Лизогенный бульон
Лизогенный бульон ( LB ) представляет собой питательными веществами богатую среду, используемую в основном для роста бактерий. Его создатель, Джузеппе Бертани , предполагал, что LB будет обозначать лизогенный бульон . [ 1 ] но LB также в просторечии означает бульон Лурии , бульон Леннокса , бульон жизни или Лурии среду -Бертани . [ 2 ] Формула среды LB была опубликована в 1951 году в первой статье Бертани о лизогении . В этой статье он описал модифицированный эксперимент с одиночным взрывом и выделение фагов P1 , P2 и P3 . Он разработал среду LB для оптимизации роста шигелл и образования бляшек . [ 1 ] [ 3 ]
Составы сред LB были отраслевым стандартом для культивирования Escherichia coli еще в 1950-х годах. [ 4 ] [ 5 ] Эти среды широко используются в молекулярной микробиологии для получения плазмидной ДНК и рекомбинантных белков. Она продолжает оставаться одной из наиболее распространенных сред, используемых для поддержания и культивирования лабораторных рекомбинантных штаммов Escherichia coli . [ 5 ] [ 4 ] Однако для физиологических исследований использование среды LB не рекомендуется. [ 6 ]
Существует несколько распространенных формулировок LB. Хотя они разные, они обычно имеют схожий состав ингредиентов, используемых для стимулирования роста, включая следующие:
- Пептиды и казеиновые пептоны
- Витамины (включая витамины группы B)
- Микроэлементы (например, азот, сера, магний)
- Минералы
Ионы натрия для транспорта и осмотического баланса обеспечиваются хлоридом натрия . Триптон используется для обеспечения незаменимыми аминокислотами растущих бактерий , такими как пептиды и пептоны, а дрожжевой экстракт используется для обеспечения множества органических соединений, полезных для роста бактерий. Эти соединения включают витамины и некоторые микроэлементы.
В своей оригинальной статье 1951 года Бертани использовал 10 граммов NaCl и 1 грамм глюкозы на 1 л раствора; Лурия в своем «бульоне L» 1957 года в точности скопировал оригинальный рецепт Бертани. [ 7 ] Рецепты, опубликованные позже, обычно не включают глюкозу. [ нужна ссылка ]
Формула
[ редактировать ]
Составы обычно различаются по количеству хлорида натрия, что обеспечивает выбор подходящих осмотических условий для конкретного бактериального штамма и желаемых условий культивирования. Составы с низким содержанием соли, Леннокс и Лурия, идеально подходят для культур, требующих чувствительных к соли антибиотиков.
- LB (Миллер) (10 г/л NaCl)
- LB (Леннокс) (5 г/л NaCl)
- LB (Лурия) (0,5 г/л NaCl) [ 8 ]
Регулировка pH
[ редактировать ]Перед автоклавированием в некоторых лабораториях pH LB доводят до 7,5 или 8 с помощью гидроксида натрия. Однако гидроксид натрия не обеспечивает буферной способности среды, что приводит к быстрым изменениям pH во время культивирования бактерий. Чтобы обойти эту проблему, некоторые лаборатории предпочитают корректировать pH с помощью буфера TRIS с концентрацией 5–10 ммоль/л , разбавленного из исходного раствора TRIS с концентрацией 1 моль/л до желаемого уровня pH. Однако в большинстве ситуаций корректировка pH не является абсолютной необходимостью. Некоторые лаборатории корректируют pH до 7,0 просто в качестве меры предосторожности. [ 8 ]
См. также
[ редактировать ]- пластинка с агаром
- Сальвадор Лурия
- Среда SOC - еще одна широко используемая среда для культивирования Escherichia coli в по молекулярной биологии . работе
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Перейти обратно: а б Бертани, Г. (2004). «Лизогения в середине двадцатого века: P1, P2 и другие экспериментальные системы» . Журнал бактериологии . 186 (3): 595–600. дои : 10.1128/JB.186.3.595-600.2004 . ПМК 321500 . ПМИД 14729683 .
- ^ Линдквист, Б.Х.; Хаггард-Люнгквист, Э; Календарь, Р (3 апреля 2015 г.). «Джузеппе Бертани (1923–2015)» . Бактериофаг . 5 (2): e1054060. дои : 10.1080/21597081.2015.1054060 . ПМЦ 4588218 .
- ^ Бертани, Дж. (1951). «Исследования по лизогенезу. I. Способ освобождения фага лизогенными Escherichia coli » . Журнал бактериологии . 62 (3): 293–300. дои : 10.1128/jb.62.3.293-300.1951 . ПМЦ 386127 . ПМИД 14888646 .
- ^ Перейти обратно: а б Эзрати, Бенджамин; Генри, Камилла; Эрисс, Марион; Денамур, Эрик; Баррас, Фредерик (сентябрь 2014 г.). «Коммерческая культуральная среда Lysogeny Broth и окислительный стресс: осторожная история». Свободнорадикальная биология и медицина . 74 : 245–251. doi : 10.1016/j.freeradbiomed.2014.07.010 .
- ^ Перейти обратно: а б «Введение в микробные среды» . Миллипор Сигма . Проверено 1 августа 2024 г.
- ^ Хироши, Никайдо (2009). «Ограничения LB Medium» . Учтены мелочи .
- ^ Лурия, ЮВ; Берроуз, Жанна В. (октябрь 1957 г.). «Гибридизация кишечной палочки и шигеллы » . Журнал бактериологии . 74 (4): 461–476. дои : 10.1128/jb.74.4.461-476.1957 . ПМК 289941 . ПМИД 13475269 .
- ^ Перейти обратно: а б МакВильямс, Мария П.; Ляо, Мин-Кен (9 октября 2006 г.). «Среды бульона Лурии (LB) и агара Лурии (LA) и протокол их использования» (PDF) . Американское общество микробиологии . Проверено 6 марта 2023 г.