Элюирование антител
Элюирование антител — это клиническая лабораторная диагностическая процедура, которая удаляет сенсибилизированные антитела из эритроцитов , чтобы определить антиген системы группы крови, на который нацелены антитела. [1] Элюирование антител считается необходимым, когда обнаруживаются антитела класса иммуноглобулинов G (IgG), сенсибилизированные (связанные) с периферическими эритроцитами, собранными у реципиента, перелившего продукты крови. [2] Антитела IgG выявляются с помощью анализа, известного как прямой антиглобулиновый тест . [3]
Элюции антител – это специализированные тесты, используемые в клинических банках крови . Примеры рутинных тестов включают ABO/Rh , скрининг на антитела, идентификацию антител и тестирование на антиглобулин . Примеры других специализированных тестов, используемых в банках крови, включают: обработку тиоловым реагентом, анализ монослоя моноцитов , обработку ферментами и адсорбцию. [2]
Эта процедура помогает выявить антитела, которые трудно идентифицировать, отличить реакции на переливание крови , гемолитическую болезнь плода и новорожденного , а также выявить теплые аутоантитела. [4]
Фон
[ редактировать ]Системы групп крови
[ редактировать ]Мембраны эритроцитов состоят из фосфолипидного бислоя, усеянного белками , липидами , углеводами и комбинациями этих веществ. [5] Эти вещества называются антигенами , поскольку они стимулируют иммунный ответ , когда человек подвергается воздействию этого вещества, но подвергшийся воздействию человек не несет и не экспрессирует гены, кодирующие указанные антигены. [6] Каждый человек имеет уникальный генетический и фенотипический состав антигенов, очень похожий на дерматоглифику отпечатков пальцев человека .
По состоянию на 2023 год существует 44 системы групп крови, каждая из которых содержит несколько антигенов эритроцитов, всего 354, определяемых примерно 49 отдельными генами. [7] Из этих антигенов лишь немногие считаются клинически значимыми, а это означает, что они могут стимулировать выработку антител, способных вызывать гемолиз эритроцитов . Это особенно важно для переливания эритроцитов и других клеточных продуктов крови. Примеры систем групп крови, которые содержат антигены, способные индуцировать клинически значимые аллоантитела (антитела против чужеродных антигенов), включают, помимо прочего, ABO , Rh , Kell , Duffy , Kidd и MNS . системы групп крови [8]
Идентификация антител
[ редактировать ]потенциального реципиента Антитела к антигенам системы групп крови и их характеристики должны быть идентифицированы при обнаружении таких антител в сыворотке или плазме . [9] Специфичность антитела помогает медицинскому лаборанту определить, является ли антитело клинически значимым. Идентификация антител – очень трудоемкий процесс. [1]
Характеристики клинически значимых антител включают: реактивность при температуре тела (37°C), иммуноглобулин (Ig) класса G , IgM , реагирующий при температуре тела, способность проникать через плаценту , способность вызывать разрушение эритроцитов и/или направленность антител. против общеизвестных клинически значимых антигенов эритроцитов. [10] Например, если человек подвергается воздействию антигена эритроцитов (при переливании крови, беременности, трансплантации стволовых клеток), которым он по своей природе не обладает, у него может образоваться клинически значимое антитело, направленное против этого антигена. Если пациенту переливают эритроциты, содержащие антиген Kell (большой К или просто К), они могут образовывать антитела, называемые анти-К (анти-большой К). Последующие переливания К-положительных эритроцитов могут вызвать немедленную гемолитическую трансфузионную реакцию . Антитело K реагирует при 37°C, представляет собой IgG, способное проникать через плаценту и вызывающее немедленное разрушение эритроцитов.
Присутствие аутоантител, направленных против собственных антигенов эритроцитов, может усложнить процесс идентификации антител. Аутоантитела к эритроцитам, как правило, специфичны к антигенам эритроцитов, которые часто встречаются в популяции. Элюирование антител может помочь в идентификации клинически значимых аллоантител , когда аутоантитела мешают процессу идентификации антител. [11]
Методы элюирования антител
[ редактировать ]В клиническом банке крови используется несколько методов элюирования антител. Некоторые из этих методов включают манипулирование температурой, манипулирование pH , использование органических растворителей и хлорохина . [2] Каждый из этих методов имеет преимущества и недостатки, а метод элюирования будет варьироваться в зависимости от клинической применимости. Одним из наиболее часто используемых методов является кислотное элюирование, поскольку оно быстрое, дешевое и относительно простое в исполнении. [3] [12]
Принцип кислотного элюирования
[ редактировать ]Основные этапы кислотного элюирования включают в себя: [3] [2]
- Отделите и тщательно промойте эритроциты из периферически собранной с ЭДТА пробирки для сбора крови с помощью центрифугирования .
- Смешайте отмытые эритроциты пациента, положительные на фазу IgG прямого антиглобулинового теста , с глициновой кислотой (рН 3,0).
- Центрифугируйте смесь и сразу же удалите надосадочную жидкость из разрушенных эритроцитов.
- Добавьте буфер, чтобы вернуть смеси нейтральный pH. Этот шаг имеет решающее значение для дальнейшего тестирования идентификации антител, поскольку антитела не будут реагировать при pH менее 7,0.
- Для осветления раствора может потребоваться дополнительное центрифугирование.
- Полученный раствор известен как элюат. Затем этот элюат тестируют на панели эритроцитов с известными антигенными профилями. Эта процедура идентификации антител поможет определить специфичность антитела.
Определение того, когда следует выполнять элюирование антител
[ редактировать ]Антиглобулиновое тестирование
[ редактировать ]эритроцитов Основным методом обнаружения антител и антигенов, используемым в клинической лаборатории, является агглютинация . [1] Большинство антител IgM легче обнаружить, поскольку они крупнее и реагируют при комнатной температуре (20°C). [13] [14] Именно эта концепция делает тестирование ABO/Rh таким быстрым и простым в проведении. Однако большинство клинически значимых антител, не относящихся к АВО, реагируют при температуре тела (37°C) и не приводят к агглютинации без добавления нескольких этапов: инкубации, промывания и добавления реагента против человеческого глобулина (AHG). [15]
Античеловеческий глобулин представляет собой антитело, направленное против антител IgG человека. [16] Когда меньшее антитело IgG прикрепляется к эритроцитам, более крупные антитела AHG создают перекрестную связь между сенсибилизированными IgG эритроцитами, образуя визуальную агглютинацию. Когда наблюдается такая агглютинация, антиглобулиновый тест считается положительным для обнаружения присутствующих антител и/или антигена(ов). [2]
Существует два основных типа тестирования на антиглобулин: непрямой и прямой. [17] [18] Непрямой антиглобулиновый тест используется для обнаружения антител в плазме / сыворотке , тогда как прямой антиглобулиновый тест используется для обнаружения антител, связанных с эритроцитами. Если прямой тест на антиглобулин дает положительный результат, мы должны выполнить элюирование антитела, чтобы удалить антитело для идентификации и определить клиническую значимость антитела. [3]
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Перейти обратно: а б с Современные методы хранения крови и переливания крови . Дениз Харменинг (Седьмое изд.). Филадельфия, Пенсильвания. 2019. ISBN 978-0-8036-9462-0 . OCLC 1048659017 .
{{cite book}}: CS1 maint: отсутствует местоположение издателя ( ссылка ) CS1 maint: другие ( ссылка ) - ^ Перейти обратно: а б с д и Техническое руководство . Калудия С. Кон, Меган Делани, Сьюзан Т. Джонсон, Луи М. Кац, Американская ассоциация банков крови (20-е изд.). Бетесда, Мэриленд. 2020. ISBN 978-1-56395-370-5 . OCLC 1163631267 .
{{cite book}}: CS1 maint: отсутствует местоположение издателя ( ссылка ) CS1 maint: другие ( ссылка ) - ^ Перейти обратно: а б с д Джадд, В. Джон (2021). Методы Джадда в иммуногематологии . Сьюзан Т. Джонсон, Джилл Сторри, В. Джон Джадд, Американская ассоциация банков крови (Четвертое изд.). Бетесда, доктор медицины. ISBN 978-1-56395-435-1 . OCLC 1336509285 .
{{cite book}}: CS1 maint: отсутствует местоположение издателя ( ссылка ) - ^ «Глоссарий: Элюция - Глоссарий парня из банка крови» . Парень из банка крови . Проверено 17 апреля 2023 г.
- ^ Ли, Он; Ликотрафитис, Джордж (5 августа 2014 г.). «Модель мембраны эритроцитов с явным описанием липидного бислоя и спектриновой сети» . Биофизический журнал . 107 (3): 642–653. Бибкод : 2014BpJ...107..642L . дои : 10.1016/j.bpj.2014.06.031 . ISSN 1542-0086 . ПМК 4129483 . ПМИД 25099803 .
- ^ Миллер, Линда Э. (2021). Клиническая иммунология и серология: лабораторная перспектива . Кристин Доррестейн Стивенс (Пятое изд.). Филадельфия, Пенсильвания. ISBN 978-0-8036-9440-8 . OCLC 1200832451 .
{{cite book}}: CS1 maint: отсутствует местоположение издателя ( ссылка ) - ^ ИСБТ. «Иммуногенетика эритроцитов и терминология групп крови | Рабочая группа ISBT» . www.isbtweb.org . Проверено 10 апреля 2023 г.
- ^ «Клинически значимые антитела к эритроцитам» . Кровавый завод Северо-Запад . Проверено 10 апреля 2023 г.
- ^ КУИНЛИ, ЕВА Д. (2020). ИММУНОГЕМАТОЛОГИЯ: принципы и практика . [Sl]: ДЖОНС И БАРТЛЕТТ УЧАТСЯ. ISBN 978-1-284-22137-4 . OCLC 1162875932 .
- ^ Уайт, Дж. (февраль 2017 г.). «Антитела к эритроцитам – клиническое значение или просто шум?» . Научная серия ISBT . 12 (1): 19–24. дои : 10.1111/voxs.12325 . S2CID 78254504 .
- ^ «Глоссарий: аутоантитела — глоссарий парня из банка крови» . Парень из банка крови . Проверено 17 апреля 2023 г.
- ^ «Глоссарий: Элюция - Глоссарий парня из банка крови» . Парень из банка крови . Проверено 17 апреля 2023 г.
- ^ «Глоссарий: IgM» . Парень из банка крови . Проверено 20 апреля 2023 г.
- ^ «Глоссарий: IgG» . Парень из банка крови . Проверено 20 апреля 2023 г.
- ^ Блейни, Кэти Д. (2013). Основные и прикладные концепции банков крови и практики переливания крови . Паула Р. Ховард, Кэти Д. Блейни (3-е изд.). Сент-Луис, Миссури: Мосби. ISBN 978-0-323-08663-9 . OCLC 817741300 .
- ^ «Глоссарий: Фаза AHG - Глоссарий парня из банка крови» . Парень из банка крови . Проверено 20 апреля 2023 г.
- ^ «Глоссарий: прямой тест на антиглобулин — глоссарий специалиста из банка крови» . Парень из банка крови . Проверено 20 апреля 2023 г.
- ^ «Глоссарий: непрямой антиглобулиновый тест» . Парень из банка крови . Проверено 20 апреля 2023 г.