✖


Jump to content

Эпоксидная гидролаза 2

Эта статья была обновлена ​​внешним экспертом по двойной модели публикации. Соответствующая рецензируемая статья была опубликована в журнале Gene. Нажмите, чтобы просмотреть.
(Перенаправлено из EPHX2 )

Ephx2
Доступные структуры
PDB Поиск ортолога: PDBE RCSB
Идентификаторы
Псевдонимы EPHX2 , CEH, SEH, Эпоксидная гидролаза 2, ABHD20
Внешние идентификаторы Омим : 132811 ; MGI : 99500 ; Гомологен : 37558 ; Genecards : ephx2 ; OMA : ESHX2 - Ортологи
Ортологи
Разновидность Человек Мышь
Входить

2053

13850

Набор

ENSG00000120915

EMSMUSM00000022040

Uniprot

P34913

P34914

Refseq (мРНК)

NM_001979
NM_001256482
NM_001256483
NM_001256484

NM_001271402
NM_001271403
NM_001271421
NM_007940

Refseq (белок)

NP_001243411
NP_001243412
NP_001243413
NP_001970

NP_001258331
NP_001258332
NP_001258350
NP_031966

Расположение (UCSC) Chr 8: 27,49 - 27,55 МБ Chr 14: 66,32 - 66,36 МБ
PubMed Search [ 3 ] [ 4 ]
Викидид
Посмотреть/редактировать человека Посмотреть/редактировать мышь

Растворимая эпоксидная гидролаза (SEH) представляет собой бифункциональный фермент , который у людей кодируется ephx2 геном . [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] SEH является членом семейства эпоксид -гидролаз . Этот фермент, обнаруженный как в цитозоле , так и в пероксисомах , связывается со специфическими эпоксидами и превращает их в соответствующие диолы . Другая область этого белка также обладает активностью липидфосфатной фосфатазы . Мутации в гене EPHX2 были связаны с семейной гиперхолестеринемией . [ 5 ]

Распределение тканей

[ редактировать ]

В то время как наиболее высоко экспрессируется в печени, SEH также экспрессируется в других тканях, включая эндотелий сосудов , лейкоциты, эритроциты, клетки гладких мышц, адипоциты и проксимальные канальцы почек . [ 6 ] В человеческом мозге фермент широко распределяется, в основном в телах нейрональных клеток, а также в астроцитах и ​​олигодендроцитах. [ 8 ]

Катализированные реакции

[ редактировать ]
Реакции, катализируемые растворимой эпоксидной гидролазой

Форма SEH во внутриклеточной среде представляет собой гомодимер с двумя различными активностью в двух отдельных структурных доменах каждого мономера: активность С-концевой эпоксидной гидролазы ( растворимая эпоксид гидролаза : EC 3.3.2.10) и N-концевая фосфатаза ( липида -Фосфатфосфатаза : ЕС 3.1.3.76). [ 6 ] SEH превращает эпоксиды, или три члена циклических эфиров, в соответствующие диолы посредством добавления молекулы воды. [ 6 ] Полученные диолы более растворимы в воде, чем родительские эпоксиды, и поэтому более легко выделяются организмом. [ 6 ]

C-термин-EH катализирует добавление воды в эпоксид с получением вик-диола (реакция 1). [ 6 ] Нермические фос гидролизуют фосфатные моноэфиры, такие как липидные фосфаты, для получения спиртов и фосфорной кислоты (реакция 2). [ 6 ] C-термин-EH гидролизует один важный класс липидных сигнальных молекул, который включает в себя множество эпоксиикозатриеновых кислот (EETS), которые обладают вазоактивными, противовоспалительными и анальгетическими свойствами. [ 9 ]

SEH также, по -видимому, является гидролазой гепоксилин, которая отвечает за инактивацию метаболитов эпоксиалькохоль арахидоновой кислоты, гепоксилина A3 и гепоксиина B3. [ 10 ] [ 11 ]

Открытие

[ редактировать ]

SEH был впервые идентифицирован в цитозольной фракции мышиной печени посредством его активности на эпоксид, содержащие субстраты, такие как ювенильные гормоны и липидные эпоксиды, такие как эпоксисное звание. [ 12 ] Было показано, что растворимая активность EH отличается от активности микросомальной эпоксидной гидролазы (MEH), ранее обнаруженной с другой селективностью субстрата и клеточной локализацией, чем MEH. Исследования с использованием липидного эпоксида в качестве субстрата обнаружили эту активность в растворимой фракции множественных органов, хотя и в меньшем количестве, чем в печени и почках. [ 13 ] Активность фермента была обнаружена у кроликов, мышей и крыс и людей, и в настоящее время считается повсеместным у позвоночных. [ 14 ] Предлагаемый фермент был впервые назван цитозольной эпоксидной гидролазой; Однако после его открытия внутри пероксисомов некоторых органов он был переименован в растворимый эпоксидный гидролаза или SEH. [ 14 ]

Функция

[ редактировать ]

SEH обладает ограниченной селективностью субстрата и не было показано, что он гидролизует какие -либо токсичные или мутагенные ксенобиотики . [ 6 ] И наоборот, SEH играет важную роль в метаболизме in vivo эндогенных липидных эпоксидов, таких как EETS и оксид Squalene , ключевой промежуток в синтезе холестерина. [ 6 ] EET являются липидными сигнальными молекулами, которые функционируют аутокринным и паракрическим образом . [ 15 ] Они продуцируются, когда арахидоновая кислота метаболизируется цитохромом P450 (CYP). [ 15 ] Эти ферменты эпоксидируют двойные связи в арахидоновой кислоте с образованием четырех региоизомеров. [ 6 ] Арахидоновая кислота также является предшественником простагландинов и лейкотриенов, которые продуцируются циклооксигеназами и липоксигеназами, соответственно. [ 9 ] Эти липиды играют роль в астме, болью и воспалении и являются мишенями нескольких фармацевтических препаратов. [ 16 ] Рецептор EET или рецепторы не были идентифицированы, но было разработано несколько инструментов для изучения биологии EET, к ним относятся небольшие ингибиторы SEH -молекулы, MIMIC EET и генетические модели SEH. Благодаря использованию этих инструментов, а также самих EET, было обнаружено, что EET обладают противовоспалительными и вазоактивными свойствами. [ 6 ] Было использовано несколько моделей заболеваний, в том числе гипертония, вызванная ANG-II , и хирургические модели ишемии головного мозга и сердца. модели in vitro, такие как изолированные коронарные кольца и анализы агрегации тромбоцитов . Также использовались [ 6 ]

Предлагаемая роль SEH в регуляции гипертонии может использоваться в качестве простой модели функции SEH в почке. [ 17 ] Здесь EETS являются вазодилярующими , и их можно рассматривать как баланс других вазоконстриктивных сигналов. SEH гидролизует EET, чтобы сформировать дигидроксиикосатриеновые кислоты (DHET). [ 17 ] Эти молекулы являются более растворимыми в воде и легче метаболизируются другими ферментами, поэтому вазодилаторный сигнал удаляется из места действия посредством экскреции, опрокидывая баланс вазоконстриктивных и вазодилаторных сигналов в направлении вазоконстрикции. Это изменение в липидной передаче сигналов повышает сосудистую устойчивость к кровотоку и кровяному давлению. [ 6 ] Сокращая активность эпоксидной гидролазы SEH и тем самым отключая основной путь метаболизма EETS, уровни этих молекул могут быть стабилизированы или увеличены, увеличивая кровоток и снижая гипертонию. [ 17 ] Это снижение активности SEH может быть достигнуто в генетических моделях, в которых SEH был выбит, или с помощью малых молекул -ингибиторов SEH. [ 18 ]

Эта упрощенная модель осложняется рядом факторов in vivo. EETS отображает разные свойства в разных сосудистых кроватях. [ 15 ] DHETS более легко выводится, но они еще не полностью охарактеризованы и могут обладать самими биологическими свойствами, усложняя баланс сигналов, описанный в упрощенной модели. [ 6 ] Существуют эпоксиды других липидов, помимо арахидоновой кислоты, таких как омега -три докозагексаеновая кислота ( DHA ) и эпоксиды эйкозапентановой кислоты (EPA). [ 19 ] Было показано, что эти липидные эпоксиды оказывают биологические эффекты in vitro, в которых они ингибируют агрегацию тромбоцитов. [ 20 ] На самом деле, в некоторых анализах они более сильные, чем EETS. [ 21 ] Другие эпоксидированные липиды включают 18-углеродный лейкотоксин и изолекотоксин. [ 22 ] Дипоксид линолевой кислоты может образовывать тетрагидрофуранские диолы, [ 23 ]

SEH метаболизирует биологически активные эпоксиальные метаболиты арахидновой кислоты, гепоксилин A3 (8-гидрокси-11 S , 12 с эпоксия (5 z , 8 z , 14 z ) -eicosatrienoic) к триоксилину A3 (8,11,12-тригидроксии. -(5 z , 9 e , 14 z ) -eicosatrienoic кислоты) и гепоксилин B3 (10-гидрокси-11 S , 12 с эпоксидная (5 z , 9 e , 14 z ) -eicosatrienoic кислота) к триоксину B3 (10, 11,12-тригидрокси- (5 Z , 9 e , 14 z ) -eicosatrienoic кислоты. [ 24 ] Эти тригидрокси продукты, как правило, считаются неактивными, и, как правило, путь SEH ограничивает действия гепоксилинов. [ 11 ] [ 24 ]

Было показано, что активность фосфатазы SEH гидролизует липидные фосфаты in vitro, такие как терпеновые пирофосфаты или лизофосфатидные кислоты . [ 6 ] Исследования показывают потенциальную роль SEH в регуляции биосинтеза холестерина и метаболизма в мозге. Если N-концевой домен SEH регулирует метаболизм холестерина, он воодушевляет, что более высокие уровни ее фосфатазной активности могут потенциально увеличить концентрации холестерина в мозге. [ 25 ] Однако его биологическая роль до сих пор неизвестна.

Клиническое значение

[ редактировать ]

Благодаря метаболизму EETS и других липидных медиаторов SEH играет роль в нескольких заболеваниях, включая гипертонию , сердечную гипертрофию , артериосклероз головного мозга и сердца , ишемию / реперфузию , рак и боль. [ 15 ] Из -за своей возможной роли в сердечно -сосудистых и других заболеваниях SEH преследуется в качестве фармакологической мишени, и доступны мощные ингибиторы малых молекул. [ 18 ]

Из -за последствий для здоровья человека, SEH преследовал в качестве фармацевтической цели, и в частном и государственном секторах разработали несколько ингибиторов SEH. [ 18 ] Один из таких ингибиторов, UC1153 (AR9281), был доставлен в исследование Clinal Phase IIA для лечения гипертонии ARête Therapeutics. [ 26 ] Тем не менее, UC1153 провалил клиническое исследование, в значительной степени из -за его плохих фармакокинетических свойств. [ 18 ] С момента этого исследования, другой ингибитор SEH, GSK2256294, разработанный для хронической обструктивной болезни легких по GlaxoSmithkline, вступила в фазу предварительного перерыва клинического исследования фазы I для курильщиков с ожирением. [ 27 ] Эйкоз разрабатывает и применяет ингибиторы SEH к лечению хронической боли у людей, компаньонов и лошадей. ингибитор EC Было показано, что 1728 успешно лечит ламинит для лошадей и облегчает воспалительную боль у собак и кошек и в настоящее время проходит клинические испытания у лошадей. Ингибитор SEH EC 5026 был выбран в качестве терапевтического для диабетической невропатии и недавно вступил в клинические испытания фазы 1. [ 28 ] Таким образом, проценты продолжаются в SEH как терапевтическая цель. Другое препарат, описанный как небольшая молекуля тромболитический , с множественными механизмами действия, SMTP-7 , был обнаружен, действует как ингибитор SEH, но все еще находится на ранних экспериментальных этапах. [ 29 ] [ 30 ]

Одним из показателей возможной терапевтической ценности ингибирования SEH является исследования, изучающие физиологически значимые однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) SEH в популяциях человека. [ 31 ] Развитие риска коронарной артерии у молодых людей (Cardia) и исследования атеросклероза в сообществах (ARIC) оба связанных SNP в области кодирования SEH с коронарной болезнью сердца. [ 32 ] [ 33 ] В этих исследованиях были идентифицированы два несинонимичных SNP, R287Q и K55R. R287Q изменяет аргинин в положении 287 в наиболее частом аллеле на глютамин , в то время как K55R изменяет лизин в положении 55 на аргинин. R287Q был связан с кальцификацией коронарной артерии в афроамериканском населении, участвующем в исследовании Cardia. [ 32 ] [ 34 ] Аллель K55R связан с риском развития ишемической болезни сердца у кавказцев, участвующих в исследовании ARIC, где он также был связан с более высоким риском гипертонии и ишемического инсульта у мужских гомозигот . [ 33 ]

Примечания

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Jump up to: а беременный в GRCH38: Ensembl Release 89: ENSG00000120915 - Ensembl , май 2017 г.
  2. ^ Jump up to: а беременный в GRCM38: Ensembl Release 89: Ensmusg00000022040 - Ensembl , май 2017 г.
  3. ^ «Человеческая PubMed ссылка:» . Национальный центр информации о биотехнологии, Национальная медицина США .
  4. ^ «Мышь Pubmed ссылка:» . Национальный центр информации о биотехнологии, Национальная медицина США .
  5. ^ Jump up to: а беременный «Ген Entrez: эпоксидная гидролаза 2, цитоплазматическая» .
  6. ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон глин час я Дж k л м не а Morisseau C, Hammock BD (2013). «Влияние растворимой эпоксидной гидролазы и эпоксиикозаноидов на здоровье человека» . Анну. Преподобный Фармакол. Токсиколовый . 53 : 37–58. doi : 10.1146/annurev-pharmtox-011112-140244 . PMC   3578707 . PMID   23020295 .
  7. ^ Харрис Т.Р., Гамак Б.Д. (сентябрь 2013 г.). «Растворимая эпоксидная гидролаза: структура гена, экспрессия и делеция» . Ген . 526 (2): 61–74. doi : 10.1016/j.gene.2013.05.008 . PMC   3733540 . PMID   23701967 .
  8. ^ Sura P, Sura R, Enayetallah AE, Grant DF (2008). «Распределение и экспрессия растворимой эпоксидной гидролазы в мозге человека» . J. Histochem. Цитохим . 56 (6): 551–559. doi : 10.1369/jhc.2008.950659 . PMC   2386770 . PMID   18319271 .
  9. ^ Jump up to: а беременный Spector AA, Norris AW (март 2007 г.). «Действие эпоксиикосатриеновых кислот на клеточную функцию». Являюсь. J. Physiol., Cell Physiol . 292 (3): C996–1012. doi : 10.1152/ajpcell.00402.2006 . PMID   16987999 .
  10. ^ Cronin A, Decker M, Arand M (апрель 2011 г.). «Растворимая эпоксидная гидролаза из млекопитающих идентична гепоксилин -гидролазе печени» . Журнал липидных исследований . 52 (4): 712–9. doi : 10.1194/jlr.m009639 . PMC   3284163 . PMID   21217101 .
  11. ^ Jump up to: а беременный Muñoz-Garcia A, Thomas CP, Keeney DS, Zheng Y, Brash AR (март 2014 г.). «Важность пути липоксигеназы-хипоксилина в эпидермальном барьере млекопитающих» . Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Молекулярная и клеточная биология липидов . 1841 (3): 401–8. doi : 10.1016/j.bbalip.2013.08.020 . PMC   4116325 . PMID   24021977 .
  12. ^ Morisseau C, Hammock BD (июнь 2008 г.). «Джерри Брукс и эпоксидные гидролазы: четыре десятилетия к фармацевтической препарате». Вредитель управление. Наука ​ 64 (6): 594–609. doi : 10.1002/ps.1583 . PMID   18383502 .
  13. ^ Gill SS, Hammock BD (февраль 1980 г.). «Распределение и свойства растворимой эпоксидразы млекопитающих». Биохимия. Фармакол . 29 (3): 389–95. doi : 10.1016/0006-2952 (80) 90518-3 . PMID   7362652 .
  14. ^ Jump up to: а беременный Newman JW, Morisseau C, Hammock BD (январь 2005 г.). «Эпоксидные гидролазы: их роли и взаимодействие с липидным метаболизмом». Прогик Липид рез . 44 (1): 1–51. doi : 10.1016/j.plipres.2004.10.001 . PMID   15748653 .
  15. ^ Jump up to: а беременный в дюймовый Imig JD, Hammock BD (октябрь 2009 г.). «Растворимая эпоксидная гидролаза как терапевтическая мишень при сердечно -сосудистых заболеваниях» . Nat Rev Drug Discov . 8 (10): 794–805. doi : 10.1038/nrd2875 . PMC   3021468 . PMID   19794443 .
  16. ^ Смит В.Л., Урада Й, Якобссон П.Дж. (октябрь 2011 г.). «Ферменты циклооксигеназных путей биосинтеза простаноида» . Химический Преподобный ​ 111 (10): 5821–65. doi : 10.1021/cr2002992 . PMC   3285496 . PMID   21942677 .
  17. ^ Jump up to: а беременный в Imig JD (сентябрь 2005 г.). «Метаболиты эпоксидной гидролазы и эпоксигеназы в качестве терапевтических мишеней при заболеваниях почек». Являюсь. J. Physiol. Почечный физиол . 289 (3): F496–503. doi : 10.1152/ajprenal.00350.2004 . PMID   16093425 .
  18. ^ Jump up to: а беременный в дюймовый Shen HC, Hammock BD (март 2012 г.). «Обнаружение ингибиторов растворимой эпоксидной гидролазы: мишень с множественными потенциальными терапевтическими показателями» . J. Med. Химический ​ 55 (5): 1789–808. doi : 10.1021/jm201468j . PMC   3420824 . PMID   22168898 .
  19. ^ Вагнер К., Инсеоглу Б., Гамак Б.Д. (ноябрь 2011). «Ингибирование растворимых эпоксидной гидролазы, эпоксигенированные жирные кислоты и ноцицепция» . Простагландины другие липидные посредники . 96 (1–4): 76–83. doi : 10.1016/j.prostaglandins.2011.08.001 . PMC   3215909 . PMID   21854866 .
  20. ^ Арнольд С., Конкель А., Фишер Р., Шунк В.Х. (2010). «Цитохром P450-зависимый метаболизм омега-6 и омега-3 полиненасыщенных жирных кислот». Pharmacol Rep . 62 (3): 536–47. doi : 10.1016/s1734-1140 (10) 70311-x . PMID   20631419 . S2CID   84732148 .
  21. ^ Spector AA (апрель 2009 г.). «Путь эпоксигеназы арахидоновой кислоты P450» . J. Lipid Res . 50 Suppl (Suppl): S52–6. doi : 10.1194/jlr.r800038-jlr200 . PMC   2674692 . PMID   18952572 .
  22. ^ Zheng J, Plopper CG, Lakritz J, Storms DH, Hammock BD (октябрь 2001 г.). «Лейкотоксин-диол: предполагаемый токсический медиатор, участвующий в острого респираторного дистресс-синдрома». Являюсь. J. Respir. Клеточный мол. Биол . 25 (4): 434–8. doi : 10.1165/ajrcmb.25.4.4104 . PMID   11694448 . S2CID   27194509 .
  23. ^ Moghaddam M, Motoba K, Borhan B, Pinot F, Hammock BD (август 1996 г.). «Новые метаболические пути для метаболизма линолевой и арахидоновой кислоты». Биохим. Биофиз. Акт . 1290 (3): 327–39. doi : 10.1016/0304-4165 (96) 00037-2 . PMID   8765137 .
  24. ^ Jump up to: а беременный Пейс-Аскак К.Р. (2015). «Патофизиология гепоксилинов». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Молекулярная и клеточная биология липидов . 1851 (4): 383–96. doi : 10.1016/j.bbalip.2014.09.007 . PMID   25240838 .
  25. ^ Domingues MF, Callai-Silva N, Piovesan AR и Carlini CR (январь 2020 г.). «Растворимая эпоксидная гидролаза и метаболизм холестерина головного мозга» . Передний. Мол Нейроски . 12 (325): 325. doi : 10.3389/fnmol.2019.00325 . PMC   7000630 . PMID   32063836 .
  26. ^ "NCT00847899" . Оценка ингибитора растворимой эпоксидной гидролазы (S-EH) у пациентов с гипертонией легкой до средней степени и нарушением толерантности к глюкозе . Clinicaltrials.gov . Получено 2013-05-04 .
  27. ^ Клиническое исследование номер NCT01762774 для «исследования для оценки безопасности, переносимости, фармакокинетики и фармакодинамики однократных доз GSK2256294 у здоровых добровольцев, а также одиночные и повторные дозы GSK2256294 у взрослых мужчин модернизации» в клиниках.
  28. ^ Сингх Н, Гамак Б (30 марта 2020 г.). «Растворимая эпоксидная гидролаза». В Spertmanns S, Rosenthal W (Eds.). Энциклопедия молекулярной фармакологии . Springer, Cham. doi : 10.1007/978-3-030-21573-6 . HDL : 10138/346042 . ISBN  978-3-030-21573-6 Полем S2CID   171511522 .
  29. ^ Shibata K, Hashimoto T, Hasumi K, Honda K, Nobe K (январь 2018 г.). «Оценка эффектов новой серии SMTP в индуцированной уксусной кислотой эмболической модели инфаркта головного мозга». Европейский журнал фармакологии . 818 : 221–227. doi : 10.1016/j.ejphar.2017.10.055 . PMID   29107671 . S2CID   25890544 .
  30. ^ Suzuki E, Nishimura N, Yoshikawa T, Kunikiyo Y, Hasegawa K, Hasumi K (декабрь 2018 г.). «Эффективность SMTP-7, малой молекулярной противовоспалительной тромболитической, при эмболическом инсульте у обезьян» . Фармакологические исследования и перспективы . 6 (6): E00448. doi : 10.1002/prp2.448 . PMC   6282002 . PMID   30546909 .
  31. ^ Fornage M, Hinojos CA, Nurrowska BW, Boerwinkle E, Hammock BD, Morisseau CH, Doris PA (октябрь 2002 г.). «Полиморфизм у растворимой эпоксид -гидролазы и артериального давления у спонтанно гипертонических крыс». Гипертония . 40 (4): 485–90. Citeseerx   10.1.1.578.6137 . doi : 10.1161/01.hyp.0000032278.75806.68 . PMID   12364351 . S2CID   17629284 .
  32. ^ Jump up to: а беременный Fornage M, Boerwinkle E, Doris PA, Jacobs D, Liu K, Wong ND (январь 2004 г.). «Полиморфизм растворимой эпоксидной гидролазы связан с кальцификацией коронарной артерии у афро-американских субъектов: исследование риска коронарной артерии у молодых людей (Cardia)» . Циркуляция . 109 (3): 335–9. doi : 10.1161/01.cir.0000109487.46725.02 . PMID   14732757 .
  33. ^ Jump up to: а беременный Ли К.Р., Норт К.Е., Брей М.С., Форнаж М., Сейберт Дж.М., Ньюман Дж.В., Гамак Б.Д., Купер Д.Дж., Хейс Г., Зельдин, округ Колумбия (май 2006 г.). «Генетическая вариация в растворимой эпоксидной гидролазе (EPHX2) и риск заболевания ишемической болезни: исследование риска атеросклероза в сообществах (ARIC)» . Гул Мол Генет . 15 (10): 1640–9. doi : 10.1093/hmg/ddl085 . PMC   2040335 . PMID   16595607 .
  34. ^ Вей Q, Дорис П.А., Поллизотто М.В., Бурвинкл Е., Джейкобс Д.Р., Сисковик Д.С., Форнаж М (январь 2007 г.). «Изменение последовательности в растворимой гене эпоксидной гидролаз и субклиническом коронарном атеросклерозе: взаимодействие с курением сигарет». Атеросклероз . 190 (1): 26–34. doi : 10.1016/j.aterosclerosis.2006.02.021 . PMID   16545818 .

Дальнейшее чтение

[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Epoxide_hydrolase_2&oldid=1216176198"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 4343db745ab664510540d98251699f27__1711714680
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/43/27/4343db745ab664510540d98251699f27.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Epoxide hydrolase 2 - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)