Иммунофиксация
- А. Нормальная сыворотка
- B. Моноклональный интактный иммуноглобулин IgGλ.
- C, D. Моноклональный интактный иммуноглобулин IgDλ и свободная легкая цепь λ (Fλ).
Кон. = Традиционное электрофорезное окрашивание общего белка.
Иммунофиксация позволяет обнаружить и типировать моноклональные антитела или иммуноглобулины в сыворотке или моче . Это имеет большое значение для диагностики и мониторинга некоторых заболеваний крови, таких как миелома .
Принцип
[ редактировать ]Этот метод обнаруживает путем осаждения : когда растворимый антиген (Ag) вступает в контакт с соответствующим антителом , происходит осаждение, которое можно увидеть невооруженным глазом или под микроскопом. [ нужна ссылка ]
Иммунофиксация сначала разделяет антитела в смеси в зависимости от их специфической электрофоретической подвижности. С целью идентификации используют антисыворотки, специфичные к целевым антителам. [ 1 ]
В частности, иммунофиксация позволяет обнаруживать моноклональные антитела, характерные для таких заболеваний, как миелома или макроглобулинемия Вальденстрема .
Техника
[ редактировать ]Методика заключается в нанесении образца сыворотки (или предварительно концентрированной мочи) на гель. После применения электрического тока, позволяющего разделить белки по размеру, антитела, специфичные для каждого типа иммуноглобулина на гель накладываются . Таким образом, на геле появляются более или менее узкие полосы, относящиеся к разным иммуноглобулинам. [ нужна ссылка ]
Иммунофиксация, как и иммуноэлектрофорез, происходит в два этапа:
- Первый шаг идентичен для обоих методов. Он заключается в нанесении на гель иммуноглобулинов, содержащихся в сыворотке или моче, с последующим разделением иммуноглобулинов по их электрофоретической подвижности путем заставить их мигрировать под действием электрического поля. Эта миграция зависит от массы и заряда антигена. Как только иммуноглобулины разделены, мы можем перейти к следующему шагу.
- Второй шаг зависит от используемой техники. Иммунофиксация требует электрофореза для повторной миграции белков сыворотки. Затем для обработки каждого повтора используют специфическую антисыворотку к иммуноглобулину. Для этого антисыворотки не помещают в канал, как при электрофорезе, а добавляют индивидуально в каждую полосу миграции. Присутствие моноклонального иммуноглобулина приводит к появлению узкой полосы после окрашивания осадков комплекса. Например, в случае лямбда-IgG будет узкая полоса как на треке, на котором был отложен анти-G, так и на треке, на котором был отложен анти-лямбда.
Достоинства
[ редактировать ]Иммунофиксация имеет тенденцию заменять электрофорез белков, потому что: [ нужна ссылка ]
- это быстрее (результаты в течение трех часов);
- он несколько более чувствителен. Иммунофиксация может выявить иммуноглобулин, пропущенный при электрофорезе белков, особенно в низких концентрациях (менее 1 грамм/литр);
- его можно частично автоматизировать и использовать в большем количестве лабораторий;
- его легче читать и интерпретировать.
Недостатки
[ редактировать ]Однако иммунофиксация чувствительна только к иммуноглобулинам и является более дорогостоящей, чем электрофорез белков.
См. также
[ редактировать ]Ссылки
[ редактировать ]- ^ Миллер, Линда Э. (2021). «18. Иммунопролиферативные заболевания: роль лаборатории в оценке иммунопролиферативных заболеваний». У Миллера, Линда Э.; Стивенс, Кристин Доррестейн (ред.). Клиническая иммунология и серология: лабораторная перспектива (5-е изд.). Филадельфия: Ф.А. Дэвис. стр. 358–360. ISBN 978-0-8036-9440-8 .
Источники
[ редактировать ]
Внешние ссылки
[ редактировать ]- Энциклопедия MedlinePlus : 003543 - «Иммунофиксация - сыворотка»
- Энциклопедия MedlinePlus : 003593 - «Иммунофиксация - моча»