован на капилляре, что может быть затруднительно для многих источников света. ^[4] Лазерно -индуцированная флуоресценция используется в системах CE с пределами обнаружения всего 10 ⁻¹⁸ до 10 ⁻²¹ мол. Чувствительность метода объясняется высокой интенсивностью падающего света и способностью точно фокусировать свет на капилляре. ^[2] Многоцветное обнаружение флуоресценции может быть достигнуто путем включения нескольких дихроичных зеркал и полосовых фильтров для разделения излучения флуоресценции между несколькими детекторами ( например, фотоумножителей ) или с помощью призмы или решетки для проецирования спектрально разрешенного излучения флуоресценции на позиционно-чувствительный детектор. например, ПЗС-матрица . Системы CE с 4- и 5-цветными системами обнаружения LIF обычно используются для секвенирования капиллярной ДНК и генотипирования (« дактилоскопии ДНК »). ^[5]^[6]

Чтобы идентифицировать компоненты образца, капиллярный электрофорез можно напрямую сочетать с масс-спектрометрами или рамановской спектроскопией с усилением поверхности (SERS). В большинстве систем выход капилляра вводится в источник ионов, в котором используется ионизация электрораспылением (ESI). Полученные ионы затем анализируются с помощью масс-спектрометра. Эта установка требует летучих буферных растворов, что повлияет на диапазон режимов разделения, которые можно использовать, и на степень разрешения, которое может быть достигнуто. ^[4]Измерения и анализ в основном проводятся с помощью специализированного оборудования.

Для CE-SERS элюенты для капиллярного электрофореза можно наносить на SERS-активный субстрат. Время удерживания аналита можно перевести в пространственное расстояние путем перемещения SERS-активного субстрата с постоянной скоростью во время капиллярного электрофореза. Это позволяет применять последующий спектроскопический метод к конкретным элюентам для идентификации с высокой чувствительностью. Можно выбрать SERS-активные субстраты, которые не влияют на спектр аналитов. ^[7]

Режимы разделения

Разделение соединений с помощью капиллярного электрофореза зависит от дифференциальной миграции аналитов в приложенном электрическом поле. электрофоретической миграции Скорость ( $u_{p}$ ) аналита к электроду противоположного заряда равна:

$u_{p}=\mu _{p}E\,$

Электрофоретическую подвижность можно определить экспериментально по времени миграции и напряженности поля:

$\mu _{p}=\left({\frac {L}{t_{r}}}\right)\left({\frac {L_{t}}{V}}\right)$

где $L$ расстояние от входа до точки обнаружения, $t_{r}$ — время, необходимое аналиту для достижения точки обнаружения (время миграции), $V$ - приложенное напряжение (напряженность поля), а $L_{t}$ – общая длина капилляра. ^[4] Поскольку электрическое поле воздействует только на заряженные ионы, нейтральные аналиты плохо разделяются капиллярным электрофорезом.

Скорость миграции аналита при капиллярном электрофорезе также будет зависеть от скорости электроосмотического потока (ЭОП) буферного раствора. В типичной системе электроосмотический поток направляется к отрицательно заряженному катоду, так что буфер течет через капилляр от флакона-источника к флакону-приемнику. Разделенные разной электрофоретической подвижностью, аналиты мигрируют к электроду с противоположным зарядом. ^[2] В результате отрицательно заряженные аналиты притягиваются к положительно заряженному аноду , в противоположность ЭОП, тогда как положительно заряженные аналиты притягиваются к катоду , в соответствии с ЭОП, как показано на рисунке 3 .

Рисунок 3: Схема разделения заряженных и нейтральных аналитов (А) в соответствии с их электрофоретической и электроосмотической подвижностью потока.

Скорость электроосмотического потока, $u_{o}$ можно записать как:

$u_{o}=\mu _{o}E$

где $\mu _{o}$ – электроосмотическая подвижность, которая определяется как:

$\mu _{o}={\frac {\epsilon \zeta }{\eta }}$

где $\zeta$ - дзета-потенциал стенки капилляра, а $\epsilon$ – относительная диэлектрическая проницаемость буферного раствора. Экспериментально электроосмотическую подвижность можно определить путем измерения времени удерживания нейтрального аналита. ^[4] Скорость ( $u$ ) аналита в электрическом поле можно определить как:

$u_{p}+u_{o}=(\mu _{p}+\mu _{o})E$

Поскольку электроосмотический поток буферного раствора обычно превышает электрофоретическую подвижность аналитов, все аналиты переносятся вместе с буферным раствором к катоду. Даже небольшие трехзарядные анионы могут быть перенаправлены на катод за счет относительно мощного ЭОП буферного раствора. Отрицательно заряженные аналиты дольше удерживаются в капилляре из-за их противоречивой электрофоретической подвижности. ^[2] Порядок миграции, видимый детектором, показан на рисунке 3 : небольшие многозарядные катионы мигрируют быстро, а небольшие многозарядные анионы прочно удерживаются. ^[4]

Электроосмотический поток наблюдается, когда электрическое поле прикладывается к раствору в капилляре, имеющем фиксированные заряды на внутренней стенке. Заряд накапливается на внутренней поверхности капилляра, когда внутрь капилляра помещают буферный раствор. В из плавленого кварца капилляре силанольные (Si-OH) группы, прикрепленные к внутренней стенке капилляра, ионизируются до отрицательно заряженного силаноата (Si-O ⁻) группы при значениях рН более трех. Ионизацию стенки капилляра можно усилить, если сначала пропустить через капилляр основной раствор, такой как NaOH или КОН, перед введением буферного раствора. Притягиваясь отрицательно заряженными силаноатными группами, положительно заряженные катионы буферного раствора образуют два внутренних слоя катионов (называемых диффузным двойным слоем или двойным электрическим слоем) на стенке капилляра, как показано на рисунке 4 . Первый слой называется фиксированным, поскольку он прочно связан с силаноатными группами. Внешний слой, называемый подвижным слоем, находится дальше от силаноатных групп. Под действием электрического поля слой подвижного катиона вытягивается в направлении отрицательно заряженного катода. Поскольку эти катионы сольватированы , объем буферного раствора мигрирует вместе с подвижным слоем, вызывая электроосмотический поток буферного раствора. Другие капилляры, включая тефлоновые , также обладают электроосмотическим потоком. ЭОФ этих капилляров, вероятно, является результатом адсорбция электрически заряженных ионов буфера на стенках капилляров. ^[2] Скорость ЭОП зависит от напряженности поля и плотности заряда стенки капилляра. Плотность заряда стенки пропорциональна pH буферного раствора. Электроосмотический поток будет увеличиваться с увеличением pH до тех пор, пока все доступные силанолы, выстилающие стенку капилляра, не будут полностью ионизированы. ^[4]

Рисунок 4: Изображение внутренней части капилляра из плавленого силикагеля в присутствии буферного раствора.

В определенных ситуациях, когда сильный электроосмотический поток к катоду нежелателен, внутренняя поверхность капилляра может быть покрыта полимерами, поверхностно-активными веществами или небольшими молекулами, чтобы снизить электроосмос до очень низкого уровня, восстанавливая нормальное направление миграции (анионы к аноду, катионы к катоду). Приборы CE обычно включают в себя источники питания с реверсивной полярностью, что позволяет использовать один и тот же прибор в «нормальном» режиме (с ЭОП и обнаружением вблизи катодного конца капилляра) и «обратном» режиме (с подавлением или реверсом ЭОП и обнаружением вблизи катодного конца капилляра). анодный конец капилляра). Один из наиболее распространенных подходов к подавлению ЭОП, о котором сообщил Стеллан Йертен в 1985 году, заключается в создании ковалентно связанного слоя линейного полиакриламида . ^[8] Кремнеземную поверхность капилляра сначала модифицируют силановым реагентом, содержащим полимеризуемую винильную группу ( например, 3-метакрилоксипропилтриметоксисилан), с последующим введением мономера акриламида и свободнорадикального инициатора . Акриламид полимеризуется in situ , образуя длинные линейные цепи, некоторые из которых ковалентно присоединены к силановому реагенту, связанному со стенками. Существует множество других стратегий ковалентной модификации капиллярных поверхностей. Также распространены динамические или адсорбированные покрытия (которые могут включать полимеры или небольшие молекулы). ^[9] Например, при капиллярном секвенировании ДНК просеивающий полимер (обычно полидиметилакриламид) подавляет электроосмотический поток до очень низкого уровня. ^[10] Помимо модуляции электроосмотического потока, покрытия стенок капилляров могут также служить цели уменьшения взаимодействия между «липкими» аналитами (такими как белки) и стенкой капилляра. Такие взаимодействия стенка-аналит, если они серьезные, проявляются в виде снижения пиковой эффективности, асимметричных (хвостовых) пиков или даже полной потери аналита на стенке капилляра.

Эффективность и разрешение

Количество теоретических тарелок или эффективность разделения при капиллярном электрофорезе определяется выражением:

$N={\frac {\mu V}{2D_{m}}}$

где $N$ - количество теоретических тарелок , $\mu$ – кажущаяся подвижность в разделительной среде и $D_{m}$ – коэффициент диффузии аналита. Согласно этому уравнению эффективность разделения ограничивается только диффузией и пропорциональна напряженности электрического поля, хотя практические соображения ограничивают напряженность электрического поля несколькими сотнями вольт на сантиметр. Приложение очень высоких потенциалов (>20–30 кВ) может привести к искрению или разрушению капилляра. Далее приложение сильных электрических полей приводит к резистивному нагреву (джоулеву нагреву) буфера в капилляре. При достаточно высокой напряженности поля этот нагрев настолько силен, что внутри капилляра могут возникать радиальные градиенты температуры. Поскольку электрофоретическая подвижность ионов обычно зависит от температуры (из-за зависящих от температуры эффектов ионизации и вязкости растворителя), неоднородный температурный профиль приводит к изменению электрофоретической подвижности в капилляре и потере разрешения. Начало значительного джоулева нагрева можно определить, построив «график закона Ома», на котором ток через капилляр измеряется как функция приложенного потенциала. В слабых полях ток пропорционален приложенному потенциалу ( Закон Ома ), тогда как при более высоких полях ток отклоняется от прямой линии, так как нагрев приводит к уменьшению сопротивления буфера. Наилучшее разрешение обычно получается при максимальной напряженности поля, при которой джоулевый нагрев незначителен ( т.е. вблизи границы между линейным и нелинейным режимами графика закона Ома). Обычно капилляры с меньшим внутренним диаметром поддерживают использование более высоких напряженностей поля из-за улучшенного рассеивания тепла и меньших температурных градиентов по сравнению с капиллярами большего размера, но с недостатками, заключающимися в более низкой чувствительности при обнаружении поглощения из-за более короткой длины пути и большей сложности при введении буфера и образец в капилляр (маленькие капилляры требуют большего давления и/или более длительного времени, чтобы протолкнуть жидкость через капилляр).

Эффективность разделения капиллярным электрофорезом обычно намного выше, чем эффективность других методов разделения, таких как ВЭЖХ . В отличие от ВЭЖХ, при капиллярном электрофорезе отсутствует массоперенос между фазами. ^[4] Кроме того, профиль потока в системах с ЭОП является плоским, а не закругленным профилем ламинарного потока, характерным для потока, управляемого давлением в хроматографических колонках, как показано на рисунке 5 . В результате ЭОП не вносит существенного вклада в расширение полосы, как в хроматографии под давлением. Разделения капиллярного электрофореза могут иметь несколько сотен тысяч теоретических тарелок. ^[11]

Рисунок 5: Профили потока ламинарного и электроосмотического потока.

Резолюция ( $R_{s}$ ) разделений капиллярного электрофореза можно записать как:

$R_{s}={\frac {1}{4}}\left({\frac {\triangle \mu _{p}{\sqrt {N}}}{\mu _{p}+\mu _{o}}}\right)$

Согласно этому уравнению максимальное разрешение достигается, когда электрофоретическая и электроосмотическая подвижности близки по величине и противоположны по знаку. Кроме того, видно, что высокое разрешение требует меньшей скорости и, соответственно, увеличения времени анализа. ^[4]

Помимо диффузии и джоулевого нагрева (обсуждаемого выше), факторы, которые могут снизить разрешение капиллярного электрофореза по сравнению с теоретическими пределами, указанными в приведенном выше уравнении, включают, помимо прочего, конечную ширину инжекционной пробки и окна обнаружения; взаимодействие аналита со стенкой капилляра; инструментальные неидеальности, такие как небольшая разница в высоте резервуаров с жидкостью, приводящая к сифонированию; неравномерности электрического поля, например, из-за несовершенно обрезанных концов капилляров; истощение буферной емкости водохранилищ; и электродисперсия (когда аналит имеет более высокую проводимость, чем фоновый электролит). ^[12] Идентификация и минимизация многочисленных источников расширения полос является ключом к успешной разработке методов капиллярного электрофореза с целью максимально приблизиться к идеалу разрешения, ограниченного диффузией.

Приложения

Капиллярный электрофорез может быть использован для одновременного определения ионов NH ₄^+,, уже ⁺, К ⁺, мг ²⁺ и Ca ²⁺ в слюне . ^[13]

Одним из основных применений КЭ в судебной медицине является разработка методов амплификации и обнаружения фрагментов ДНК с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), что привело к быстрому и значительному прогрессу в судебно-медицинском анализе ДНК. Разделение ДНК проводят с использованием тонких капилляров из плавленого кварца CE диаметром 50 мм, заполненных просеивающим буфером. Эти капилляры обладают превосходной способностью рассеивать тепло, что позволяет использовать гораздо более высокую напряженность электрического поля, чем при пластинчатом гель-электрофорезе. Поэтому разделение в капиллярах происходит быстро и эффективно. Кроме того, капилляры можно легко наполнять и заменять для эффективных и автоматизированных инъекций. Обнаружение происходит посредством флуоресценции через окно, протравленное в капилляре. Приборы как с одним капилляром, так и с капиллярной решеткой доступны с системами матриц, способными одновременно обрабатывать 16 или более образцов для повышения производительности. ^[14]

Основным применением CE судебными биологами является типирование STR из биологических образцов для создания профиля на основе высокополиморфных генетических маркеров, которые различаются у разных людей. Другие новые возможности использования CE включают обнаружение специфических фрагментов мРНК, которые помогают определить происхождение биологической жидкости или ткани в судебно-медицинском образце. ^[15]

Еще одним применением CE в криминалистике является анализ чернил, где анализ чернил для струйной печати становится все более необходимым из-за все более частой подделки документов, напечатанных на струйных принтерах. Химический состав чернил дает очень важную информацию в случаях подделки документов и поддельных банкнот. Мицеллярная электрофоретическая капиллярная хроматография (MECC) была разработана и применена для анализа чернил, извлеченных из бумаги. Благодаря высокой разрешающей способности по сравнению с чернилами, содержащими несколько химически близких веществ, также можно различить различия между чернилами одного и того же производителя. Это делает его пригодным для оценки происхождения документов на основе химического состава чернил. Стоит отметить, что из-за возможной совместимости одного и того же картриджа с разными моделями принтеров дифференциация чернил на основе их электрофоретических профилей MECC является более надежным методом определения происхождения чернильного картриджа (его производителя и картриджа). номер), а не исходную модель принтера. ^[16]

Специализированный тип CE, аффинный капиллярный электрофорез (ACE), использует межмолекулярные связывающие взаимодействия для понимания взаимодействий белок-лиганд. ^[17] Фармацевтические компании используют ACE по множеству причин, одной из основных из которых являются константы ассоциации/связывания для лекарств и лигандов или лекарств и некоторых транспортных систем, таких как мицеллы . Это широко используемый метод из-за его простоты, быстрых результатов и низкого использования аналитов. ^[18] Использование ACE может предоставить конкретные сведения о связывании, разделении и обнаружении аналитов и доказало свою высокую практичность для исследований в области наук о жизни. Аффинный капиллярный электрофорез на основе аптамеров используется для анализа и модификации специфических аффинных реагентов. Модифицированные аптамеры в идеале обладают высокой аффинностью связывания, специфичностью и устойчивостью к нуклеазам. ^[19] Рен и др. включили модифицированные нуклеотиды в аптамеры, чтобы придать новые конфронтационные свойства и взаимодействия с высоким сродством за счет гидрофобных и полярных взаимодействий между IL-1α и аптамером. ^[20] Хуанг и др. использует ACE для исследования белок-белковых взаимодействий с использованием аптамеров. Связывающий α-тромбин аптамер был помечен 6-карбоксифлуоресцеином для использования в качестве селективного флуоресцентного зонда и изучен для выяснения информации о сайтах связывания для взаимодействий белок-белок и белок-ДНК. ^[21]

Капиллярный электрофорез (КЭ) стал важным и экономически эффективным подходом к секвенированию ДНК , который обеспечивает высокую производительность и точность информации о секвенировании. Вулли и Мэтис использовали чип CE для секвенирования фрагментов ДНК с точностью 97% и скоростью 150 оснований за 540 секунд. ^[22] Для сбора флуоресцентных данных они использовали четырехцветный формат маркировки и обнаружения. Флуоресценция используется для просмотра концентраций каждой части последовательности нуклеиновой кислоты A, T, C и G, и эти пики концентрации, нанесенные на график при обнаружении, используются для определения последовательности ДНК. ^[22]

Ссылки

^ Кемп Дж. (февраль 1998 г.). «Капиллярный электрофорез: универсальное семейство аналитических методов». Биотехнология и прикладная биохимия . 27 (1): 9–17. дои : 10.1111/j.1470-8744.1998.tb01369.x . ПМИД 9477551 . S2CID 45334539 .
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж Бейкер Д.Р. (1995). Капиллярный электрофорез . Нью-Йорк: John Wiley & Sons, Inc. Скуг Д.А., Холлер Ф.Дж., Крауч С.Р. (2007). Принципы инструментального анализа (6-е изд.). Бельмонт, Калифорния: Thomson Brooks/Cole Publishing.
^ Йоргенсон Дж.В., Лукач К.Д. (июль 1981 г.). «Зональный электрофорез в открытых трубчатых стеклянных капиллярах». Аналитическая химия . 53 (8): 1298–1302. дои : 10.1021/ac00231a037 . ISSN 0003-2700 .
^ Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я Кунико Р.Л., Гудинг К.М., Вер Т. (1998). Базовая ВЭЖХ и КЭ биомолекул . Бэйская биоаналитическая лаборатория. ISBN 978-0-9663229-0-3 .
^ Довичи, Нью-Джерси, Чжан Дж (декабрь 2000 г.). «Как капиллярный электрофорез секвенировал геном человека. Это эссе основано на лекции, прочитанной на конференции Analytica 2000 в Мюнхене (Германия) по случаю вручения премии Генриха-Эмануэля-Меркка» (PDF) . Ангеванде Хеми . 39 (24): 4463–4468. doi : 10.1002/1521-3773(20001215)39:24<4463::aid-anie4463>3.0.co;2-8 . ПМИД 11169637 . Проверено 9 апреля 2014 г.
^ Батлер Дж. М., Буэль Э., Кривелленте Ф., МакКорд Б. Р. (июнь 2004 г.). «Судебно-медицинское типирование ДНК методом капиллярного электрофореза с использованием генетических анализаторов ABI Prism 310 и 3100 для анализа STR» (PDF) . Электрофорез . 25 (10–11): 1397–412. дои : 10.1002/elps.200305822 . ПМИД 15188225 . S2CID 31067288 .
^ Хе Л., Натан М.Дж., Китинг, компакт-диск (ноябрь 2000 г.). «Комбинационное рассеяние света с поверхностным усилением: структурно-специфичный метод обнаружения для капиллярного электрофореза» . Аналитическая химия . 72 (21): 5348–55. дои : 10.1021/ac000583v . ПМИД 11080886 .
^ Хертен С (1985). «Высокоэффективный электрофорез: устранение электроосмоса и адсорбции растворенных веществ». Журнал хроматографии (347): 191–198. дои : 10.1016/S0021-9673(01)95485-8 .
^ Доэрти Э.А., Мигер Р.Дж., Альбаргути М.Н., Бэррон А.Е. (январь 2003 г.). «Покрытия стенок микроканалов для разделения белков методами капиллярного и чип-электрофореза». Электрофорез . 24 (1–2): 34–54. дои : 10.1002/elps.200390029 . ПМИД 12652571 . S2CID 25998082 .
^ Мадабхуши Р.С. (февраль 1998 г.). «Разделение четырехцветных продуктов расширения секвенирования ДНК в капиллярах с нековалентным покрытием с использованием растворов полимеров низкой вязкости». Электрофорез . 19 (2): 224–30. дои : 10.1002/elps.1150190215 . ПМИД 9548284 . S2CID 221736283 .
^ Скуг Д.А., Холлер Ф.Дж., Крауч С.Р. (2007). Принципы инструментального анализа (6-е изд.). Бельмонт, Калифорния: Thomson Brooks/Cole Publishing.
^ Лауэр Х.Х., Розинг GP (январь 2010 г.). «Высокоэффективный капиллярный электрофорез: введение» (PDF) . Германия: Agilent Technologies. Архивировано из оригинала (PDF) 13 апреля 2014 года . Проверено 9 апреля 2014 г.
^ ПК Хаузера (2016). «Определение ионов щелочи в биологических и экологических пробах». В Астрид С., Хельмут С., Роланд К.О. С. (ред.). Ионы щелочных металлов: их роль для жизни . Ионы металлов в науках о жизни. Том. 16. Спрингер. стр. 11–25. дои : 10.1007/978-3-319-21756-7_2 . ISBN 978-3-319-21755-0 . ПМИД 26860298 .
^ МакКорд БР, Бюэль Э (2013). «Капиллярный электрофорез в судебной генетике». Энциклопедия судебной медицины . Уолтем: Академическая пресса. стр. 394–401. дои : 10.1016/B978-0-12-382165-2.00050-7 . ISBN 978-0-12-382166-9 .
^ ван Ооршот Р.А., Баллантайн К.Н. (2013). «Капиллярный электрофорез в судебной биологии». Энциклопедия судебной медицины . Уолтем: Академическая пресса. стр. 560–566. дои : 10.1016/B978-0-12-382165-2.00242-7 . ISBN 978-0-12-382166-9 .
^ Шаллан А., Гуйт Р., Бредмор М. (2013). «Основные принципы капиллярного электрофореза». Сигел Дж.А., Саукко П.Дж., Хоук М.М. (ред.). Энциклопедия судебной медицины . Уолтем: Академическая пресса. стр. 549–559. дои : 10.1016/B978-0-12-382165-2.00241-5 . ISBN 978-0-12-382166-9 .
^ Чу Ю.Х., Авила Л.З., Гао Дж., Генеральный директор Уайтсайдса (ноябрь 1995 г.). «Аффинный капиллярный электрофорез». Отчеты о химических исследованиях . 28 (11): 461–468. дои : 10.1021/ar00059a004 .
^ Нойберт Р.Х., Шварц М.А., Мрестани Й., Платцер М., Райт К. (ноябрь 1999 г.). «Аффинный капиллярный электрофорез в фармацевтике». Фармацевтические исследования . 16 (11): 1663–73. ПМИД 10571270 .
^ Ю Ф, Чжао Ц, Чжан Д, Юань Цз, Ван Х (январь 2019 г.). «Аффинные взаимодействия посредством капиллярного электрофореза: связывание, разделение и обнаружение». Аналитическая химия . 91 (1): 372–387. дои : 10.1021/acs.analchem.8b04741 . ПМИД 30392351 . S2CID 53217680 .
^ Рен X, Гелинас А.Д., фон Карловиц I, Янич Н., Пайл А.М. (октябрь 2017 г.). «Структурная основа распознавания IL-1α модифицированным аптамером ДНК, который специфически ингибирует передачу сигналов IL-1α» . Природные коммуникации . 8 (1): 810. Бибкод : 2017NatCo...8..810R . дои : 10.1038/s41467-017-00864-2 . ПМЦ 5634487 . ПМИД 28993621 .
^ Хуан CC, Цао Z, Чанг HT, Тан W (декабрь 2004 г.). «Исследование межбелкового взаимодействия на основе молекулярных аптамеров методом аффинного капиллярного электрофореза» (PDF) . Аналитическая химия . 76 (23): 6973–81. дои : 10.1021/ac049158i . ПМИД 15571349 .
^ Jump up to: ^а ^б Вулли А.Т., Мэтис Р.А. (октябрь 1995 г.). «Сверхскоростное секвенирование ДНК с использованием чипов капиллярного электрофореза». Аналитическая химия . 67 (20): 3676–80. дои : 10.1021/ac00116a010 . ПМИД 8644919 .

Дальнейшее чтение

Терабе С., Оцука К., Итикава К., Цучия А., Андо Т. (январь 1984 г.). «Электрокинетическое разделение мицеллярными растворами и открытыми трубчатыми капиллярами». Аналитическая химия . 56 (1): 111–3. дои : 10.1021/ac00265a031 .
Фоли Дж. П. (июль 1990 г.). «Оптимизация мицеллярной электрокинетической хроматографии». Аналитическая химия . 62 (13): 1302–8. дои : 10.1021/ac00265a031 .
Сегура Карретеро А, Крусес-Бланко С, Кортасеро Рамирес С, Карраско Панкорбо А, Фернандес Гутьеррес А (сентябрь 2004 г.). «Применение мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии для анализа незаряженных пестицидов воздействия на окружающую среду». Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии . 52 (19): 5791–5. дои : 10.1021/jf040074k . PMID 15366822 .
Кавацца А., Коррадини С., Лаурия А., Николетти I, Станканелли Р. (август 2000 г.). «Быстрый анализ незаменимых аминокислот и аминокислот с разветвленной цепью в нутрицевтических продуктах методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии». Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии . 48 (8): 3324–9. дои : 10.1021/jf991368m . hdl : 11381/2441649 . ПМИД 10956110 .
Родригес М.Р., Караман Э.Б., Арсе Л., Риос А., Валькарсель М. (июль 2002 г.). «Определение монотерпеновых углеводородов и спиртов в Majorana hortensis Moench методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии». Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии . 50 (15): 4215–20. дои : 10.1021/jf011667n . ПМИД 12105948 .

Внешние ссылки

CE-анимация

[pmid9477551-1] Кемп Дж. (февраль 1998 г.). «Капиллярный электрофорез: универсальное семейство аналитических методов». Биотехнология и прикладная биохимия . 27 (1): 9–17. дои : 10.1111/j.1470-8744.1998.tb01369.x . ПМИД 9477551 . S2CID 45334539 .

[Baker_1995-2] Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж Бейкер Д.Р. (1995). Капиллярный электрофорез . Нью-Йорк: John Wiley & Sons, Inc. Скуг Д.А., Холлер Ф.Дж., Крауч С.Р. (2007). Принципы инструментального анализа (6-е изд.). Бельмонт, Калифорния: Thomson Brooks/Cole Publishing.

[3] Йоргенсон Дж.В., Лукач К.Д. (июль 1981 г.). «Зональный электрофорез в открытых трубчатых стеклянных капиллярах». Аналитическая химия . 53 (8): 1298–1302. дои : 10.1021/ac00231a037 . ISSN 0003-2700 .

[Cucino-4] Jump up to: ^а ^б ^с ^д ^и ^ж ^г ^час ^я Кунико Р.Л., Гудинг К.М., Вер Т. (1998). Базовая ВЭЖХ и КЭ биомолекул . Бэйская биоаналитическая лаборатория. ISBN 978-0-9663229-0-3 .

[Dovichi_2000-5] Довичи, Нью-Джерси, Чжан Дж (декабрь 2000 г.). «Как капиллярный электрофорез секвенировал геном человека. Это эссе основано на лекции, прочитанной на конференции Analytica 2000 в Мюнхене (Германия) по случаю вручения премии Генриха-Эмануэля-Меркка» (PDF) . Ангеванде Хеми . 39 (24): 4463–4468. doi : 10.1002/1521-3773(20001215)39:24<4463::aid-anie4463>3.0.co;2-8 . ПМИД 11169637 . Проверено 9 апреля 2014 г.

[Butler_Electrophoresis_2004-6] Батлер Дж. М., Буэль Э., Кривелленте Ф., МакКорд Б. Р. (июнь 2004 г.). «Судебно-медицинское типирование ДНК методом капиллярного электрофореза с использованием генетических анализаторов ABI Prism 310 и 3100 для анализа STR» (PDF) . Электрофорез . 25 (10–11): 1397–412. дои : 10.1002/elps.200305822 . ПМИД 15188225 . S2CID 31067288 .

[He_2000-7] Хе Л., Натан М.Дж., Китинг, компакт-диск (ноябрь 2000 г.). «Комбинационное рассеяние света с поверхностным усилением: структурно-специфичный метод обнаружения для капиллярного электрофореза» . Аналитическая химия . 72 (21): 5348–55. дои : 10.1021/ac000583v . ПМИД 11080886 .

[8] Хертен С (1985). «Высокоэффективный электрофорез: устранение электроосмоса и адсорбции растворенных веществ». Журнал хроматографии (347): 191–198. дои : 10.1016/S0021-9673(01)95485-8 .

[Doherty_2003-9] Доэрти Э.А., Мигер Р.Дж., Альбаргути М.Н., Бэррон А.Е. (январь 2003 г.). «Покрытия стенок микроканалов для разделения белков методами капиллярного и чип-электрофореза». Электрофорез . 24 (1–2): 34–54. дои : 10.1002/elps.200390029 . ПМИД 12652571 . S2CID 25998082 .

[Mandabhushi_1998-10] Мадабхуши Р.С. (февраль 1998 г.). «Разделение четырехцветных продуктов расширения секвенирования ДНК в капиллярах с нековалентным покрытием с использованием растворов полимеров низкой вязкости». Электрофорез . 19 (2): 224–30. дои : 10.1002/elps.1150190215 . ПМИД 9548284 . S2CID 221736283 .

[Skoog-11] Скуг Д.А., Холлер Ф.Дж., Крауч С.Р. (2007). Принципы инструментального анализа (6-е изд.). Бельмонт, Калифорния: Thomson Brooks/Cole Publishing.

[HPCE:_a_primer-12] Лауэр Х.Х., Розинг GP (январь 2010 г.). «Высокоэффективный капиллярный электрофорез: введение» (PDF) . Германия: Agilent Technologies. Архивировано из оригинала (PDF) 13 апреля 2014 года . Проверено 9 апреля 2014 г.

[13] ПК Хаузера (2016). «Определение ионов щелочи в биологических и экологических пробах». В Астрид С., Хельмут С., Роланд К.О. С. (ред.). Ионы щелочных металлов: их роль для жизни . Ионы металлов в науках о жизни. Том. 16. Спрингер. стр. 11–25. дои : 10.1007/978-3-319-21756-7_2 . ISBN 978-3-319-21755-0 . ПМИД 26860298 .

[14] МакКорд БР, Бюэль Э (2013). «Капиллярный электрофорез в судебной генетике». Энциклопедия судебной медицины . Уолтем: Академическая пресса. стр. 394–401. дои : 10.1016/B978-0-12-382165-2.00050-7 . ISBN 978-0-12-382166-9 .

[15] ван Ооршот Р.А., Баллантайн К.Н. (2013). «Капиллярный электрофорез в судебной биологии». Энциклопедия судебной медицины . Уолтем: Академическая пресса. стр. 560–566. дои : 10.1016/B978-0-12-382165-2.00242-7 . ISBN 978-0-12-382166-9 .

[16] Шаллан А., Гуйт Р., Бредмор М. (2013). «Основные принципы капиллярного электрофореза». Сигел Дж.А., Саукко П.Дж., Хоук М.М. (ред.). Энциклопедия судебной медицины . Уолтем: Академическая пресса. стр. 549–559. дои : 10.1016/B978-0-12-382165-2.00241-5 . ISBN 978-0-12-382166-9 .

[17] Чу Ю.Х., Авила Л.З., Гао Дж., Генеральный директор Уайтсайдса (ноябрь 1995 г.). «Аффинный капиллярный электрофорез». Отчеты о химических исследованиях . 28 (11): 461–468. дои : 10.1021/ar00059a004 .

[18] Нойберт Р.Х., Шварц М.А., Мрестани Й., Платцер М., Райт К. (ноябрь 1999 г.). «Аффинный капиллярный электрофорез в фармацевтике». Фармацевтические исследования . 16 (11): 1663–73. ПМИД 10571270 .

[19] Ю Ф, Чжао Ц, Чжан Д, Юань Цз, Ван Х (январь 2019 г.). «Аффинные взаимодействия посредством капиллярного электрофореза: связывание, разделение и обнаружение». Аналитическая химия . 91 (1): 372–387. дои : 10.1021/acs.analchem.8b04741 . ПМИД 30392351 . S2CID 53217680 .

[20] Рен X, Гелинас А.Д., фон Карловиц I, Янич Н., Пайл А.М. (октябрь 2017 г.). «Структурная основа распознавания IL-1α модифицированным аптамером ДНК, который специфически ингибирует передачу сигналов IL-1α» . Природные коммуникации . 8 (1): 810. Бибкод : 2017NatCo...8..810R . дои : 10.1038/s41467-017-00864-2 . ПМЦ 5634487 . ПМИД 28993621 .

[21] Хуан CC, Цао Z, Чанг HT, Тан W (декабрь 2004 г.). «Исследование межбелкового взаимодействия на основе молекулярных аптамеров методом аффинного капиллярного электрофореза» (PDF) . Аналитическая химия . 76 (23): 6973–81. дои : 10.1021/ac049158i . ПМИД 15571349 .

[Woolley_1995-22] Jump up to: ^а ^б Вулли А.Т., Мэтис Р.А. (октябрь 1995 г.). «Сверхскоростное секвенирование ДНК с использованием чипов капиллярного электрофореза». Аналитическая химия . 67 (20): 3676–80. дои : 10.1021/ac00116a010 . ПМИД 8644919 .

[1]

[2]

[3]

[4]

[5]

[6]

[7]

[8]

[9]

[10]

[11]

[12]

[13]

[14]

[15]

[16]

[17]

[18]

[19]

[20]

[21]

[22]

v т и Электрофорез
История электрофореза
Техники	Аффинный электрофорез Электрофорез в агарозном геле Капиллярная электрохроматография Капиллярный электрофорез Диэлектрофорез Разностный гель-электрофорез Прерывистый электрофорез Электроблоттинг Электрохроматография Электрофоретический анализ изменения подвижности Гель-электрофорез Иммуноэлектрофорез Ионофорез Изотахофорез Электрофорез с подвижной границей Электрофорез в полиакриламидном геле Гель-электрофорез в импульсном поле Гель-электрофорез в градиенте температуры Двумерный гель-электрофорез
Приложения	лестница ДНК Разделение ДНК адсорбцией кремнезема Гель-электрофорез нуклеиновых кислот Гель-электрофорез белков Электрофорез белков сыворотки
Теория	Электрическая мобильность Изоэлектрическая фокусировка
Журналы	Электрофорез (журнал)
Категория Коммонс Аналитическая химия