Анализ структуры хроматина сперматозоидов

Анализ структуры хроматина сперматозоидов (SCSA) является диагностическим подходом, который обнаруживает аномальность сперматозоидов с большой степенью фрагментации ДНК . ^{[ 1 ]} Впервые описанный Evenson в 1980 году, анализ представляет собой проточный цитометрический тест, который обнаруживает уязвимость ДНК сперматозоидов к кислоте денатурации ДНК in situ . ^{[ 2 ]} SCSA измеряет фрагментацию ДНК сперматозоидов , связанную с внутренними и внешними факторами, и сообщает степень фрагментации с точки зрения индекса фрагментации ДНК (DFI). Использование SCSA расширяет из оценки мужского бесплодия и рефлектора , токсикологических исследований и оценки качества лабораторных образцов спермы . Примечательно, что SCSA Outcompettes других анализов ДНК сперматозоидов (SDF), таких как TUNEL и COMET с точки зрения эффективности, объективности и повторяемости.

История

До разработки SCSA, диагноз или прогноз мужского бесплодия / преодоленности были в основном ссылаются на Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) , основанные на ручной жизни , спермы параметры ^{[ 3 ]} спермы в том числе концентрация , подвижность и морфологию . Тем не менее, в нескольких сообщениях об отказе от беременности были параметры в пределах нормального диапазона, что позволяет предположить, что ни одно из этих измерений не сделало надежный вывод, чтобы отразить вероятность рождаемости пары. ^{[ 4 ]} Кроме того, такие параметры часто связаны с высокой интенсивностью труда и отсутствием статистической власти .

В конце 1970 -х годов Дональд П. Эвенсон в Мемориальном раковом центре Слоан Кеттеринг в Соединенных Штатах получил грант NIH исследовательский проект (RO1) для млекопитающих . исследования структуры хроматина ^{[ 5 ]}^{[ 6 ]} С тех пор были приняты различные методы, чтобы получить доступ к целостности ДНК спермы. В частности, просвечивающая электронная микроскопия отражала значительное количество гетерогенности сперматозоидов. ^{[ 4 ]}^{[ 7 ]}

Гетерогенность была затем подтверждена посредством проточной цитометрии путем контрастного окрашивания АО, результатов между человека и мыши ядрами сперматозоидов . Гомогенные результаты наблюдались в образце мыши, в то время как гетерогенная интенсивность флуоресценции варьировалась среди образца человека. Гипотеза была предложена «Одноцепочечная/двухцепочечная ДНК-разрыва, индуцированная сперматозоидами, коррелирует с мужским бесплодием ». ^{[ 4 ]}^{[ 5 ]} В 1980 году Evenson et al. Опубликованы статьи, которые синтезируют эти знания в клинических тестах и обнаружили SCSA.

Первоначально было предложено использование тепловой энергии в буфере (100 ° C, 5 мин) и использовалось для денатурации ДНК в повреждении ДНК. ^{[ 8 ]} Тем не менее, протокол нагретой спермы был трудоемким и индуцировал случайную потерю образца сперматозоидов. Следовательно, кислота, вызванная денатурацией, заменила индуцированную тепловой денатурацией из-за большего удобства метода низкого pH и сходства в результатах. ^{[ 5 ]}

Принцип

SCSA является широко распространенным диагностическим инструментом в обнаружении сперматозоидов с высокой степенью фрагментации ДНК и отсутствием гистонового протамина обмена образцов в ядрах сперматозоидов . ^{[ 9 ]} SCSA определяет аномалия сперматозоидов как повышенную уязвимость ДНК спермы к тепловой/кислотной денатурации на месте . ^{[ 4 ]} Теоретически, полностью зрелые и здоровые ядра сперматозоидов , богатые дисульфидной связью (SS) , должны иметь свою ДНК в двухцепочечной форме. ^{[ 5 ]} Низкая обработка pH открывает дефектную ДНК сперматозоидов на участках повреждения. Благодаря окрашиванию акридиновым оранжевым (AO) молекулы AO интеркалируются в двухцепочечную ДНК в неповрежденных спермах, в то время как агрегация молекул AO происходит в одноцепочечной ДНК в дефектных спермах. ^{[ 4 ]}^{[ 5 ]} Проведение проточной цитометрии (синий свет), зеленый (нативная ДНК) и красная (поврежденная ДНК) флуоресценция будет испускана из неповрежденных и дефектных сперматозоидов соответственно. ^{[ 2 ]}^{[ 4 ]}^{[ 10 ]} Сигналы будут проанализированы с помощью программного программирования при изучении как фрагментации ДНК спермы (SDF), так и атипичной структуры хроматина.

Причины повреждения ДНК спермы

Целостность ДНК сперматозоидов находится в тесной корреляции с переносом отцовской ДНК в ооцит во время оплодотворения . Этиология повреждения ДНК сперматозоидов может быть разделена на внутренние и внешние факторы. Первый объясняется серией патофизиологических явлений во время сперматогенеза ; Последнее вызвано постнатальным воздействием эндогенных источников разрывов ДНК.

Внутренние факторы

Аномалия в рекомбинации и хроматина реструктуризации : во время пересечение сперматогенеза сегментов хроматидов между гомологичными хромосомами могло происходить аномально. Специфические нуклеазы запрограммированы на введение двухцепочечных разрывов ДНК для продвижения пересечения. ^{[ 11 ]} Чтобы предотвратить нежелательные изменения, контрольная точка повреждения ДНК активируется , и прогресс мейоза будет приостановлен при повреждении ДНК. ^{[ 12 ]} Неверная активация или инактивация контрольной точки является причиной фрагментированной ДНК в эякулированных сперматозоиде . Тем не менее, такой вывод теоретически является спекулятивным, и в настоящее время нет прямого подтверждения этой гипотезы у людей. ^{[ 13 ]} Во время спермиогенеза для снятия крутящего стресса разрывы ДНК вводятся ^{[ 14 ]} и обеспечить замену ядер -гистоновых ядер переходными белками. Изменение таких процессов может нанести ущерб хромосомной целостности спермы. ^{[ 15 ]}
Абортный апоптоз : апоптоз относится к запрограммированной гибели клеток , которая удаляет аномальные клетки и предотвращаю их чрезмерную выдвижение. Если апоптоз не активируется эффективно, перенаселение зародышевых клеток или выход дефектных зародышевых клеток приведет к повреждению ДНК сперматозоидов . ^{[ 16 ]}^{[ 13 ]}
Окислительный стресс : окислительный стресс обозначает дисбаланс активности между активными формами кислорода (АФК) и эндогенными антиоксидантными агентами . ^{[ 16 ]} Высокие уровни АФК вызывают повреждение ДНК с точки зрения одноцепочечных разрывов и двухцепочечных разрывов, часто регистрируемых в бесплодных мужских спермах. ^{[ 17 ]}^{[ 18 ]}^{[ 19 ]}

Внешние факторы

Возраст: Хотя мужчины продуцируют сперму на протяжении всей своей взрослой жизни , пожилой возраст связан с увеличением количества двухцепочечных разрывов ДНК и снижением частоты апоптоза сперматозоидов . ^{[ 13 ]} Такое наблюдение имеет значение для ухудшения выбора сперматозоидов, качества и целостности. ^{[ 20 ]}
Тепловой стресс : высокие температуры вызывают побочные эффекты на ДНК спермы и мужскую фертильность . Чрезмерное тепло связано с нарушением целостности хроматина сперматозоидов , ^{[ 21 ]} и перегрев яичка связано с уменьшенным потенциалом фертильности. ^{[ 22 ]}
Курение : токсины, общие табаки, могут увеличить распространенность фрагментированной ДНК . ^{[ 4 ]} Курение связано со значительно обостренными уровнями семенного АФК и окислительного стресса . ^{[ 23 ]} Повышенная активность АФК приводит к апоптозу и увеличению фрагментации ДНК. ^{[ 16 ]}

Процедура

В настоящее время только протокол SCSA, разработанный Evenson et al. получил защиту товарных знаков в достижении клинической значимости между различными лабораториями. ^{[ 4 ]} Отдельные шаги SCSA следующие:

Замораживание / оттаивание : после эякуляции образцы сперматозоидов человека подвергаются 30-минутному разжижению спермы при 37 ° C, а затем криоконсервация в морозильной камере с ультра-низкой температурой по никоте (от -70 до -110 ° C) или непосредственно в сжиженном низои (от -70 до -110 ° C) или непосредственно в сжиженном криоварию . Полем ^{[ 24 ]} Замороженные или свежие образцы сперматозоидов оттаивают в водяной бане 37 ° C и разбавляются буфером TNE , чтобы получить 200 мкл суспензии (концентрация сперматозоидов: 1-2 x 10^6 мл). ^{[ 24 ]}
Кислотная денатурация : 400 мкл кислого раствора ( рН 1,2), содержащий 0,15 м хлорида натрия раствор , 0,08 млн. Трис соляная кислота и 0,1% Тритона-X 100 добавляют в 200 мкл суспензии сперматозоидов, ^{[ 4 ]}^{[ 24 ]} и раствор смешан строго в течение 30 секунд. Такой процесс обеспечивает денатурацию ядер сперматозоидов с повреждением ДНК .
Окрашивание акридинового оранжевого (AO) : затем в смесь добавляют 1,20 мл окрашивания AO с 6 мкг окрашивания AO/мл буфера. ^{[ 4 ]}^{[ 24 ]} Маленькие молекулы АО проникают через хроматин сперматозоидов в доступе к двухцепочечной ДНК и одноцепочечной ДНК в неповрежденных и дефектных ядрах сперматозоидов соответственно.
Проточная цитометрия (FCM) : с использованием проточного цитометра , 500-1000 сперматозоидов можно исследовать в течение нескольких минут по шкале градации 1024 x 1024 через двойной параметр. ^{[ 9 ]} Визуализируется под синим светом на длине волны , двухцепочечная ДНК из неповрежденных сперматозоидов испускает зеленую ( 488 нм), в то время как агрегация молекул AO одноцепочечная ДНК из дефектной сперма флуоресценцию 450-490 нм ) ^{[ 9 ]}^{[ 4 ]}
Анализ данных : ( из проточного цитометра будет генерироваться рассеянная грама цитограмма), отражающая окрасьсть ДНК из красной (оси x) и зеленых (оси Y), чтобы выделить гетерогенность ; ^{[ 9 ]} С помощью программного обеспечения SCSASOFT® данные из Scattergram будут преобразованы в частотные гистограммы при расчете индекса фрагментации ДНК (DFI) / клеток вне основного пика αT (COMPαT), альфа T (αT) и высокого окрашиваемого ДНК (HDS). Полем ^{[ 4 ]}^{[ 5 ]}

Параметры

SCSA состоит из фиксированной протокометрии проточной цитометрии и специфической вычислительной программы, SCSASOFT ®. Измерения включают индекс фрагментации ДНК (DFI) и высокую фракцию, окрашенную в высокую ДНК (HDS), которая представляет процент сперматозоидов с разрывами ДНК / дефектами протамина и незрелыми сперматозоинами без полной протаминации соответственно. ^{[ 10 ]}

Индекс фрагментации ДНК (DFI)

Также известный как клетки вне основного пика αT (COMPαT), DFI может быть дополнительно подклассифицирован в среднем DFI (x DFI) и стандартном отклонении DFI (SD DFI). ^{[ 5 ]} Индекс был определен как наиболее чувствительные критерии оценки фертильности при отражении целостности ДНК спермы. Нормальный DFI не подразумевает никакого измеримого значения; Умеренный образец DFI делает нормальную морфологию сперматозоидов ; и высокие фракции DFI демонстрировали удлиненные ядра и признаки апоптоза . В целом, чем больше DFI, тем выше вероятность бесплодия или подмерности.

В рамках DFI 0-20%возникновение спонтанной беременности остается последовательным; ^{[ 2 ]} Когда DFI превышает 20%, скорость естественной фертильности постепенно снижается; ^{[ 2 ]} Когда DFI превышает 30%, отношение шансов для естественного или внутриматочного оплодотворения (IUI) близко к нолу значительно снижается на 8-10 раз, что указывает на то, что вероятность беременности . ^{[ 2 ]}

Фракция высокой ДНК (HDS)

Популяция сперматозоидов HDS имеет удивительно высокую степень окрашивания ДНК молекулами AO из -за наличия необработанных протамина P2 . ^{[ 9 ]}^{[ 25 ]} Определение значения HDS отражает структурные аномалии хроматина. Высокое значение HDS указывает на незрелую морфологию сперматозоидов и, следовательно, беременность. ^{[ 25 ]}^{[ 26 ]}

Приложения

Diagnosis of male infertility or subfertility

Since the SCSA can be performed to assess the sperm abnormality, it is a valid instrument to determine male infertility or subfertility.

Although the causes and events that actuate sperm DNA damage and fragmentation are not yet fathomed, Sperm DNA fragmentation has been shown to be closely correlated with fertility and subfertility in not only humans, but also bulls, boars, and stallions.^[5]^[27]^[28]^[29] Such finding asserts the DFI determined by SCSA to be a strong independent predictor of in vivo pregnancy and a clinically useful technique.^[13]^[23]^[30]^[31]^[8]

Currently, 25% DFI is the established clinical threshold in classifying males into statistical probability of: 1) increased time for natural pregnancy, 2) lower chance of Intrauterine insemination (IUI) success, 3) more miscarriage, or 4) infertility. High HDS values are in positive correlation to pregnancy failures.

In such cases, other assisted reproductive technologies (ART) may be performed, including intracytoplasmic sperm injection (ICSI) (for sperm sample with DFI>25%) or testicular sperm extraction (TESE) (for sperm sample with DFI>50%).^[9]

Toxicology studies

Sperm DNA damage can be attributed to exposure chemotherapy, radiotherapy, or other environmental toxicants. SCSA is highly dose-responsive to sperm DNA fragmentation induced by chemical toxicants.^[13] Therefore, SDαt is the most important variable for toxicology studies.

Evaluation of cool-stored semen

SCSA is also performed to assess the quality of laboratory sperm samples that have been stored for at least 24 hours. Semen samples that have been stored at appropriate conditions will have essentially no change, while greater change in DNA quality indicates an improper handling.^[32]

Advantages

SCSA has numerous advantages when compared to other sperm DNA fragmentation (sDF) assays [TUNEL assay, COMET assay, and Sperm Chromatin Dispersion (SCD)], which include:

More time and cost efficient: 5000-10000 spermatozoa can be analysed in less than 5 minutes.^[5]^[4] The efficiency is higher than any other existing sperm fragmentation protocols. Moreover, the requirements for equipment and reagents are relatively low. Only 10 cents are required per test for the reagents required.^[9]
Higher objectivity and accuracy: Conventional sperm analysis includes sperm count, morphology and motility in determination of infertility or subfertility. However, several reports of pregnancy failure had the aforementioned parameters within normal range.^[4] For SCSA, machine-guided DFI and HDS values with an unbiased threshold are measured rather than subjective human-eye evaluation, resulting in a higher precision (Coefficient of Variation testing, CV's of 1-3%).
Higher repeatability: Since sperm count, morphology and motility of semen samples fluctuate within a short period of time, results of analysis are less repeatable. SCSA has a repeatability of 0.98-0.99 in clinical settings. Unless disruption is made by different lifestyles or medical intervention, experimental results are reproducible.^[9]^[4]^[13]

Limitations

Despite the objective data and advantages offered, the efficacy of SCSA in fertility assessment remains doubted clinically. Suggested limitations include:

Poor association between DFI and reproductive outcomes: Low odd ratios were observed between DFI and fertility outcomes in several meta-analysis.^[33]^[34] Furthermore, experimental results are mainly obtained as level 3 evidence (from retrospective cohort studies, case-control studies, and meta-analysis of level 3 studies) with reference to the evidence based medicine (EBM),^[35] suggesting its low clinical value.
Unvalidated threshold: The DFI and HDS were established through measuring the vulnerability of sperm DNA to acid-induced denaturation instead of a direct measurement of sperm DNA integrity.^[35] AO staining on intact and defected sperms may not represent the degree of sperm fragmentation. Hence, the current threshold may not be accurate in reflecting the actual fertility situation.

References

^ "Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA) | Center for Women's Health | OHSU". www.ohsu.edu. Retrieved 2021-03-31.
^ Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e Evenson, Donald P. (2016). "The Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA®) and other sperm DNA fragmentation tests for evaluation of sperm nuclear DNA integrity as related to fertility". Animal Reproduction Science. 169: 56–75. doi:10.1016/j.anireprosci.2016.01.017. PMID 26919909.
^ "Aktuelles". Praxis. 92 (20): 978. 2003. doi:10.1024/0369-8394.92.20.978. ISSN 0369-8394.
^ Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e ^f ^g ^h ⁱ ^j ^k ^l ^m ⁿ ^o EVENSON, DONALD P.; LARSON, KJERSTEN L.; JOST, LORNA K. (2002-01-02). "Sperm Chromatin Structure Assay: Its Clinical Use for Detecting Sperm DNA Fragmentation in Male Infertility and Comparisons With Other Techniques". Journal of Andrology. 23 (1): 25–43. doi:10.1002/j.1939-4640.2002.tb02599.x. ISSN 0196-3635. PMID 11780920.
^ Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e ^f ^g ^h ⁱ Bungum, Mona; Bungum, Leif; Giwercman, Aleksander (2011). "Sperm chromatin structure assay (SCSA): a tool in diagnosis and treatment of infertility". Asian Journal of Andrology. 13 (1): 69–75. doi:10.1038/aja.2010.73. ISSN 1008-682X. PMC 3739398. PMID 21057512.
^ Evenson, D. P.; Witkin, S. S.; de Harven, E.; Bendich, A. (1978-05-01). "Ultrastructure of partially decondensed human spermatozoal chromatin". Journal of Ultrastructure Research. 63 (2): 178–187. doi:10.1016/S0022-5320(78)80073-2. ISSN 0022-5320. PMID 671582.
^ Oleszczuk, K.; Giwercman, A.; Bungum, M. (2016). "Sperm chromatin structure assay in prediction of in vitro fertilization outcome". Andrology. 4 (2): 290–296. doi:10.1111/andr.12153. ISSN 2047-2927. PMID 26757265.
^ Jump up to: ^a ^b Evenson, D.P. (1999-04-01). "Utility of the sperm chromatin structure assay as a diagnostic and prognostic tool in the human fertility clinic". Human Reproduction. 14 (4): 1039–1049. doi:10.1093/humrep/14.4.1039. ISSN 1460-2350. PMID 10221239.
^ Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e ^f ^g ^h Evenson, Donald P. (2013), Carrell, Douglas T.; Aston, Kenneth I. (eds.), "Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA®)", Spermatogenesis, Methods in Molecular Biology, vol. 927, Totowa, NJ: Humana Press, pp. 147–164, doi:10.1007/978-1-62703-038-0_14, ISBN 978-1-62703-037-3, PMID 22992911, retrieved 2021-03-31
^ Jump up to: ^a ^b Ajina, T.; Ammar, O.; Haouas, Z.; Sallem, A.; Ezzi, L.; Grissa, I.; Sakly, W.; Jlali, A.; Mehdi, M. (2017). "Assessment of human sperm DNA integrity using two cytochemical tests: Acridine orange test and toluidine blue assay". Andrologia. 49 (10): e12765. doi:10.1111/and.12765. PMID 28224638. S2CID 22415071.
^ Bannister, Laura A.; Reinholdt, Laura G.; Munroe, Robert J.; Schimenti, John C. (2004). "Positional cloning and characterization of mousemei8, a disrupted allele of the meiotic cohesinRec8". Genesis. 40 (3): 184–194. doi:10.1002/gene.20085. ISSN 1526-954X. PMID 15515002. S2CID 38349506.
^ Page, Andrea W; Orr-Weaver, Terry L (1997). "Stopping and starting the meiotic cell cycle". Current Opinion in Genetics & Development. 7 (1): 23–31. doi:10.1016/s0959-437x(97)80105-0. ISSN 0959-437X. PMID 9024631.
^ Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e ^f Oleszczuk, K.; Giwercman, A.; Bungum, M. (2016-01-12). "Sperm chromatin structure assay in prediction of in vitro fertilization outcome". Andrology. 4 (2): 290–296. doi:10.1111/andr.12153. ISSN 2047-2919. PMID 26757265.
^ Marcon, Ludovic; Boissonneault, Guylain (2004-04-01). "Transient DNA Strand Breaks During Mouse and Human Spermiogenesis:New Insights in Stage Specificity and Link to Chromatin Remodeling1". Biology of Reproduction. 70 (4): 910–918. doi:10.1095/biolreprod.103.022541. ISSN 0006-3363. PMID 14645105.
^ Laberge, R.-M.; Boissonneault, G. (2005). "Chromatin Remodeling in Spermatids: A Sensitive Step for the Genetic Integrity of the Male Gamete". Archives of Andrology. 51 (2): 125–133. doi:10.1080/014850190518134. ISSN 0148-5016. PMID 15804867.
^ Jump up to: ^a ^b ^c Sakkas, D (1999-01-01). "Origin of DNA damage in ejaculated human spermatozoa". Reviews of Reproduction. 4 (1): 31–37. doi:10.1530/ror.0.0040031. ISSN 1359-6004. PMID 10051100.
^ Agarwal, Ashok; Saleh, Ramadan A.; Bedaiwy, Mohamed A. (2003). "Role of reactive oxygen species in the pathophysiology of human reproduction". Fertility and Sterility. 79 (4): 829–843. doi:10.1016/s0015-0282(02)04948-8. ISSN 0015-0282. PMID 12749418.
^ Aitken, RJ; Krausz, C (2001-10-01). "Oxidative stress, DNA damage and the Y chromosome". Reproduction. 122 (4): 497–506. doi:10.1530/rep.0.1220497. hdl:2158/778616. ISSN 1470-1626. PMID 11570956. S2CID 32081883.
^ de Lamirande, E (1997-01-01). "Reactive oxygen species and sperm physiology". Reviews of Reproduction. 2 (1): 48–54. doi:10.1530/revreprod/2.1.48. ISSN 1359-6004. PMID 9414465.
^ Singh, Narendra P; Muller, Charles H; Berger, Richard E (2003). "Effects of age on DNA double-strand breaks and apoptosis in human sperm". Fertility and Sterility. 80 (6): 1420–1430. doi:10.1016/j.fertnstert.2003.04.002. ISSN 0015-0282. PMID 14667878.
^ Ahmad, Gulfam; Moinard, Nathalie; Esquerré-Lamare, Camille; Mieusset, Roger; Bujan, Louis (2012). "Mild induced testicular and epididymal hyperthermia alters sperm chromatin integrity in men". Fertility and Sterility. 97 (3): 546–553. doi:10.1016/j.fertnstert.2011.12.025. ISSN 0015-0282. PMID 22265039.
^ Thonneau, P.; Bujan, L.; Multigner, L.; Mieusset, R. (1998-08-01). "Occupational heat exposure and male fertility: a review". Human Reproduction. 13 (8): 2122–2125. doi:10.1093/humrep/13.8.2122. ISSN 0268-1161. PMID 9756281.
^ Jump up to: ^a ^b Saleh, Ramadan A; Agarwal, Ashok; Nelson, David R; Nada, Essam A; El-Tonsy, Mohammed H; Alvarez, Juan G; Thomas, Anthony J; Sharma, Rakesh K (2002). "Increased sperm nuclear DNA damage in normozoospermic infertile men: a prospective study". Fertility and Sterility. 78 (2): 313–318. doi:10.1016/s0015-0282(02)03219-3. ISSN 0015-0282. PMID 12137868.
^ Jump up to: ^a ^b ^c ^d Evenson, Donald; Jost, Lorna (2000). "Sperm chromatin structure assay is useful for fertility assessment". Methods in Cell Science. 22 (2/3): 169–189. doi:10.1023/A:1009844109023. PMID 11264952.
^ Jump up to: ^a ^b Lewis, Sheena E.M. (2013-06-01). "The place of sperm DNA fragmentation testing in current day fertility management". Middle East Fertility Society Journal. 18 (2): 78–82. doi:10.1016/j.mefs.2013.01.010. ISSN 1110-5690. S2CID 53339711.
^ Evenson, D.; Darzynkiewicz, Z; Melamed, M. (1980-12-05). "Relation of mammalian sperm chromatin heterogeneity to fertility". Science. 210 (4474): 1131–1133. Bibcode:1980Sci...210.1131E. doi:10.1126/science.7444440. ISSN 0036-8075. PMID 7444440.
^ Knuth, Ulrich A.; Behre, Hermann; Belkien, Lutz; Bents, Hinrich; Nieschlag, Eberhard (1985). "Clinical trial of 19-nortestosterone-hexoxyphenylpropionate (Anadur) for male fertility regulation". Fertility and Sterility. 44 (6): 814–821. doi:10.1016/s0015-0282(16)49043-6. ISSN 0015-0282. PMID 3935486.
^ Giwercman, Aleksander; Lindstedt, Lars; Larsson, Mattias; Bungum, Mona; Spano, Marcello; Levine, Richard J.; Rylander, Lars (2009-10-15). "Sperm chromatin structure assay as an independent predictor of fertility in vivo: a case-control study". International Journal of Andrology. 33 (1): e221–e227. doi:10.1111/j.1365-2605.2009.00995.x. ISSN 0105-6263. PMID 19840147.
^ Castilla, J.A.; Zamora, S.; Gonzalvo, M.C.; Luna del Castillo, J.D.; Roldan-Nofuentes, J.A.; Clavero, A.; Björndahl, L.; Martínez, L. (2010). "Sperm chromatin structure assay and classical semen parameters: systematic review". Reproductive BioMedicine Online. 20 (1): 114–124. doi:10.1016/j.rbmo.2009.10.024. ISSN 1472-6483. PMID 20158996.
^ Spanò, Marcello; Bonde, Jens P; Hjøllund, Henrik I; Kolstad, Henrik A; Cordelli, Eugenia; Leter, Giorgio (2000). "Sperm chromatin damage impairs human fertility‡‡The Danish First Pregnancy Planner Study is a collaborative follow-up study on environmental and biological determinants of fertility. The project is coordinated by the Steno Institute of Public Health, Aarhus University and is undertaken in collaboration with the Department of Growth and Reproduction, National University Hospital, Copenhagen. The team includes Jens Peter E. Bonde, Niels Henrik I. Hjøllund, Tina Kold Jensen, Tine Brink Henriksen, Henrik A. Kolstad, Erik Ernst, Aleksander Giwercman, Niels Erik Skakkebæk, and Jørn Olsen". Fertility and Sterility. 73 (1): 43–50. doi:10.1016/S0015-0282(99)00462-8. PMID 10632410.
^ Bungum, M. (2004-04-22). "The predictive value of sperm chromatin structure assay (SCSA) parameters for the outcome of intrauterine insemination, IVF and ICSI". Human Reproduction. 19 (6): 1401–1408. doi:10.1093/humrep/deh280. ISSN 1460-2350. PMID 15117894.
^ Любовь, Чарльз С. (2005). «Анализ структуры сперматозоидов: обзор клинических применений» . Наука о размножении животных . 89 (1–4): 39–45. doi : 10.1016/j.anireprosci.2005.06.019 . ISSN 0378-4320 . PMID 16140481 .
^ Cissen, Maartje; Вели, Мадлон Ван; Шолтен, Ирма; Манселл, Стивен; Брюин, Ян Питер де; Мол, Бен Виллем; Браат, Диди; Repuping, sjoerd; Hamer, Geert (2016-11-10). ДРЕВЕТ, Жоэль Р (ред.). «Измерение фрагментации ДНК спермы и клинических результатов медицинского размножения: систематический обзор и метаанализ» . Plos один . 11 (11): E0165125. Bibcode : 2016ploso..1165125c . Doi : 10.1371/journal.pone.0165125 . ISSN 1932-6203 . PMC 5104467 . PMID 27832085 .
^ Саймон, Люк; Зини, Арманд; Dyachenko, Alina; Ciampi, Антонио; Каррелл, Дугласт (2016). «Систематический обзор и метаанализ для определения влияния повреждения ДНК спермы на результат ЭКО и ICSI» . Азиатский журнал андрологии . 19 (1): 80–90. doi : 10.4103/1008-682X.182822 . ISSN 1008-682X . PMC 5227680 . PMID 27345006 .
^ Jump up to: ^а ^{беременный} Зини, Арманд (сентябрь 2017 г.). «Преимущества и ограничения тестирования ДНК спермы в клинической практике» . Трансляционная андрология и урология . 6 (S4): S326 - S327. doi : 10.21037/tau.2017.09.09 . PMC 5643662 . PMID 29082133 .

[1] "Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA) | Center for Women's Health | OHSU". www.ohsu.edu. Retrieved 2021-03-31.

[:3-2] Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e Evenson, Donald P. (2016). "The Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA®) and other sperm DNA fragmentation tests for evaluation of sperm nuclear DNA integrity as related to fertility". Animal Reproduction Science. 169: 56–75. doi:10.1016/j.anireprosci.2016.01.017. PMID 26919909.

[3] "Aktuelles". Praxis. 92 (20): 978. 2003. doi:10.1024/0369-8394.92.20.978. ISSN 0369-8394.

[:5-4] Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e ^f ^g ^h ⁱ ^j ^k ^l ^m ⁿ ^o EVENSON, DONALD P.; LARSON, KJERSTEN L.; JOST, LORNA K. (2002-01-02). "Sperm Chromatin Structure Assay: Its Clinical Use for Detecting Sperm DNA Fragmentation in Male Infertility and Comparisons With Other Techniques". Journal of Andrology. 23 (1): 25–43. doi:10.1002/j.1939-4640.2002.tb02599.x. ISSN 0196-3635. PMID 11780920.

[:6-5] Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e ^f ^g ^h ⁱ Bungum, Mona; Bungum, Leif; Giwercman, Aleksander (2011). "Sperm chromatin structure assay (SCSA): a tool in diagnosis and treatment of infertility". Asian Journal of Andrology. 13 (1): 69–75. doi:10.1038/aja.2010.73. ISSN 1008-682X. PMC 3739398. PMID 21057512.

[6] Evenson, D. P.; Witkin, S. S.; de Harven, E.; Bendich, A. (1978-05-01). "Ultrastructure of partially decondensed human spermatozoal chromatin". Journal of Ultrastructure Research. 63 (2): 178–187. doi:10.1016/S0022-5320(78)80073-2. ISSN 0022-5320. PMID 671582.

[7] Oleszczuk, K.; Giwercman, A.; Bungum, M. (2016). "Sperm chromatin structure assay in prediction of in vitro fertilization outcome". Andrology. 4 (2): 290–296. doi:10.1111/andr.12153. ISSN 2047-2927. PMID 26757265.

[:9-8] Jump up to: ^a ^b Evenson, D.P. (1999-04-01). "Utility of the sperm chromatin structure assay as a diagnostic and prognostic tool in the human fertility clinic". Human Reproduction. 14 (4): 1039–1049. doi:10.1093/humrep/14.4.1039. ISSN 1460-2350. PMID 10221239.

[:4-9] Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e ^f ^g ^h Evenson, Donald P. (2013), Carrell, Douglas T.; Aston, Kenneth I. (eds.), "Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA®)", Spermatogenesis, Methods in Molecular Biology, vol. 927, Totowa, NJ: Humana Press, pp. 147–164, doi:10.1007/978-1-62703-038-0_14, ISBN 978-1-62703-037-3, PMID 22992911, retrieved 2021-03-31

[:7-10] Jump up to: ^a ^b Ajina, T.; Ammar, O.; Haouas, Z.; Sallem, A.; Ezzi, L.; Grissa, I.; Sakly, W.; Jlali, A.; Mehdi, M. (2017). "Assessment of human sperm DNA integrity using two cytochemical tests: Acridine orange test and toluidine blue assay". Andrologia. 49 (10): e12765. doi:10.1111/and.12765. PMID 28224638. S2CID 22415071.

[11] Bannister, Laura A.; Reinholdt, Laura G.; Munroe, Robert J.; Schimenti, John C. (2004). "Positional cloning and characterization of mousemei8, a disrupted allele of the meiotic cohesinRec8". Genesis. 40 (3): 184–194. doi:10.1002/gene.20085. ISSN 1526-954X. PMID 15515002. S2CID 38349506.

[12] Page, Andrea W; Orr-Weaver, Terry L (1997). "Stopping and starting the meiotic cell cycle". Current Opinion in Genetics & Development. 7 (1): 23–31. doi:10.1016/s0959-437x(97)80105-0. ISSN 0959-437X. PMID 9024631.

[:0-13] Jump up to: ^a ^b ^c ^d ^e ^f Oleszczuk, K.; Giwercman, A.; Bungum, M. (2016-01-12). "Sperm chromatin structure assay in prediction of in vitro fertilization outcome". Andrology. 4 (2): 290–296. doi:10.1111/andr.12153. ISSN 2047-2919. PMID 26757265.

[14] Marcon, Ludovic; Boissonneault, Guylain (2004-04-01). "Transient DNA Strand Breaks During Mouse and Human Spermiogenesis:New Insights in Stage Specificity and Link to Chromatin Remodeling1". Biology of Reproduction. 70 (4): 910–918. doi:10.1095/biolreprod.103.022541. ISSN 0006-3363. PMID 14645105.

[15] Laberge, R.-M.; Boissonneault, G. (2005). "Chromatin Remodeling in Spermatids: A Sensitive Step for the Genetic Integrity of the Male Gamete". Archives of Andrology. 51 (2): 125–133. doi:10.1080/014850190518134. ISSN 0148-5016. PMID 15804867.

[:1-16] Jump up to: ^a ^b ^c Sakkas, D (1999-01-01). "Origin of DNA damage in ejaculated human spermatozoa". Reviews of Reproduction. 4 (1): 31–37. doi:10.1530/ror.0.0040031. ISSN 1359-6004. PMID 10051100.

[17] Agarwal, Ashok; Saleh, Ramadan A.; Bedaiwy, Mohamed A. (2003). "Role of reactive oxygen species in the pathophysiology of human reproduction". Fertility and Sterility. 79 (4): 829–843. doi:10.1016/s0015-0282(02)04948-8. ISSN 0015-0282. PMID 12749418.

[18] Aitken, RJ; Krausz, C (2001-10-01). "Oxidative stress, DNA damage and the Y chromosome". Reproduction. 122 (4): 497–506. doi:10.1530/rep.0.1220497. hdl:2158/778616. ISSN 1470-1626. PMID 11570956. S2CID 32081883.

[19] Lamirande, E (1997-01-01). "Reactive oxygen species and sperm physiology". Reviews of Reproduction. 2 (1): 48–54. doi:10.1530/revreprod/2.1.48. ISSN 1359-6004. PMID 9414465.

[20] Singh, Narendra P; Muller, Charles H; Berger, Richard E (2003). "Effects of age on DNA double-strand breaks and apoptosis in human sperm". Fertility and Sterility. 80 (6): 1420–1430. doi:10.1016/j.fertnstert.2003.04.002. ISSN 0015-0282. PMID 14667878.

[21] Ahmad, Gulfam; Moinard, Nathalie; Esquerré-Lamare, Camille; Mieusset, Roger; Bujan, Louis (2012). "Mild induced testicular and epididymal hyperthermia alters sperm chromatin integrity in men". Fertility and Sterility. 97 (3): 546–553. doi:10.1016/j.fertnstert.2011.12.025. ISSN 0015-0282. PMID 22265039.

[22] Thonneau, P.; Bujan, L.; Multigner, L.; Mieusset, R. (1998-08-01). "Occupational heat exposure and male fertility: a review". Human Reproduction. 13 (8): 2122–2125. doi:10.1093/humrep/13.8.2122. ISSN 0268-1161. PMID 9756281.

[:2-23] Jump up to: ^a ^b Saleh, Ramadan A; Agarwal, Ashok; Nelson, David R; Nada, Essam A; El-Tonsy, Mohammed H; Alvarez, Juan G; Thomas, Anthony J; Sharma, Rakesh K (2002). "Increased sperm nuclear DNA damage in normozoospermic infertile men: a prospective study". Fertility and Sterility. 78 (2): 313–318. doi:10.1016/s0015-0282(02)03219-3. ISSN 0015-0282. PMID 12137868.

[:8-24] Jump up to: ^a ^b ^c ^d Evenson, Donald; Jost, Lorna (2000). "Sperm chromatin structure assay is useful for fertility assessment". Methods in Cell Science. 22 (2/3): 169–189. doi:10.1023/A:1009844109023. PMID 11264952.

[:10-25] Jump up to: ^a ^b Lewis, Sheena E.M. (2013-06-01). "The place of sperm DNA fragmentation testing in current day fertility management". Middle East Fertility Society Journal. 18 (2): 78–82. doi:10.1016/j.mefs.2013.01.010. ISSN 1110-5690. S2CID 53339711.

[26] Evenson, D.; Darzynkiewicz, Z; Melamed, M. (1980-12-05). "Relation of mammalian sperm chromatin heterogeneity to fertility". Science. 210 (4474): 1131–1133. Bibcode:1980Sci...210.1131E. doi:10.1126/science.7444440. ISSN 0036-8075. PMID 7444440.

[27] Knuth, Ulrich A.; Behre, Hermann; Belkien, Lutz; Bents, Hinrich; Nieschlag, Eberhard (1985). "Clinical trial of 19-nortestosterone-hexoxyphenylpropionate (Anadur) for male fertility regulation". Fertility and Sterility. 44 (6): 814–821. doi:10.1016/s0015-0282(16)49043-6. ISSN 0015-0282. PMID 3935486.

[28] Giwercman, Aleksander; Lindstedt, Lars; Larsson, Mattias; Bungum, Mona; Spano, Marcello; Levine, Richard J.; Rylander, Lars (2009-10-15). "Sperm chromatin structure assay as an independent predictor of fertility in vivo: a case-control study". International Journal of Andrology. 33 (1): e221–e227. doi:10.1111/j.1365-2605.2009.00995.x. ISSN 0105-6263. PMID 19840147.

[29] Castilla, J.A.; Zamora, S.; Gonzalvo, M.C.; Luna del Castillo, J.D.; Roldan-Nofuentes, J.A.; Clavero, A.; Björndahl, L.; Martínez, L. (2010). "Sperm chromatin structure assay and classical semen parameters: systematic review". Reproductive BioMedicine Online. 20 (1): 114–124. doi:10.1016/j.rbmo.2009.10.024. ISSN 1472-6483. PMID 20158996.

[30] Spanò, Marcello; Bonde, Jens P; Hjøllund, Henrik I; Kolstad, Henrik A; Cordelli, Eugenia; Leter, Giorgio (2000). "Sperm chromatin damage impairs human fertility‡‡The Danish First Pregnancy Planner Study is a collaborative follow-up study on environmental and biological determinants of fertility. The project is coordinated by the Steno Institute of Public Health, Aarhus University and is undertaken in collaboration with the Department of Growth and Reproduction, National University Hospital, Copenhagen. The team includes Jens Peter E. Bonde, Niels Henrik I. Hjøllund, Tina Kold Jensen, Tine Brink Henriksen, Henrik A. Kolstad, Erik Ernst, Aleksander Giwercman, Niels Erik Skakkebæk, and Jørn Olsen". Fertility and Sterility. 73 (1): 43–50. doi:10.1016/S0015-0282(99)00462-8. PMID 10632410.

[31] Bungum, M. (2004-04-22). "The predictive value of sperm chromatin structure assay (SCSA) parameters for the outcome of intrauterine insemination, IVF and ICSI". Human Reproduction. 19 (6): 1401–1408. doi:10.1093/humrep/deh280. ISSN 1460-2350. PMID 15117894.

[32] Любовь, Чарльз С. (2005). «Анализ структуры сперматозоидов: обзор клинических применений» . Наука о размножении животных . 89 (1–4): 39–45. doi : 10.1016/j.anireprosci.2005.06.019 . ISSN 0378-4320 . PMID 16140481 .

[33] Cissen, Maartje; Вели, Мадлон Ван; Шолтен, Ирма; Манселл, Стивен; Брюин, Ян Питер де; Мол, Бен Виллем; Браат, Диди; Repuping, sjoerd; Hamer, Geert (2016-11-10). ДРЕВЕТ, Жоэль Р (ред.). «Измерение фрагментации ДНК спермы и клинических результатов медицинского размножения: систематический обзор и метаанализ» . Plos один . 11 (11): E0165125. Bibcode : 2016ploso..1165125c . Doi : 10.1371/journal.pone.0165125 . ISSN 1932-6203 . PMC 5104467 . PMID 27832085 .

[34] Саймон, Люк; Зини, Арманд; Dyachenko, Alina; Ciampi, Антонио; Каррелл, Дугласт (2016). «Систематический обзор и метаанализ для определения влияния повреждения ДНК спермы на результат ЭКО и ICSI» . Азиатский журнал андрологии . 19 (1): 80–90. doi : 10.4103/1008-682X.182822 . ISSN 1008-682X . PMC 5227680 . PMID 27345006 .

[:11-35] Jump up to: ^а ^{беременный} Зини, Арманд (сентябрь 2017 г.). «Преимущества и ограничения тестирования ДНК спермы в клинической практике» . Трансляционная андрология и урология . 6 (S4): S326 - S327. doi : 10.21037/tau.2017.09.09 . PMC 5643662 . PMID 29082133 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]

[ 13 ]

[ 14 ]

[ 15 ]

[ 16 ]

[ 17 ]

[ 18 ]

[ 19 ]

[ 20 ]

[ 21 ]

[ 22 ]

[ 23 ]

[ 24 ]

[ 25 ]

[ 26 ]

[27]

[28]

[29]

[30]

[31]

[32]

[33]

[34]

[35]