Анализ монослоя моноцитов
Анализ монослоя моноцитов (ММА) используется для определения клинической значимости аллоантител, вырабатываемых реципиентами переливания крови. [1] Анализ используется для оценки возможности внутрисосудистого гемолиза при переливании несовместимых клеточных продуктов крови пациенту с анемией. Когда донорские клетки содержат вещества, которые не производятся реципиентом, иммунная система реципиента вырабатывает антитела против этого вещества; они называются аллоантителами. Особым лейкоцитам, называемым моноцитами, поручено поглощать инородный материал, и они активируются во время определенных воспалительных процессов. [2] [3] Эти активированные моноциты вступают в контакт с сенсибилизированными антителами эритроцитами (RBC) и могут проявлять или не проявлять фагоцитоз (проглатывание) и разрушать донорские эритроциты. Если моноциты разрушают эритроциты, антитело, прикрепленное к этим эритроцитам, считается клинически значимым. [1]
Фон
[ редактировать ]Банк крови
[ редактировать ]Банк крови — это концентрация в клинической лаборатории, которая анализирует образцы от потенциальных реципиентов переливания и предоставляет совместимые продукты крови бригаде здравоохранения, отвечающей за лечение этого пациента. Проводится несколько рутинных тестов, включая определение группы крови (определение статуса ABO / Rh ), скрининг антител, серологическое перекрестное сопоставление , прямое тестирование на антиглобулин и идентификацию антител. Помимо присутствия встречающихся в природе антител (изогемагглютининов) к антигенам групп крови ABO и Rh(D), дополнительные иммуностимулированные антитела считаются неожиданными аллоантителами. [4]
Идентификация неожиданных антител является трудоемким процессом и иногда требует добавления специальных лабораторных методов, которые помогут правильно идентифицировать антитела. К этим методам относятся элюирование , адсорбция и обработка ферментами. [4] [5] У некоторых пациентов вырабатываются антитела к высокочастотным антигенам. То есть антигены эритроцитов присутствуют у значительной части человеческой популяции. Может быть сомнительно и очень сложно оценить, считается ли антитело клинически значимым или нет. [6] Клинически значимое антитело представляет собой антитело, которое способно вызывать гемолиз in vitro или снижение выживаемости перелитых донорских эритроцитов. [7] Клиническую значимость антител к высокочастотным антигенам можно оценить с помощью анализа монослоя моноцитов. [8]
Гемолитическая трансфузионная реакция
[ редактировать ]Существует много различных разновидностей аномальных реакций на переливание крови. Среди них потенциально опасная для жизни реакция известна как гемолитическая трансфузионная реакция . Это иммуноопосредованная реакция, при которой антитела реципиента атакуют антиген(ы) эритроцитов донора, вызывая гемолиз донорских клеток. Реакция может возникнуть во время, сразу после или до 28 дней спустя. Острая реакция наблюдается в течение первых 24 часов, тогда как отсроченная реакция будет наблюдаться в период от 24 часов до 28 дней после переливания. [4]
Образование аллоантител и клиническое значение.
[ редактировать ]Говоря о системе групп крови АВО, закон Ландштейнера гласит, что если человек обладает антигеном A и/или B, он не будет образовывать антитела к этим антигенам. [9] Однако если у человека нет антигенов А или В, он естественным образом будет вырабатывать антитела анти-А и анти-В. [10] По данным Международного общества переливания крови (ISBT), описаны 43 системы групп крови, содержащие сотни различных антигенов эритроцитов. [11] За некоторыми исключениями, многие антигены системы групп крови, не относящиеся к ABO, требуют сенсибилизирующего события для стимуляции выработки антител. Другими словами, иммунная система должна подвергнуться воздействию антигена, чтобы начать незаконную выработку антител. Воздействие антигенов может произойти при переливании крови, трансплантации стволовых клеток/костного мозга и беременности. [4]
Клиническое значение аллоантитела зависит от его способности вызывать снижение выживаемости донорских эритроцитов. [12] Характеристики клинически значимых аллоантител включают: подкласс антител к иммуноглобулину G , реактивность при температуре тела и способность вызывать агглютинацию эритроцитов в присутствии античеловеческого глобулина (AHG) в непрямом антиглобулиновом тесте. [4] Иногда бывает трудно определить клиническую значимость антитела. [6] Антитела к широко распространенным антигенам эритроцитов могут иногда маскировать обнаружение клинически значимых аллоантител, поскольку соответствующий антиген присутствует в большинстве, если не во всех, скрининговых эритроцитах, используемых для обнаружения этих антител, содержащих антиген. Именно здесь может оказаться полезным анализ монослоя моноцитов.
Принцип
[ редактировать ]ММА — очень трудоемкий метод ручного лабораторного тестирования. В этом анализе выполняются следующие шаги: [13]
- Кровь с антикоагулянтом собирают у нормальных, здоровых людей. Предпочтительна кислая цитратная декстроза. [6]
- Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) собирают из образца крови с использованием градиента плотности Ficoll-Paque®.
- РВМС промывают фосфатно-солевым буфером (PBS), а затем суспендируют в среде для культуры тканей, чтобы сохранить жизнеспособность моноцитов.
- Затем смесь РВМС-среды добавляют на предметное стекло камеры для культуры ткани. Моноциты прилипают к предметному стеклу, образуя монослой моноцитов.
- Сыворотку смешивают и инкубируют при температуре тела (37°С) с 5% суспензией эритроцитов группы О. (Этот этап повышает чувствительность эритроцитов или покрывает их антителами)
- Сенсибилизированные эритроциты промывают PBS для удаления несвязавшихся антител или мешающих веществ.
- Промытые сенсибилизированные эритроциты затем добавляют на предметное стекло камеры для культуры ткани моноцитов.
- После 60-минутной инкубации при 37°C супернатант удаляют со предметных стекол и промывают PBS.
- После полного высыхания предметного стекла его окрашивают красителем Райтса-Гимзы .
- Под микроскопом наблюдают не менее 600 (200, если положительная реакция превышает 20%) моноцитов для подтверждения фагоцитоза эритроцитов.
- Положительный и отрицательный контроль также выполняется одновременно с образцом пациента для обеспечения качества.
Интерпретация
[ редактировать ]Если положительный или отрицательный контроль окажется неудачным, вся процедура тестирования будет недействительной и ее необходимо повторить. Критерии положительного результата ММА будут различаться в зависимости от лаборатории, хотя первоначально установленный порог, установленный Сандрой Нэнс и др., составляет > 20% наблюдаемой фагоцитарной активности. [13]
Клинически положительный результат ММА будет указывать на то, что сыворотка пациента, используемая в анализе, содержит клинически значимые антитела, которые способны вызывать антитело-опосредованный фагоцитоз .
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Jump up to: а б «Через микроскоп: анализ монослоя моноцитов» .
- ^ «https://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/monocyte» . www.cancer.gov . 2 февраля 2011 г. Проверено 9 января 2023 г.
{{cite web}}: Внешняя ссылка в|title= - ^ Болезнь Эйвери новорожденного . Кристин А. Глисон, Сандра Э. Юул (Десятое изд.). Филадельфия, Пенсильвания. 2018. ISBN 978-0-323-40172-2 . OCLC 1013816550 .
{{cite book}}: CS1 maint: отсутствует местоположение издателя ( ссылка ) CS1 maint: другие ( ссылка ) - ^ Jump up to: а б с д и Современные методы хранения крови и переливания крови . Дениз Харменинг (Седьмое изд.). Филадельфия, Пенсильвания. 2019. ISBN 978-0-8036-9462-0 . OCLC 1048659017 .
{{cite book}}: CS1 maint: отсутствует местоположение издателя ( ссылка ) CS1 maint: другие ( ссылка ) - ^ Стробель, Эрвин (2004). «Использование ферментного метода для идентификации антител» . Клиническая лаборатория . 50 (9–10): 575–580. ISSN 1433-6510 . ПМИД 15481633 .
- ^ Jump up to: а б с «Освоение анализа монослоя моноцитов | Канадская служба крови» . www.blood.ca . Проверено 9 января 2023 г.
- ^ Макру, Радж Натх; Арора, Бхавна; Бхатия, Ааканша; Чоудри, Мохит; Лука, Розамма Накамататил (июль 2014 г.). «Клиническое значение специфичности антител к системе групп крови M, N и Льюиса» . Азиатский журнал трансфузиологии . 8 (2): 96–99. дои : 10.4103/0973-6247.137442 . ISSN 0973-6247 . ПМК 4140072 . ПМИД 25161347 .
- ^ Арндт, Патрисия А.; Гарратти, Джордж (сентябрь 2004 г.). «Ретроспективный анализ значения результатов анализа монослоя моноцитов для прогнозирования клинической значимости аллоантител к группе крови» . Переливание . 44 (9): 1273–1281. дои : 10.1111/j.1537-2995.2004.03427.x . ISSN 0041-1132 . ПМИД 15318848 . S2CID 24871062 .
- ^ Маршалл, Уильям Дж.; Лапсли, Марта; Дэй, Эндрю; Эйлинг, Рут (5 марта 2014 г.). Клиническая биохимия: метаболические и клинические аспекты . Elsevier Науки о здоровье. ISBN 9780702054785 .
- ^ Деномм, Грегори А. (2000). Молекулярные протоколы в трансфузионной медицине . Мария Риос, Мэрион Э. Рид. Сан-Диего, Калифорния: Academic Press. ISBN 978-0-12-209370-8 . OCLC 162129287 .
- ^ ИСБТ. «Международное общество переливания крови | ISBT» . www.isbtweb.org . Проверено 5 октября 2022 г.
- ^ Мойнуддин, Имран; Флетчер, Крейг; Миллуорд, Питер (2019). «Распространенность и специфичность клинически значимых аллоантител к эритроцитам у беременных женщин - исследование, проведенное в больнице третичного уровня на юго-востоке Мичигана» . Журнал медицины крови . 10 : 283–289. дои : 10.2147/JBM.S214118 . ISSN 1179-2736 . ПМК 6708388 . ПМИД 31692490 .
- ^ Jump up to: а б Нэнс, SJ; Арндт, П.; Гарратти, Г. (ноябрь 1987 г.). «Прогнозирование клинической значимости аллоантител к эритроцитам с использованием анализа монослоя моноцитов» . Переливание . 27 (6): 449–452. дои : 10.1046/j.1537-2995.1987.27688071692.x . ISSN 0041-1132 . ПМИД 3686653 . S2CID 21638521 .