пластинка с агаром

пластинка с агаром
	Агаровая культура E. coli колоний
Использование	Микробиологическая культура ; Искусство
Похожие товары	чашка Петри ; Среда роста

Чашка с агаром представляет собой чашку Петри , содержащую питательную среду , затвердевшую агаром , используемую для культивирования микроорганизмов . Иногда для воздействия на рост добавляют селективные соединения, например антибиотики . ^{[ 1 ]}

96-пиннер, используемый для точечного анализа дрожжевых, грибковых или бактериальных клеток.

Отдельные микроорганизмы, помещенные на чашку, вырастут в отдельные колонии , каждая из которых представляет собой клон , генетически идентичный отдельному организму-предку (за исключением низкой, неизбежной скорости мутаций ). Таким образом, планшет можно использовать либо для оценки концентрации организмов в жидкой культуре или соответствующего разведения этой культуры с помощью счетчика колоний , либо для создания генетически чистых культур из смешанной культуры генетически различных организмов.

Доступно несколько методов высева клеток. Один из методов известен как « полосатость ». В этом методе капля культуры на конце тонкой стерильной проволочной петли, иногда называемой инокулятором, наносится штрихами по поверхности агара, оставляя организмы, большее количество в начале полосы и меньшее число в конце. В какой-то момент во время успешной «полосы» количество депонированных организмов будет таким, что в этой области вырастут отдельные отдельные колонии, которые можно будет удалить для дальнейшего культивирования, используя другую стерильную петлю.

Другим способом посева организмов, помимо нанесения штрихов, на чашки с агаром является точечный анализ . Этот тип анализа часто используется для проверки жизнеспособности клеток и выполняется с помощью пиннеров (часто также называемых лягушками). Третий метод — использование стерильных стеклянных шариков для высеивания клеток. В этом методе клетки выращивают в жидкой культуре, в которой небольшой объем пипеткой наносят на чашку с агаром, а затем распределяют шариками. Посев реплик – это еще один метод, используемый для высеивания клеток на чашки с агаром. Эти четыре метода являются наиболее распространенными, но возможны и другие. Крайне важно работать стерильно , чтобы предотвратить загрязнение чашек с агаром. ^{[ 1 ]} Таким образом, покрытие часто выполняется в ламинарном шкафу или на рабочем столе рядом с бунзеновской горелкой . ^{[ 2 ]}

История

В 1881 году Фанни Гессе , которая работала техником у своего мужа Вальтера Гессе в лаборатории Роберта Коха , предложила агар в качестве эффективного средства для затвердевания, поскольку в течение некоторого времени он был обычным явлением при приготовлении варенья. ^{[ 3 ]}

Типы

Как и другие питательные среды , составы агара, используемые в чашках, могут быть классифицированы как «определенные» или «неопределенные»; определенная среда синтезируется из отдельных химических веществ, необходимых организму, поэтому точный молекулярный состав известен, тогда как неопределенная среда изготавливается из натуральных продуктов, таких как дрожжевой экстракт , точный состав которого неизвестен. ^{[ 4 ]}

Чашки с агаром могут быть сформулированы либо как разрешающие, с целью обеспечения возможности роста любых присутствующих организмов, либо как ограничительные или селективные, с целью обеспечения роста только определенной подгруппы этих организмов. ^{[ 5 ]} Это может принимать форму требований к питанию, например, предоставляя определенное соединение, такое как лактоза , в качестве единственного источника углерода и тем самым отбирая только те организмы, которые могут метаболизировать это соединение, или путем включения определенного антибиотика или другого вещества для отбора только тех организмов, которые устойчивы к этому веществу. Это в некоторой степени коррелирует с определенными и неопределенными медиа; Неопределенные среды, изготовленные из натуральных продуктов и содержащие неизвестную комбинацию очень многих органических молекул, обычно более либеральны с точки зрения удовлетворения потребностей более широкого круга организмов. Напротив, определенные среды могут быть точно адаптированы для отбора организмов с конкретными свойствами.

Чашки с агаром также могут быть индикаторными чашками, в которых организмы отбираются не на основе роста, а вместо этого отличаются изменением цвета некоторых колоний, обычно вызываемым действием фермента на какое-либо соединение, добавленное в среду. ^{[ 6 ]}

Планшеты инкубируют от 12 часов до нескольких дней, в зависимости от проводимого теста.

Обычно используемые типы чашек с агаром включают:

Кровавый агар

Пластинка с кровяным агаром

Пластинки с кровяным агаром (BAP) содержат кровь млекопитающих (обычно овцы или лошади), обычно в концентрации 5–10%. BAP обогащаются, а дифференциальные среды используются для изоляции прихотливых микроорганизмов и выявления гемолитической активности. β-Гемолитическая активность проявляется в лизисе и полном переваривании содержимого эритроцитов, окружающих колонию. Примеры включают Streptococcus haemolyticus . Альфа-гемолиз вызывает только частичный лизис эритроцитов (клеточная мембрана остается неповрежденной) и становится зеленым или коричневым из-за превращения гемоглобина в метгемоглобин. Примером этого может быть Streptococcus viridans . γ-Гемолиз (или негемолитический) — это термин, обозначающий отсутствие гемолитической активности. ^{[ 7 ]} BAP также содержат мясной или дрожжевой экстракт , триптон , хлорид натрия и агар. ^{[ 8 ]}

шоколадный агар

Шоколадный агар — это разновидность пластинки с кровяным агаром, в которой клетки крови лизируются путем нагревания клеток до 80 °C. Его используют для выращивания требовательных респираторных бактерий, таких как Haemophilus influenzae . Шоколадный агар назван в честь своего цвета, и шоколада в чашке не содержится .

Агар Тайера-Мартина

Агар Тайера-Мартина представляет собой шоколадный агар, предназначенный для выделения Neisseria gonorrhoeae и Neisseria meningitidis .

Тиосульфат-цитрат-соли желчных кислот-сахарозный агар

Тиосульфат-цитрат-соли желчных кислот-сахарозный агар усиливает рост Vibrio spp. , включая холерный вибрион . ^{[ 9 ]}

Общие бактериальные среды

Четыре типа чашек с агаром, демонстрирующие различный рост в зависимости от метаболизма бактерий.

Желчно-эскулиновый агар используется для выделения Enterococcus и группы Streptococcus видов D.
Агар CLED - агар с цистеином , лактозой и дефицитом электролитов используется для изоляции и дифференциации бактерий мочевыводящих путей, поскольку он подавляет роение видов Proteus и может различать ферментирующих и неферментирующих лактозу.
Среда Гранада используется для выделения и дифференциации стрептококков группы В , Streptococcus agalactiae из клинических образцов. Он растет в среде Гранада в виде красных колоний, при этом большинство сопутствующих бактерий ингибируется.
Гектоэновый энтеросолюбильный агар предназначен для выделения и выделения фекальных бактерий семейства Enterobacteriaceae . Это особенно полезно при выделении сальмонелл и шигелл .
Лизогенный бульон используют для культивирования Escherichia coli . ^{[ 10 ]}
Агар МакКонки — это селективная и дифференциальная среда, используемая для дифференциации грамотрицательных бактерий и подавления роста грамположительных бактерий. Добавление в агар желчных солей и кристаллического фиолетового подавляет рост большинства грамположительных бактерий, что делает агар МакКонки селективным. Лактозу и нейтральный красный добавляют, чтобы отличить ферментеры лактозы, образующие розовые колонии, от неферментирующих лактозу, образующих прозрачные колонии. Альтернативная среда, эозин-метиленовый синий, служит той же цели. ^{[ 11 ]}
Агар с маннитовой солью также является селективной и дифференциальной средой. Маннит указывает на организмы , которые ферментируют маннит: ферментация маннита производит молочную кислоту , снижая pH и окрашивая пластинку в желтый цвет. Соль отбирают для галофилов ; организмы, которые не выдерживают высокого содержания соли, не могут хорошо расти.
Агар Мюллера-Хинтона содержит говяжий настой, пептон и крахмал и используется в основном для тестирования чувствительности к антибиотикам. Это может быть кровяной агар .
Питательный агар обычно используют для выращивания неприхотливых организмов и наблюдения за образованием пигментов. Его безопасно использовать в школьных научных лабораториях, поскольку он не способствует избирательному росту патогенных бактерий.
Агар Оноза позволяет проводить более быструю бактериологическую диагностику, поскольку колонии сальмонелл и шигелл можно четко и надежно отличить от других энтеробактерий. Выходы сальмонелл из образцов стула, полученных при использовании этой среды, выше, чем при использовании агара LEIFSON или Salmonella-Shigella . агара
Агар с фенилэтиловым спиртом позволяет выделить виды стафилококков , ингибируя при этом грамотрицательные бациллы (например, Escherichia coli , Shigella , Proteus и т. д.).
Агар R2A — неспецифическая среда, имитирующая воду, поэтому используется для анализа воды.
Триптический (триптиказный) соевый агар (TSA) представляет собой среду общего назначения, получаемую путем ферментативного расщепления соевого шрота и казеина . Часто это основная среда для других типов агара; например, пластинки с кровяным агаром изготавливаются путем обогащения пластинок TSA кровью. Пластины TSA поддерживают рост многих полуприхотливых бактерий, включая некоторые виды бруцелл , коринебактерий , листерий , нейссерий и вибрионов .
Ксилозо - лизин - дезоксихолатный агар используется для посева образцов стула и содержит два индикатора. рост грамотрицательных бактерий Его формула подавляет рост грамположительных бактерий, одновременно стимулируя . Колонии ферментеров лактозы имеют желтый цвет. Его также используют для культивирования возможных сальмонелл , которые могут присутствовать в образце пищи. Большинство колоний сальмонеллы образуют на нем черный центр.
Цетримидный агар используется для селективного выделения грамотрицательных бактерий Pseudomonas aeruginosa .
Агар Тинсдейла содержит теллурит калия , который позволяет изолировать Corynebacterium diphteriae . ^{[ 9 ]}

Грибковые среды

Агар Сабуро используется для культивирования грибов и имеет низкий уровень pH , что подавляет рост большинства бактерий; он также содержит антибиотик гентамицин , специально подавляющий рост грамотрицательных бактерий.
Агар с настоем сена предназначен для культивирования слизевиков (которые не являются грибами).
Картофельно-декстрозный агар используется для культивирования определенных видов грибов.
Солодово-экстрактный агар имеет высокое содержание пептона и является кислым. В основном его используют для выделения грибковых микроорганизмов.
среду MMN (модифицированная среда Мелина-Норкранса) и среду BAF грибов используют Для эктомикоризных .
Хромогенные агары позволяют отличить некоторые основные типы грибковой инфекции.

Вид снизу на чашку с агаром Сабуро с колонией Trichophyton Rubrum var. Родхайни
CHROMAgar ( хромогенный агар ) с характерным присутствием некоторых основных грибковых патогенов.
Грибы ( аскомицеты ), растущие в аксенических культурах , каждая из которых представляет собой культуру одного выбранного организма и свободна от всех других организмов, что позволяет изучать культивируемый организм изолированно.
Aspergillus niger, растущий на картофельно-декстрозном агаре

Мосс медиа

Агар Кнопа используется для аксенического культивирования протонемы и целых растений мха , таких как Physcomitrella patens модельный организм . ^{[ 12 ]}

Дрожжевые среды

Среду YEPD часто используют в качестве общей среды для выращивания дрожжей, таких как Saccharomyces cerevisiae и Candida albicans.
Среда для споруляции – это среда, используемая, когда необходимо образование спор. Его также можно использовать при работе с грибами или бактериями в зависимости от того, способен ли штамм образовывать споры.

Мега Тарелка

Чашка Петри размером 2х4 фута, наполненная 14 л (литрами) агаризованной среды, полученной из морских водорослей, созданной учеными Гарварда и использованной для того, чтобы увидеть, как E. coli эволюционировала и стала устойчивой к антибиотикам. Мегапланшет также помог изучить более уникальные концепции микробиологии, такие как параллельная эволюция, мутационный отбор, колониальная интерференция и т. д. ^{[ 13 ]}

См. также

Различные специфические типы агара:

Ссылки

^ Перейти обратно: ^а ^б Мэдиган М., Мартинко Дж., ред. (2005). Брок Биология микроорганизмов (11-е изд.). Прентис Холл. ISBN 0-13-144329-1 .
^ Сандерс, Эрин Р. (11 мая 2012 г.). «Асептические лабораторные методы: методы посева» . Журнал визуализированных экспериментов (63): e3064. дои : 10.3791/3064 . ПМЦ 4846335 . ПМИД 22617405 . Архивировано из оригинала 14 ноября 2017 года . Проверено 3 мая 2018 г.
^ «История агаровой пластинки» . Новости лаборатории . Архивировано из оригинала 11 февраля 2010 года . Проверено 22 февраля 2010 г.
^ барон С; и др., ред. (1996). Медицинская микробиология барона (4-е изд.). Медицинский филиал Техасского университета . ISBN 0-9631172-1-1 . (через книжную полку NCBI) .
^ Райан К.Дж.; Рэй К.Г., ред. (2004). Медицинская микробиология Шерриса (4-е изд.). МакГроу Хилл. ISBN 0-8385-8529-9 .
^ «Индикаторные таблички» . Проверено 12 июля 2018 г.
^ «Пластинки с кровяным агаром и протоколы гемолиза» . Архивировано из оригинала 2 февраля 2012 г. Проверено 28 октября 2014 г.
^ «Кровавый агар – состав, приготовление, использование и изображения» , Microbiology Info.com
^ Перейти обратно: ^а ^б Фишер, Брюс; Харви, Ричард П.; Чампе, Памела К. (2007). Иллюстрированные обзоры Липпинкотта: микробиология (серия иллюстрированных обзоров Липпинкотта) . Хагерствон, доктор медицины: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс. ISBN 978-0-7817-8215-9 .
^ Миллер, Дж. Х. (1972). Эксперименты по молекулярной генетике. Лаборатория Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк.
^ Юнг, Бенджамин; Хойлат, Жиль Дж. (2022), «MacConkey Medium» , StatPearls , Остров сокровищ (Флорида): StatPearls Publishing, PMID 32491326 , получено 12 декабря 2022 г.
^ Рески, Ральф ; Абель, Вольфганг О. (1985). «Индукция почкования хлоренемат и каулонем мха Physcomitrella patens с использованием изопентениладенина» . Планта . 165 (3): 354–358. дои : 10.1007/bf00392232 . ПМИД 24241140 . S2CID 11363119 .
^ «Кинематографический подход к лекарственной устойчивости» . Гарвардская газета . 08.09.2016 . Проверено 8 апреля 2021 г.

Внешние ссылки

[Brock-1] Перейти обратно: ^а ^б Мэдиган М., Мартинко Дж., ред. (2005). Брок Биология микроорганизмов (11-е изд.). Прентис Холл. ISBN 0-13-144329-1 .

[2] Сандерс, Эрин Р. (11 мая 2012 г.). «Асептические лабораторные методы: методы посева» . Журнал визуализированных экспериментов (63): e3064. дои : 10.3791/3064 . ПМЦ 4846335 . ПМИД 22617405 . Архивировано из оригинала 14 ноября 2017 года . Проверено 3 мая 2018 г.

[3] «История агаровой пластинки» . Новости лаборатории . Архивировано из оригинала 11 февраля 2010 года . Проверено 22 февраля 2010 г.

[Baron-4] барон С; и др., ред. (1996). Медицинская микробиология барона (4-е изд.). Медицинский филиал Техасского университета . ISBN 0-9631172-1-1 . (через книжную полку NCBI) .

[Sherris-5] Райан К.Дж.; Рэй К.Г., ред. (2004). Медицинская микробиология Шерриса (4-е изд.). МакГроу Хилл. ISBN 0-8385-8529-9 .

[6] «Индикаторные таблички» . Проверено 12 июля 2018 г.

[7] «Пластинки с кровяным агаром и протоколы гемолиза» . Архивировано из оригинала 2 февраля 2012 г. Проверено 28 октября 2014 г.

[8] «Кровавый агар – состав, приготовление, использование и изображения» , Microbiology Info.com

[Microbiology-9] Перейти обратно: ^а ^б Фишер, Брюс; Харви, Ричард П.; Чампе, Памела К. (2007). Иллюстрированные обзоры Липпинкотта: микробиология (серия иллюстрированных обзоров Липпинкотта) . Хагерствон, доктор медицины: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс. ISBN 978-0-7817-8215-9 .

[10] Миллер, Дж. Х. (1972). Эксперименты по молекулярной генетике. Лаборатория Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк.

[11] Юнг, Бенджамин; Хойлат, Жиль Дж. (2022), «MacConkey Medium» , StatPearls , Остров сокровищ (Флорида): StatPearls Publishing, PMID 32491326 , получено 12 декабря 2022 г.

[12] Рески, Ральф ; Абель, Вольфганг О. (1985). «Индукция почкования хлоренемат и каулонем мха Physcomitrella patens с использованием изопентениладенина» . Планта . 165 (3): 354–358. дои : 10.1007/bf00392232 . ПМИД 24241140 . S2CID 11363119 .

[13] «Кинематографический подход к лекарственной устойчивости» . Гарвардская газета . 08.09.2016 . Проверено 8 апреля 2021 г.

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]

[ 13 ]

Агаровая культура E. coli колоний
Использование	Микробиологическая культура Искусство
Похожие товары	чашка Петри Среда роста