✖


Jump to content

флюорофор

(Перенаправлено с флуоресцентных зондов )
Информацию о применении и теории флуоресценции см. в разделе « Флуоресценция в науках о жизни» .
меченная флуорофором Человеческая клетка, .

Флуорофор ) (или флуорохром , аналогично хромофору химическое — флуоресцентное соединение , способное переизлучать свет при световом возбуждении. Флуорофоры обычно содержат несколько объединенных ароматических групп или плоские или циклические молекулы с несколькими π-связями . [1]

Флуорофоры иногда используются отдельно, в качестве индикатора в жидкостях, в качестве красителя для окрашивания определенных структур, в качестве субстрата ферментов или в качестве зонда или индикатора (когда на его флуоресценцию влияют такие факторы окружающей среды, как полярность или ионы). В более общем смысле они ковалентно связаны с макромолекулами , служа маркерами (или красителями, или метками, или репортерами) для аффинных или биоактивных реагентов ( антител , пептидов, нуклеиновых кислот). Флуорофоры особенно используются для окрашивания тканей, клеток или материалов в различных аналитических методах, таких как флуоресцентная визуализация и спектроскопия .

Флуоресцеин , через его аминореактивное изотиоцианатное производное . флуоресцеинизотиоцианат (FITC), был одним из самых популярных флуорофоров От мечения антител, благодаря карбоксифлуоресцеину , приложения распространились и на нуклеиновые кислоты . Другими исторически распространенными флуорофорами являются производные родамина (TRITC), кумарина и цианина . [2] Новые поколения флуорофоров, многие из которых являются запатентованными, часто работают лучше, будучи более фотостабильными, более яркими или менее чувствительными к pH , чем традиционные красители с сопоставимыми возбуждением и излучением. [3] [4]

флуоресценция

[ редактировать ]

Флуорофор поглощает световую энергию определенной длины волны и повторно излучает свет с большей длиной волны. Поглощаемые длины волн , эффективность передачи энергии и время до испускания зависят как от структуры флуорофора, так и от его химического окружения, поскольку молекула в возбужденном состоянии взаимодействует с окружающими молекулами. Длины волн максимального поглощения (≈ возбуждения) и излучения (например, поглощение/излучение = 485 нм/517 нм) являются типичными терминами, используемыми для обозначения данного флуорофора, но может быть важно учитывать весь спектр. Спектр длин волн возбуждения может быть очень узким или более широким, или же он может находиться за пределами предельного уровня. Спектр излучения обычно острее, чем спектр возбуждения, имеет большую длину волны и, соответственно, меньшую энергию. Энергии возбуждения варьируются от ультрафиолета до видимого спектра , а энергии излучения могут продолжаться от видимого света до ближней инфракрасной области.

Основными характеристиками флуорофоров являются:

  • Максимальная длина волны возбуждения и излучения (выраженная в нанометрах (нм)): соответствует пику в спектрах возбуждения и излучения (обычно по одному пику в каждом).
  • Молярный коэффициент поглощения (в молях −1 см −1 ): связывает количество поглощенного света при данной длине волны с концентрацией флуорофора в растворе.
  • Квантовый выход : эффективность передачи энергии от падающего света к испускаемой флуоресценции (количество испускаемых фотонов на каждый поглощенный фотон).
  • Время жизни (в пикосекундах): продолжительность возбужденного состояния флуорофора до возвращения в основное состояние. Это относится к времени, за которое популяция возбужденных флуорофоров распадется до 1/ e (≈0,368) от исходного количества.
  • Стоксов сдвиг : разница между максимальной длиной волны возбуждения и максимальной длиной излучения.
  • Темная фракция : доля молекул, неактивных в излучении флуоресценции. Что касается квантовых точек , длительная микроскопия одиночных молекул показала, что 20–90% всех частиц никогда не излучают флуоресценцию. [5] С другой стороны, наночастицы сопряженного полимера (Pdots) практически не обнаруживают темной фракции в своей флуоресценции. [6] Флуоресцентные белки могут иметь темную фракцию из-за неправильного сворачивания белка или образования дефектного хромофора. [7]

Эти характеристики определяют другие свойства, включая фотообесцвечивание или фоторезистентность (потерю флуоресценции при непрерывном световом возбуждении). Следует учитывать и другие параметры, такие как полярность молекулы флуорофора, размер и форма флуорофора (т.е. характер поляризационной флуоресценции ) и другие факторы, которые могут изменить поведение флуорофоров.

Флуорофоры также можно использовать для гашения флуоресценции других флуоресцентных красителей или для передачи их флуоресценции на еще более длинных волнах .

Размер (молекулярная масса)

[ редактировать ]

Большинство флуорофоров представляют собой органические небольшие молекулы из 20–100 атомов (200–1000 Дальтон ; молекулярная масса может быть выше в зависимости от привитых модификаций и конъюгированных молекул), но существуют также гораздо более крупные природные флуорофоры, которые представляют собой белки : зеленый флуоресцентный белок (GFP). составляет 27 кДа , а некоторые фикобилипротеины (PE, APC...) — ≈240 кДа. По состоянию на 2020 год самым маленьким известным флуорофором считался 3-гидроксиизоникотинальдегид , соединение из 14 атомов и массой всего 123 Да. [8]

Флуоресцентные частицы, такие как квантовые точки (диаметр 2–10 нм, 100–100 000 атомов), также считаются флуорофорами. [9]

Размер флуорофора может стерически препятствовать меченой молекуле и влиять на полярность флуоресценции.

Семьи

[ редактировать ]
Флуоресценция различных веществ в УФ-свете. Зеленый — флуоресцеин , красный — родамин Б , желтый — родамин 6G , синий — хинин , фиолетовый — смесь хинина и родамина 6г. Растворы имеют концентрацию около 0,001% в воде.

Молекулы флуорофора могут использоваться либо отдельно, либо служить флуоресцентным мотивом функциональной системы. В зависимости от молекулярной сложности и методов синтеза молекулы флуорофоров обычно можно разделить на четыре категории: белки и пептиды, небольшие органические соединения, синтетические олигомеры и полимеры и многокомпонентные системы. [10] [11]

Флуоресцентные белки GFP, YFP и RFP (зеленый, желтый и красный соответственно) могут присоединяться к другим специфическим белкам с образованием слитого белка , синтезируемого в клетках после трансфекции подходящего плазмидного носителя.

Небелковые органические флуорофоры принадлежат к следующим основным химическим семействам:

Эти флуорофоры флуоресцируют благодаря делокализованным электронам , которые могут перепрыгивать зону и стабилизировать поглощенную энергию. Например, бензол , один из простейших ароматических углеводородов, возбуждается при 254 нм и излучает при 300 нм. [12] Это отличает флуорофоры от квантовых точек, которые представляют собой флуоресцентные полупроводниковые наночастицы .

Они могут быть присоединены к белкам к определенным функциональным группам, таким как аминогруппы ( активный эфир , карбоксилат , изотиоцианат , гидразин ), карбоксильные группы ( карбодиимид ), тиоловые ( малеимид , ацетилбромид ) и органические азиды (с помощью химической химии или без нее) . в частности ( глутаральдегид )).

Кроме того, могут присутствовать различные функциональные группы, изменяющие их свойства, такие как растворимость, или придающие особые свойства, например, бороновая кислота , которая связывается с сахарами, или несколько карбоксильных групп, связывающихся с определенными катионами. Когда краситель содержит электронодонорную и электроноакцепторную группы на противоположных концах ароматической системы, этот краситель, вероятно, будет чувствителен к полярности окружающей среды ( сольватохромный ), поэтому его называют чувствительным к окружающей среде. Часто красители используются внутри клеток, непроницаемых для заряженных молекул; в результате этого карбоксильные группы превращаются в сложный эфир, который удаляется внутри клеток эстеразами, например фура-2АМ и флуоресцеин-диацетатом .

Следующие семейства красителей являются группами товарных знаков и не обязательно имеют структурное сходство.

Ядра эндотелиальных клеток бычьей легочной артерии окрашены в синий цвет с помощью DAPI , митохондрии окрашены в красный цвет с помощью MitoTracker Red CMXRos и F-актин Alexa Fluor 488 окрашен в зеленый цвет с помощью фаллоидина и визуализированы с помощью флуоресцентного микроскопа.

Примеры часто встречающихся флуорофоров

[ редактировать ]

Реактивные и сопряженные красители

[ редактировать ]
Краситель Ex (нм) эм (нм) МВт Примечания
Гидроксикумарин 325 386 331 Сукцинимидиловый эфир
аминокумарин 350 445 330 Сукцинимидиловый эфир
Метоксикумарин 360 410 317 Сукцинимидиловый эфир
Каскад Синий (375);401 423 596 Гидразид
Тихоокеанский синий 403 455 406 Картины
Тихоокеанский оранжевый 403 551
3-Гидроксизоникотиновый альдегид 385 525 123 КГ 0,15; чувствительный к pH
Люцифер желтый 425 528
НБД 466 539 294 НБД-Х
R-фикоэритрин (PE) 480;565 578 240 тыс.
Конъюгаты PE-Cy5 480;565;650 670 также известный как Cychrome, R670, трехцветный, квантово-красный
Конъюгаты PE-Cy7 480;565;743 767
Красный 613 480;565 613 PE-Техас Красный
PerCP 490 675 35кДа Белок хлорофилла перидинина
ТруРед 490,675 695 Конъюгат PerCP-Cy5.5
ФлюорИкс 494 520 587 (GE Healthcare)
флуоресцеин 495 519 389 ФИТЦ; чувствительный к pH
БОДИПИ-ФЛ 503 512
G-Dye100 498 524 подходит для мечения белков и электрофореза
G-Dye200 554 575 подходит для мечения белков и электрофореза
G-Dye300 648 663 подходит для мечения белков и электрофореза
G-Dye400 736 760 подходит для мечения белков и электрофореза
Сай2 489 506 714 КГ 0,12
Сай3 (512);550 570;(615) 767 КГ 0,15
Cy3B 558 572;(620) 658 КГ 0,67
Cy3.5 581 594;(640) 1102 КГ 0,15
Сай5 (625);650 670 792 КГ 0,28
Cy5.5 675 694 1272 КГ 0,23
Сай7 743 767 818 КГ 0,28
ТРИТЦ 547 572 444 ТРИТЦ
Икс-родамин 570 576 548 XRITC
Лиссамин Родамин B 570 590
Техасский красный 589 615 625 Сульфонилхлорид
Аллофикоцианин (APC) 650 660 104 тыс.
Конъюгаты APC-Cy7 650;755 767 Дальний Красный

Сокращения:

Красители нуклеиновых кислот

[ редактировать ]
Краситель Ex (нм) эм (нм) МВт Примечания
Хехст 33342 343 483 616 АТ-селективный
ДАПИ 345 455 АТ-селективный
Хехст 33258 345 478 624 АТ-селективный
СИТОКС Синий 431 480 ~400 ДНК
Хромомицин А3 445 575 CG-селективный
Митрамицин 445 575
ЙОЙО-1 491 509 1271
Этидий бромид 210;285 605 394 в водном растворе
ГельКрасный 290;520 595 1239 Нетоксичный заменитель бромистого этидия.
Акридиновый оранжевый 503 530/640 ДНК/РНК
СИТОКС Зеленый 504 523 ~600 ДНК
ЭТО-1, ЭТО-ЗА-1 509 533 Витальное пятно, TOTO: цианин димер.
TO-PRO: Цианиновый мономер
Тиазол оранжевый 510 530
CyTRAK Оранжевый 520 615 - (Биостатус) (красный, возбуждение темный)
Пропидия йодид (PI) 536 617 668.4
ЛДС 751 543;590 712;607 472 ДНК (543ex/712em), РНК (590ex/607em)
7 класс 546 647 7-аминоактиномицин D, CG-селективный
СИТОКС Оранжевый 547 570 ~500 ДНК
ЭТО-3, ЭТО-ДЛЯ-3 642 661
ДРАК5 600/647 697 413 (Биостатус) (полезное возбуждение до 488)
ДРАК7 599/644 694 ~700 (Биостатус) (полезное возбуждение до 488)

Красители клеточных функций

[ редактировать ]
Краситель Ex (нм) эм (нм) МВт Примечания
Индо-1 361/330 490/405 1010 Эфир AM, низкий/высокий уровень кальция (Ca 2+ )
Флюо-3 506 526 855 Эфир АМ. рН > 6
Флюо-4 491/494 516 1097 Эфир АМ. рН 7,2
DCFH 505 535 529 2'7'Дихородигидрофлуоресцеин , окисленная форма
ДХР 505 534 346 Дигидрородамин 123 , окисленная форма, легкий катализирует окисление.
СНАРФ 548/579 587/635 pH 6/9

Флуоресцентные белки

[ редактировать ]
Краситель Ex (нм) эм (нм) МВт КГ БР ПС Примечания
GFP (мутация Y66H) 360 442
GFP (мутация Y66F) 360 508
EBFP 380 440 0.18 0.27 мономер
EBFP2 383 448 20 мономер
Азурит 383 447 15 мономер
GFPuv 385 508
Т-Сапфир 399 511 0.60 26 25 слабый димер
лазурный 433 475 0.62 27 36 слабый димер
mCFP 433 475 0.40 13 64 мономер
мБирюзовый2 434 474 0.93 28 мономер
ECFP 434 477 0.15 3
СайПет 435 477 0.51 18 59 слабый димер
GFP (мутация Y66W) 436 485
mKeima-Red 440 620 0.24 3 мономер (MBL)
ТегCFP 458 480 29 димер (Евроген)
AmCyan1 458 489 0.75 29 тетрамер, (Clontech)
мТФП1 462 492 54 димер
GFP (мутация S65A) 471 504
Мидорииши Циан 472 495 0.9 25 димер (МБЛ)
GFP дикого типа 396,475 508 26 тыс. 0.77
GFP (мутация S65C) 479 507
ТурбоGFP 482 502 26 тыс. 0.53 37 димер, (Евроген)
ТегGFP 482 505 34 мономер (Евроген)
GFP (мутация S65L) 484 510
Изумруд 487 509 0.68 39 0.69 слабый димер (Invitrogen)
GFP (мутация S65T) 488 511
ЭГФП 488 507 26 тыс. 0.60 34 174 слабый димер (Clontech)
Азами Грин 492 505 0.74 41 мономер (MBL)
ЗсЗеленый1 493 505 105 тыс. 0.91 40 тетрамер, (Clontech)
ТегYFP 508 524 47 мономер (Евроген)
ЕМФП 514 527 26 тыс. 0.61 51 60 слабый димер (Clontech)
Топаз 514 527 57 мономер
Венера 515 528 0.57 53 15 слабый димер
мцитрин 516 529 0.76 59 49 мономер
ЮПет 517 530 0.77 80 49 слабый димер
ТурбоYFP 525 538 26 тыс. 0.53 55.7 димер, (Евроген)
ZsЖелтый1 529 539 0.65 13 тетрамер, (Clontech)
Молюсь за апельсин 548 559 0.60 31 мономер (MBL)
mОранжевый 548 562 0.69 49 9 мономер
Аллофикоцианин (APC) 652 657.5 105 кДа 0.68 гетеродимер, сшитый [13]
МКО 548 559 0.60 31 122 мономер
ТурбоЗП 553 574 26 тыс. 0.67 62 димер, (Евроген)
tdПомидор 554 581 0.69 95 98 тандемный димер
ТегRFP 555 584 50 мономер (Евроген)
Мономер DsRed 556 586 ~28 тыс. 0.1 3.5 16 мономер (Clontech)
DsRed2 («Запрос предложений») 563 582 ~110 тыс. 0.55 24 (Клонтех)
mКлубника 574 596 0.29 26 15 мономер
ТурбоFP602 574 602 26 тыс. 0.35 26 димер, (Евроген)
AsRed2 576 592 ~110 тыс. 0.21 13 тетрамер, (Clontech)
мРФП1 584 607 ~30 тыс. 0.25 мономер, ( Десять лаб )
J-красный 584 610 0.20 8.8 13 димер
R-фикоэритрин (RPE) 565 >498 573 250 кДа 0.84 гетеротример [13]
B-фикоэритрин (BPE) 545 572 240 кДа 0.98 гетеротример [13]
мЧерри 587 610 0.22 16 96 мономер
HcRed1 588 618 ~52 тыс. 0.03 0.6 димер, (Clontech)
Катюша 588 635 23 димер
П3 614 662 ~ 10 000 кДа фикобилисомный комплекс [13]
Перидинин хлорофилл (PerCP) 483 676 35 кДа тример [13]
мКейт (TagFP635) 588 635 15 мономер (Евроген)
ТурбоFP635 588 635 26 тыс. 0.34 22 димер, (Евроген)
mСлива 590 649 51,4 тыс. 0.10 4.1 53
мМалина 598 625 0.15 13 мономер, более быстрый фотоотбеливатель, чем mPlum
мСкарлет 569 594 0.70 71 277 мономер [14]

Сокращения:

Приложения

[ редактировать ]
Дополнительная информация: Флуоресценция в науках о жизни.

Особое значение флуорофоры имеют в области биохимии и исследования белков , например, в иммунофлуоресценции , клеточном анализе, [15] иммуногистохимия , [3] [16] и датчики малых молекул . [17] [18]

Использование вне наук о жизни

[ редактировать ]
Флуоресцентный морской краситель

Флуоресцентные красители находят широкое применение в промышленности под названием «неоновые цвета», например:

См. также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Хуан Карлос Стокерт, Альфонсо Бласкес-Кастро (2017). «Глава 3 Красители и флюорохромы» . Флуоресцентная микроскопия в науках о жизни . Издательство Bentham Science. стр. 61–95. ISBN  978-1-68108-519-7 . Проверено 24 декабря 2017 г.
  2. ^ Ритдорф Дж (2005). Микроскопические методы . Достижения в области биохимической инженерии / биотехнологии. Берлин: Шпрингер. стр. 246–9. ISBN  3-540-23698-8 . Проверено 13 декабря 2008 г.
  3. ^ Перейти обратно: а б Цянь Р.Ю.; Вагонер А (1995). «Флуорофоры для конфокальной микроскопии» . В Поли Дж.Б. (ред.). Справочник по биологической конфокальной микроскопии . Нью-Йорк: Пленум Пресс. стр. 267–74. ISBN  0-306-44826-2 . Проверено 13 декабря 2008 г.
  4. ^ Лакович, младший (2006). Принципы флуоресцентной спектроскопии (3-е изд.). Спрингер. п. 954. ИСБН  978-0-387-31278-1 .
  5. ^ Понс Т., Мединц И.Л., Фаррелл Д., Ван Х, Граймс А.Ф., Инглиш Д.С., Берти Л., Маттусси Х. (2011). «Исследования колокализации одиночных молекул проливают свет на идею полностью излучающих и темных одиночных квантовых точек». Маленький . 7 (14): 2101–2108. дои : 10.1002/smll.201100802 . ПМИД   21710484 .
  6. ^ Конер А.Л., Крндиджа Д., Хоу К., Шерратт Д.Д., Ховарт М. (2013). «Наночастицы сопряженного полимера с гидроксильными концевыми группами имеют яркую фракцию, близкую к единице, и обнаруживают зависимость от холестерина нанодоменов IGF1R» . АСУ Нано . 7 (2): 1137–1144. дои : 10.1021/nn3042122 . ПМЦ   3584654 . ПМИД   23330847 .
  7. ^ Гарсия-Парахо МФ, Сегерс-Нолтен ГМ, Веерман Х.А., Греве Дж., ван Хюльст Н.Ф. (2000). «Световая динамика флуоресцентного излучения в одиночных молекулах зеленого флуоресцентного белка в реальном времени» . ПНАС . 97 (13): 7237–7242. Бибкод : 2000PNAS...97.7237G . дои : 10.1073/pnas.97.13.7237 . ПМК   16529 . ПМИД   10860989 .
  8. ^ Козенс, Том (16 декабря 2020 г.). «Флуоресцентная молекула бьет рекорд размера среди красителей, излучающих зеленый цвет» . chemistryworld.com . Проверено 3 декабря 2021 г.
  9. ^ Ли Z, Чжао X, Хуан С, Гун X (2019). «Последние достижения в производстве экологически чистых люминесцентных солнечных концентраторов с использованием нетоксичных квантовых точек в качестве флуорофоров». Дж. Матер. хим. С. ​ 7 (40): 12373–12387. дои : 10.1039/C9TC03520F . S2CID   203003761 .
  10. ^ Лю, Дж.; Лю, К.; Он, В. (2013), «Флуорофоры и их применение в качестве молекулярных зондов в живых клетках», Curr. Орг. хим. , 17 (6): 564–579, дои : 10.2174/1385272811317060003
  11. ^ Хуан Карлос Стокерт, Альфонсо Бласкес-Кастро (2017). «Глава 4. Флуоресцентные этикетки» . Флуоресцентная микроскопия в науках о жизни . Издательство Bentham Science. стр. 96–134. ISBN  978-1-68108-519-7 . Проверено 24 декабря 2017 г.
  12. ^ Omlc.ogi.edu
  13. ^ Перейти обратно: а б с д и Колумбия Биологические науки
  14. ^ Биндельс, Дафна С.; Хаарбош, Линдси; ван Вирен, Лаура; Постма, Мартен; Визе, Катрин Э.; Мастоп, Марике; Омонье, Сильвен; Готард, Гийом; Руайан, Антуан; Хинк, Марк А.; Гаделла, Теодор WJ (январь 2017 г.). «mScarlet: яркий мономерный красный флуоресцентный белок для клеточной визуализации» . Природные методы . 14 (1): 53–56. дои : 10.1038/nmeth.4074 . ISSN   1548-7105 . ПМИД   27869816 . S2CID   3539874 .
  15. ^ Сырбу, Дмитрий; Лули, Саймир; Лесли, Джек; Окли, Фиона; Беннистон, Эндрю К. (2019). «Улучшенная оптическая визуализация in vivo воспалительной реакции на острое повреждение печени у мышей C57BL/6 с использованием очень яркого красителя BODIPY, работающего в ближнем инфракрасном диапазоне». ХимМедХим . 14 (10): 995–999. дои : 10.1002/cmdc.201900181 . ISSN   1860-7187 . ПМИД   30920173 . S2CID   85544665 .
  16. ^ Таки, Масаясу (2013). «Глава 5. Визуализация и зондирование кадмия в клетках». В Астрид Сигел; Хельмут Сигель; Роланд К.О. Сигел (ред.). Кадмий: от токсикологии к эссенциальности . Ионы металлов в науках о жизни. Том. 11. Спрингер. стр. 99–115. дои : 10.1007/978-94-007-5179-8_5 . ПМИД   23430772 .
  17. ^ Сырбу, Дмитрий; Батчер, Джон Б.; Уодделл, Пол Г.; Андрас, Питер; Беннистон, Эндрю К. (18 сентября 2017 г.). «Локально возбужденные красители с переносом заряда в состоянии, связанные с состоянием, как оптически чувствительные зонды, запускающие нейроны» (PDF) . Химия - Европейский журнал . 23 (58): 14639–14649. дои : 10.1002/chem.201703366 . ISSN   0947-6539 . ПМИД   28833695 .
  18. ^ Цзян, Сицянь; Ван, Линфэй; Кэрролл, Шайна Л.; Чен, Цзяньвэй; Ван, Мэн К.; Ван, Цзинь (20 августа 2018 г.). «Проблемы и возможности низкомолекулярных флуоресцентных зондов в приложениях окислительно-восстановительной биологии» . Антиоксиданты и окислительно-восстановительная сигнализация . 29 (6): 518–540. дои : 10.1089/ars.2017.7491 . ISSN   1523-0864 . ПМК   6056262 . ПМИД   29320869 .
[ редактировать ]
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Fluorophore&oldid=1219684393"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: c08d3bf27cfbd0fd05113b59d890601e__1713497280
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/c0/1e/c08d3bf27cfbd0fd05113b59d890601e.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Fluorophore - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)