Jump to content

Фактор сплайсинга 1, богатый серином/аргинином

(Перенаправлено из SF2/ASF )
СРСФ1
Доступные структуры
ПДБ Поиск ортологов: PDBe RCSB
Идентификаторы
Псевдонимы SRSF1 , ASF, SF2, SF2p33, SFRS1, SRp30a, ASF/SF2, фактор сплайсинга 1, богатый серином/аргинином, фактор сплайсинга 1, богатый серином и аргинином
Внешние идентификаторы Опустить : 600812 ; МГИ : 98283 ; Гомологен : 31411 ; GeneCards : SRSF1 ; OMA : SRSF1 — ортологи
Ортологи
Разновидность Человек Мышь
Входить
Вместе
ЮниПрот
RefSeq (мРНК)

НМ_001078166
НМ_006924

НМ_001078167
НМ_173374

RefSeq (белок)

НП_001071634
НП_008855

НП_001071635
НП_775550

Местоположение (UCSC) Чр 17: 58 – 58.01 Мб Чр 11: 87,94 – 87,94 Мб
в PubMed Поиск [ 3 ] [ 4 ]
Викиданные
Просмотр/редактирование человека Просмотр/редактирование мыши

Богатый серином/аргинином фактор сплайсинга 1 ( SRSF1 ), также известный как альтернативный фактор сплайсинга 1 ( ASF1 ), фактор сплайсинга пре-мРНК SF2 ( SF2 ) или ASF1/SF2, представляет собой белок , который у людей кодируется SRSF1 геном . [ 5 ] ASF/SF2 представляет собой важный фактор сплайсинга , специфичный для последовательности, участвующий в сплайсинге пре-мРНК . [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] SRSF1 — ген, кодирующий АЧС/СФ2. [ 9 ] и находится на хромосоме 17 . Полученный фактор сплайсинга представляет собой белок массой примерно 33 кДа . [ 10 ] ASF/SF2 необходим для протекания всех реакций сплайсинга и влияет на выбор сайта сплайсинга в зависимости от концентрации, что приводит к альтернативному сплайсингу . [ 7 ] Помимо участия в процессе сплайсинга, ASF/SF2 также опосредует пост-сплайсинговую деятельность, такую ​​как мРНК ядерный экспорт и трансляция . [ 11 ]

Структура

[ редактировать ]

ASF/SF2 представляет собой белок SR и, как таковой, содержит два функциональных модуля: богатую аргинином и серином область (домен RS), где происходит основная часть регуляции ASF/SF2, и два мотива распознавания РНК (RRM), посредством которых ASF/SF2 взаимодействует с РНК и другими факторами сплайсинга. [ 12 ] [ 13 ] Эти модули имеют различные функции в рамках общей функции коэффициента сращивания. [ 13 ]

Сращивание

[ редактировать ]

ASF/SF2 является неотъемлемой частью многочисленных компонентов процесса сплайсинга. ASF/SF2 необходим для расщепления и выбора 5'-сайта сплайсинга и способен различать загадочные и подлинные сайты сплайсинга. [ 10 ] Последующее формирование лариата во время первого химического этапа сплайсинга пре-мРНК также требует ASF/SF2. [ 10 ] ASF/SF2 способствует рекрутированию мяРНП U1 в 5'-сайт сплайсинга и соединяет 5'- и 3'-сайты сплайсинга, чтобы облегчить реакции сплайсинга. [ 8 ] ASF/SF2 также связывается с мяРНП U2 . [ 15 ] Во время реакции ASF/SF2 способствует использованию проксимальных сайтов интрона и препятствует использованию дистальных сайтов интрона, влияя на альтернативный сплайсинг . [ 16 ] [ 17 ] На альтернативный сплайсинг влияет ASF/SF2 в зависимости от концентрации; Различные концентрации ASF/SF2 являются механизмом альтернативной регуляции сплайсинга и приводят к разным количествам изоформ продукта . [ 6 ] ASF/SF2 осуществляет эту регуляцию посредством прямого или непрямого связывания с последовательностями экзонного энхансера сплайсинга (ESE). [ 16 ]

Пост-сплайсинг

[ редактировать ]

ASF/SF2 в присутствии elF4E способствует инициации трансляции мРНК, связанной с рибосомами , подавляя активность 4E-BP и рекрутируя молекулы для дальнейшей регуляции трансляции. [ 11 ] ASF/SF2 регулируемым образом взаимодействует с белком ядерного экспорта TAP, контролируя экспорт зрелой мРНК из ядра . [ 18 ] Увеличение клеточного ASF/SF2 также повысит эффективность нонсенс-опосредованного распада мРНК (NMD), отдавая предпочтение NMD, который происходит до высвобождения мРНК из ядра, по сравнению с NMD, который происходит после экспорта мРНК из ядра в цитоплазму. [ 19 ] Этот сдвиг в NMD, вызванный усилением ASF/SF2, сопровождается общим усилением первого раунда трансляции за счет трансляции мРНК, связанной с elF4E, и последующих трансляционно-активных рибосом, повышенной ассоциацией первых комплексов инициации трансляции с ASF/SF2 и повышенными уровнями активный ТАП. [ 19 ]

Регулирование посредством фосфорилирования

[ редактировать ]

ASF/SF2 обладает способностью фосфорилироваться по серинам в его RS-домене с помощью SR-специфической протеинкиназы SRPK1 . [ 13 ] SRPK1 и ASF/SF2 образуют необычайно стабильный комплекс с кажущейся K d 50 нМ. [ 12 ] [ 18 ] SRPK1 избирательно фосфорилирует до двенадцати серинов в RS-домене ASF/SF2 посредством направленного и процессивного механизма, перемещаясь от C-конца к N-концу . [ 13 ] Это мультифосфорилирование направляет ASF/SF2 в ядро, влияя на ряд белок-белковых взаимодействий, связанных со сплайсингом. [ 13 ] Функция ASF/SF2 по экспорту зрелой мРНК из ядра зависит от состояния ее фосфорилирования; дефосфорилирование ASF/SF2 облегчает связывание с TAP, [ 13 ] в то время как фосфорилирование направляет ASF/SF2 к ядерным спеклам . [ 18 ] И фосфорилирование, и дефосфорилирование ASF/SF2 важны и необходимы для правильного сплайсинга, поскольку последовательное фосфорилирование и дефосфорилирование отмечают переходы между стадиями процесса сплайсинга. [ 20 ] Кроме того, гипофосфорилирование и гиперфосфорилирование ASF/SF2 с помощью Clk/Sty может приводить к ингибированию сплайсинга. [ 13 ]

Биологическое значение

[ редактировать ]

Стабильность и верность

[ редактировать ]

ASF/SF2 участвует в стабильности генома; Считается, что РНК-полимераза рекрутирует ASF/SF2 в возникающие транскрипты РНК, чтобы препятствовать образованию мутагенных гибридных структур R-петли ДНК:РНК между транскриптом и матричной ДНК. [ 8 ] Таким образом, ASF/SF2 защищает клетки от потенциально вредного воздействия самой транскрипции. [ 8 ] ASF/SF2 также участвует в клеточных механизмах, препятствуя пропуску экзонов и обеспечивая точность и правильность сплайсинга. [ 10 ]

Развитие и рост

[ редактировать ]

Было показано, что ASF/SF2 играет решающую роль в развитии сердца. [ 12 ] эмбриогенез, образование тканей, подвижность клеток и жизнеспособность клеток в целом. [ 21 ] [ 22 ]

Клиническое значение

[ редактировать ]

SFRS1 является протоонкогеном , и, следовательно, ASF/SF2 может действовать как онкопротеин; он может изменить паттерны сплайсинга важнейших генов, регулирующих клеточный цикл, и генов-супрессоров . [ 13 ] ASF/SF2 контролирует сплайсинг различных генов-супрессоров опухолей, киназ и киназных рецепторов , каждый из которых потенциально может альтернативно соединяться в онкогенные изоформы. [ 23 ] Таким образом, ASF/SF2 является важной мишенью для терапии рака, поскольку он сверхэкспрессируется во многих опухолях . [ 13 ]

Модификации и дефекты альтернативного пути сплайсинга связаны с множеством заболеваний человека. [ 24 ]

ASF/SF2 участвует в репликации ВИЧ-1 , поскольку ВИЧ-1 нуждается в тонком балансе сплайсированных и несплайсированных форм вирусной ДНК. [ 25 ] Действие ASF/SF2 на репликацию ВИЧ-1 является потенциальной мишенью для терапии ВИЧ. [ 25 ] ASF/SF2 также участвует в выработке рецепторов Т-клеток при системной красной волчанке , изменяя экспрессию специфической цепи в рецепторах Т-клеток посредством альтернативного сплайсинга. [ 26 ] [ 27 ]

Взаимодействия

[ редактировать ]

Было показано, что ASF/SF2 взаимодействует с:

  1. ^ Перейти обратно: а б с GRCh38: Ensembl выпуск 89: ENSG00000136450 Ensembl , май 2017 г.
  2. ^ Перейти обратно: а б с GRCm38: выпуск Ensembl 89: ENSMUSG00000018379 Ensembl , май 2017 г.
  3. ^ «Ссылка на Human PubMed:» . Национальный центр биотехнологической информации, Национальная медицинская библиотека США .
  4. ^ «Ссылка на Mouse PubMed:» . Национальный центр биотехнологической информации, Национальная медицинская библиотека США .
  5. ^ «Ген Энтрез: фактор сплайсинга SFRS1, богатый аргинином/серином 1 (фактор сплайсинга 2, альтернативный фактор сплайсинга)» .
  6. ^ Перейти обратно: а б Ким DJ, Oh B, Ким YY (январь 2009 г.). «Фактор сплайсинга ASF/SF2 и фактор транскрипции PPAR-гамма взаимодействуют, напрямую регулируя транскрипцию разобщающего белка-3». Связь с биохимическими и биофизическими исследованиями . 378 (4): 877–82. дои : 10.1016/j.bbrc.2008.12.009 . ПМИД   19073146 .
  7. ^ Перейти обратно: а б Цзо П., Мэнли Дж.Л. (декабрь 1993 г.). «Функциональные домены человеческого фактора сплайсинга ASF/SF2» . Журнал ЭМБО . 12 (12): 4727–37. дои : 10.1002/j.1460-2075.1993.tb06161.x . ПМК   413918 . ПМИД   8223481 .
  8. ^ Перейти обратно: а б с д Ли Икс, Мэнли Дж.Л. (август 2005 г.). «Инактивация фактора сплайсинга белка SR ASF/SF2 приводит к нестабильности генома» . Клетка . 122 (3): 365–78. дои : 10.1016/j.cell.2005.06.008 . ПМИД   16096057 . S2CID   14126033 .
  9. ^ Бермингем-младший, Арден К.С., Наумова А.К., Сапиенца С., Виарс К.С., Фу XD, Хоц Дж., Мэнли Дж.Л., Розенфельд М.Г. (сентябрь 1995 г.). «Хромосомная локализация генов мыши и человека, кодирующих факторы сплайсинга ASF/SF2 (SFRS1) и SC-35 (SFRS2)» . Геномика . 29 (1): 70–9. дои : 10.1006/geno.1995.1216 . ПМИД   8530103 .
  10. ^ Перейти обратно: а б с д Крайнер А.Р., Конвей Г.К., Козак Д. (июль 1990 г.). «Основной фактор сплайсинга пре-мРНК SF2 влияет на выбор 5'-сайта сплайсинга, активируя проксимальные сайты». Клетка . 62 (1): 35–42. дои : 10.1016/0092-8674(90)90237-9 . ПМИД   2364434 . S2CID   29839844 .
  11. ^ Перейти обратно: а б Михлевски Дж., Сэнфорд-младший, Касерес Дж. Ф. (апрель 2008 г.). «Фактор сплайсинга SF2/ASF регулирует инициацию трансляции путем усиления фосфорилирования 4E-BP1» . Молекулярная клетка . 30 (2): 179–89. doi : 10.1016/j.molcel.2008.03.013 . ПМИД   18439897 .
  12. ^ Перейти обратно: а б с д Нго Дж.К., Джианг К., Чакрабарти С., Ма КТ, Хюинь Н., Хагопиан Дж.К., Доррестейн ПК, Фу К.Д., Адамс Дж.А., Гош Г. (март 2008 г.). «Скользящее стыковочное взаимодействие необходимо для последовательного и процессивного фосфорилирования белка SR с помощью SRPK1» . Молекулярная клетка . 29 (5): 563–76. doi : 10.1016/j.molcel.2007.12.017 . ПМЦ   2852395 . ПМИД   18342604 .
  13. ^ Перейти обратно: а б с д и ж г час я Хагопян Дж.К., Ма К.Т., Мид Б.Р., Альбукерке С.П., Нго Дж.К., Гош Г., Дженнингс П.А., Фу XD, Адамс Дж.А. (октябрь 2008 г.). «Адаптивные молекулярные взаимодействия управляют фосфорилированием белка SR ASF/SF2 с помощью SRPK1» . Журнал молекулярной биологии . 382 (4): 894–909. дои : 10.1016/j.jmb.2008.07.055 . ПМЦ   2741138 . ПМИД   18687337 .
  14. ^ Тинтару А.М., Хаутберг ГМ, Хаунслоу А.М., Хунг М.Л., Лиан Л.Я., Крэйвен С.Дж., Уилсон С.А. (август 2007 г.). «Структурный и функциональный анализ связывания РНК и TAP с SF2/ASF» . Представитель ЭМБО . 8 (8): 756–62. дои : 10.1038/sj.embor.7401031 . ПМК   1978082 . ПМИД   17668007 .
  15. ^ Масуяма К., Танигучи И., Окава К., Оно М. (август 2007 г.). «Факторы, связанные с богатой пуринами последовательностью экзонного энхансера сплайсинга в ядре ооцита Xenopus». Связь с биохимическими и биофизическими исследованиями . 359 (3): 580–5. дои : 10.1016/j.bbrc.2007.05.144 . ПМИД   17548051 .
  16. ^ Перейти обратно: а б Чжан X, Мерклер К.А., член парламента Маклина (июль 2008 г.). «Характеристика регуляторных интронных и экзонных последовательностей, участвующих в альтернативном сплайсинге гена класса B рецептора-поглотителя». Связь с биохимическими и биофизическими исследованиями . 372 (1): 173–8. дои : 10.1016/j.bbrc.2008.05.007 . ПМИД   18477479 .
  17. ^ Ван З, Сяо X, Ван Ностранд Э, Бердж CB (июль 2006 г.). «Общие и специфические функции экзонных глушителей сплайсинга в контроле сплайсинга» . Молекулярная клетка . 23 (1): 61–70. doi : 10.1016/j.molcel.2006.05.018 . ПМК   1839040 . ПМИД   16797197 .
  18. ^ Перейти обратно: а б с Ма CT, Веласкес-Донес А, Хагопян Дж.К., Гош Г., Фу XD, Адамс Дж.А. (февраль 2008 г.). «Упорядоченное многосайтовое фосфорилирование фактора сплайсинга ASF/SF2 с помощью SRPK1». Журнал молекулярной биологии . 376 (1): 55–68. дои : 10.1016/j.jmb.2007.08.029 . ПМИД   18155240 .
  19. ^ Перейти обратно: а б Сато Х., Хосода Н., Макват Л.Е. (февраль 2008 г.). «Эффективность первого раунда трансляции влияет на клеточный участок нонсенс-опосредованного распада мРНК» . Молекулярная клетка . 29 (2): 255–62. doi : 10.1016/j.molcel.2007.12.009 . ПМИД   18243119 .
  20. ^ Цао В., Джеймисон С.Ф., Гарсиа-Бланко Массачусетс (декабрь 1997 г.). «Для сплайсинга пре-мРНК in vitro необходимы как фосфорилирование, так и дефосфорилирование ASF/SF2» . РНК . 3 (12): 1456–67. ПМЦ   1369586 . ПМИД   9404896 .
  21. ^ Гигна С, Джордано С, Шен Х, Бенвенуто Ф, Кастильони Ф, Комольо П.М., Грин М.Р., Рива С., Биамонти Дж. (декабрь 2005 г.). «Подвижность клеток контролируется SF2/ASF посредством альтернативного сплайсинга протоонкогена Ron» . Молекулярная клетка . 20 (6): 881–90. doi : 10.1016/j.molcel.2005.10.026 . ПМИД   16364913 .
  22. ^ Линь С., Сяо Р., Сунь П., Сюй X, Фу XD (ноябрь 2005 г.). «Зависимая от дефосфорилирования сортировка факторов сплайсинга SR во время созревания мРНП» . Молекулярная клетка . 20 (3): 413–25. doi : 10.1016/j.molcel.2005.09.015 . ПМИД   16285923 .
  23. ^ Карни Р., де Станчина Э., Лоу С.В., Синха Р., Му Д., Крайнер А.Р. (март 2007 г.). «Ген, кодирующий фактор сплайсинга SF2/ASF, является протоонкогеном» . Структурная и молекулярная биология природы . 14 (3): 185–93. дои : 10.1038/nsmb1209 . ПМК   4595851 . ПМИД   17310252 .
  24. ^ Ватануки Т., Фунато Х., Учида С., Мацубара Т., Кобаяши А., Вакабаяши Ю., Оцуки К., Нисида А., Ватанабе Ю. (сентябрь 2008 г.). «Повышенная экспрессия мРНК фактора сплайсинга SRp20 у пациентов с биполярным расстройством». Журнал аффективных расстройств . 110 (1–2): 62–9. дои : 10.1016/j.jad.2008.01.003 . ПМИД   18281098 .
  25. ^ Перейти обратно: а б Танге ТО, Кьемс Дж (сентябрь 2001 г.). «SF2/ASF связывается с энхансером сплайсинга в третьем экзоне tat ВИЧ-1 и стимулирует связывание U2AF независимо от домена RS». Журнал молекулярной биологии . 312 (4): 649–62. дои : 10.1006/jmbi.2001.4971 . ПМИД   11575921 .
  26. ^ Моултон В., Перл М., Цокос Г. (2008). «Альтернативный фактор сплайсинга/фактор сплайсинга 2 (ASF/SF2) регулирует экспрессию ζ-цепи рецептора Т-клеток». Клиническая иммунология . 127 : S95. дои : 10.1016/j.clim.2008.03.266 .
  27. ^ Моултон В.Р., Грамматикос А.П., Фицджеральд Л.М., Цокос Г.К. (январь 2013 г.). «Фактор сплайсинга SF2/ASF спасает выработку IL-2 в Т-клетках пациентов с системной красной волчанкой путем активации транскрипции IL-2» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 110 (5): 1845–50. Бибкод : 2013PNAS..110.1845M . дои : 10.1073/pnas.1214207110 . ПМЦ   3562779 . ПМИД   23319613 .
  28. ^ Аджух П., Кастер Б., Панов К., Зомердейк Дж.К., Манн М., Ламонд А.И. (декабрь 2000 г.). «Функциональный анализ комплекса CDC5L человека и идентификация его компонентов методом масс-спектрометрии» . Журнал ЭМБО . 19 (23): 6569–81. дои : 10.1093/emboj/19.23.6569 . ПМК   305846 . ПМИД   11101529 .
  29. ^ Колвилл К., Фенг Л.Л., Йикли Дж.М., Гиш Г.Д., Касерес Дж.Ф., Поусон Т., Фу XD (октябрь 1996 г.). «Протеинкиназы SRPK1 и Clk/Sty демонстрируют различные субстратные специфичности для факторов сплайсинга, богатых серином/аргинином» . Журнал биологической химии . 271 (40): 24569–75. дои : 10.1074/jbc.271.40.24569 . ПМИД   8798720 .
  30. ^ Перейти обратно: а б с Умехара Х., Нишии Ю., Моришима М., Какехи Ю., Киока Н., Амачи Т., Коидзуми Дж., Хагивара М., Уэда К. (февраль 2003 г.). «Влияние лечения цисплатином на пятнистое распределение богатого серином/аргинином ядерного белка CROP/Luc7A». Связь с биохимическими и биофизическими исследованиями . 301 (2): 324–9. дои : 10.1016/s0006-291x(02) 03017-6 ПМИД   12565863 .
  31. ^ Ge H, Si Y, Вольф А.П. (декабрь 1998 г.). «Новый коактиватор транскрипции p52 функционально взаимодействует с важным фактором сплайсинга ASF/SF2» . Молекулярная клетка . 2 (6): 751–9. дои : 10.1016/s1097-2765(00)80290-7 . ПМИД   9885563 .
  32. ^ Перейти обратно: а б Чжан WJ, Ву JY (октябрь 1996 г.). «Функциональные свойства p54, нового белка SR, активного в конститутивном и альтернативном сплайсинге» . Молекулярная и клеточная биология . 16 (10): 5400–8. дои : 10.1128/MCB.16.10.5400 . ПМК   231539 . ПМИД   8816452 .
  33. ^ Лукасевич Р., Веласкес-Донес А., Хюинь Н., Хагопян Дж., Фу XD, Адамс Дж., Гош Г. (август 2007 г.). «Структурно уникальные серин-аргининовые протеинкиназы дрожжей и млекопитающих катализируют эволюционно консервативные реакции фосфорилирования» . Журнал биологической химии . 282 (32): 23036–43. дои : 10.1074/jbc.M611305200 . ПМИД   17517895 .
  34. ^ Перейти обратно: а б Ван ХИ, Линь В., Дайк Дж.А., Йикли Дж.М., Сонгян З., Кэнтли Л.С., Фу XD (февраль 1998 г.). «SRPK2: дифференциально экспрессируемая специфичная для белка SR киназа, участвующая в обеспечении взаимодействия и локализации факторов сплайсинга пре-мРНК в клетках млекопитающих» . Журнал клеточной биологии . 140 (4): 737–50. дои : 10.1083/jcb.140.4.737 . ПМК   2141757 . ПМИД   9472028 .
  35. ^ Перейти обратно: а б Коидзуми Дж., Окамото Ю., Оноги Х., Маеда А., Крайнер А.Р., Хагивара М. (апрель 1999 г.). «Субклеточная локализация SF2/ASF регулируется прямым взаимодействием с протеинкиназами SR (SRPK)» . Журнал биологической химии . 274 (16): 11125–31. дои : 10.1074/jbc.274.16.11125 . ПМИД   10196197 .
  36. ^ Лабурье Э., Росси Ф., Галлузи И.Е., Аллеманд Э., Дивита Г., Тази Дж. (июнь 1998 г.). «Взаимодействие между N-концевым доменом ДНК-топоизомеразы I человека и аргинин-сериновым доменом ее субстрата определяет фосфорилирование фактора сплайсинга SF2/ASF» . Исследования нуклеиновых кислот . 26 (12): 2955–62. дои : 10.1093/нар/26.12.2955 . ПМК   147637 . ПМИД   9611241 .
  37. ^ Андерсен Ф.Ф., Танге Т., Синнатамби Т., Олесен Дж.Р., Андерсен К.Е., Вестергаард О., Кьемс Дж., Кнудсен Б.Р. (сентябрь 2002 г.). «Фактор сплайсинга РНК ASF/SF2 ингибирует релаксацию ДНК, опосредованную топоизомеразой I человека». Журнал молекулярной биологии . 322 (4): 677–86. дои : 10.1016/s0022-2836(02)00815-x . ПМИД   12270705 .
  38. ^ Перейти обратно: а б Сяо С.Х., Мэнли Дж.Л. (ноябрь 1998 г.). «Фосфорилирование-дефосфорилирование по-разному влияет на активность фактора сплайсинга ASF/SF2» . Журнал ЭМБО . 17 (21): 6359–67. дои : 10.1093/emboj/17.21.6359 . ПМК   1170960 . ПМИД   9799243 .
  39. ^ Цао В., Гарсиа-Бланко, Массачусетс (август 1998 г.). «Домен, богатый серином/аргинином, в белке U1 70k человека необходим и достаточен для связывания ASF/SF2» . Журнал биологической химии . 273 (32): 20629–35. дои : 10.1074/jbc.273.32.20629 . ПМИД   9685421 .
[ редактировать ]
  • Обзор всей структурной информации, доступной в PDB для UniProt : Q07955 (фактор сплайсинга 1, богатый серином/аргинином) на PDBe-KB .
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 5cf6e7c60fc66aab87579b4646e5e5f0__1723039140
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/5c/f0/5cf6e7c60fc66aab87579b4646e5e5f0.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Serine/arginine-rich splicing factor 1 - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)