Нуклеаза бобов мунг
 | В этой статье есть несколько проблем. Пожалуйста, помогите улучшить его или обсудите эти проблемы на странице обсуждения . ( Узнайте, как и когда удалять эти шаблонные сообщения )
|
Нуклеаза маша ( Nuclease MB ) представляет собой нуклеазу, полученную из ростков маша ( Vigna radiata ), которая поэтапно удаляет нуклеотиды из одноцепочечных молекул ДНК (оцДНК) и используется в биотехнологических приложениях для удаления такой оцДНК из смесь, также содержащая двухцепочечную ДНК (дцДНК). Этот фермент полезен для картирования транскриптов, удаления одноцепочечных областей в гибридах ДНК или одноцепочечных выступов, образуемых ферментами рестрикции , и т. д. Он имеет активность, аналогичную нуклеазе S1 (обе имеют EC 3.1.30.1), но имеет более высокую активность. специфичность для одноцепочечных молекул. [1]
Фермент расщепляет одноцепочечную ДНК или РНК до нуклеозид-5'-монофосфатов, но не расщепляет двухцепочечную ДНК, двухцепочечную РНК или гибриды ДНК/РНК. Нуклеаза бобов мунг катализирует специфическую деградацию одноцепочечной ДНК или РНК и продуцирует моно- и олигонуклеотиды, несущие 5'-P-конец. Нуклеаза бобов мунг обладает строгой одноцепочечной специфичностью к ДНК или РНК.
нуклеаза бобов мунг имеет молекулярную массу 39 кДа По данным SDS-PAGE . Гликопротеин, 29% этой массы составляют сахара. [2] По состоянию на апрель 2019 г. [update], конкретный ген, кодирующий этот белок, неизвестен, и все производство основано на процессе очистки ростков фасоли с 1980 года. [1] Некоторые сведения известны о его структуре: один открытый остаток цистеина и три пары дисульфидных связей. Некоторые сведения известны о его аминокислотном составе . [2]
Требования
[ редактировать ]Нуклеаза бобов мунг требует Zn 2+ . Добавление ЭДТА или ДСН вызывает необратимую инактивацию. Нуклеаза бобов мунг не активна ни при pH ниже 4,6, ни при низкой концентрации соли.
Описание
[ редактировать ]Нуклеаза MB представляет собой специфическую экзо-эндонуклеазу ДНК и РНК , которая разрушает одноцепочечные отростки на концах молекул ДНК и РНК, оставляя тупые, лигируемые концы. Его более высокая одноцепочечная специфичность делает его предпочтительным ферментом для большинства применений, требующих нуклеазы, специфичной к одноцепочечной специфичности.
В отличие от нуклеазы S1 , нуклеаза бобов мунг не расщепляет неповрежденную цепь разорванной дуплексной ДНК.
Его способность распознавать двухцепочечные нуклеиновые кислоты зависит от последовательности оснований.
Он имеет тенденцию расщепляться по ApN и T(U)pN. Он полностью разрушает АрА, но не разрушает G и C. В отличие от нуклеазы S1, он не расщепляет цепь, противоположную той, которая была разорвана.
Нуклеаза бобов мунг катализирует специфическую деградацию одноцепочечной ДНК или РНК и продуцирует моно- и олигонуклеотиды, несущие 5'-P-конец.
Более чем 1000-кратное количество фермента может разложить олигомер на все мононуклеотиды.
Избыток фермента необходим для разрушения двухцепочечной ДНК или гибридов РНК и ДНК-РНК, и в этом случае богатые АТ области избирательно разрушаются.
Этот фермент хорошо работает в сайтах A↓pN, T↓pN, и особенно сайты A↓pN разлагаются на 100%.
Однако разрушить сайт C↓pC, C↓pG сложно.
Экзонуклеаза бобов мунг представляет собой нуклеазу, полученную из бобов мунг, которая поэтапно удаляет нуклеотиды из одноцепочечных молекул ДНК и используется для удаления такой оцДНК из смеси, также содержащей двухцепочечную ДНК (дцДНК).
Определение единицы измерения:
Одна единица нуклеазы бобов мунг превращает 1 мкг термоденатурированной ДНК тимуса теленка в кислоторастворимую форму за 1 минуту при 37 °C в стандартных условиях анализа.
Применение в биотехнологии и биохимических исследованиях
[ редактировать ]- Удаление шпилек во время синтеза кДНК.
- Картирование с высоким разрешением структур концов и экзонов транскриптов РНК (обычно называемое картированием Berk-Sharp или S1) с использованием зондов с внутренней или концевой меткой.
- Модификация или удаление сайта рестрикции путем переваривания одноцепочечных выступающих концов.
- Расщепление несоответствий одной пары оснований в качестве замены нуклеазы CEL 1 в TILLING.
- Однонаправленная делеция большой ДНК (в сочетании с экзонуклеазой III) для создания упорядоченных делеций для секвенирования.
- Удаление 3'- и 5'-удлинений с концов ДНК или РНК.
- Транскрипционное картирование.
- Расщепление петель шпильки.
- Вырезание последовательностей генов, кодирующих геном, из геномной ДНК.
Ссылки
[ редактировать ]- ^ Перейти обратно: а б «БРЕНДА: 3.1.30.1» .
- ^ Перейти обратно: а б Ын, ХМ (1996). «Нуклеазы». Энзимологический праймер для технологии рекомбинантной ДНК . Академическая пресса. стр. 145–232. дои : 10.1016/B978-012243740-3/50006-5 . ISBN 978-0-12-243740-3 .
Дальнейшее чтение
[ редактировать ]- Многочисленная серия статей Ковальского и др. 1970-х годов: Ковальски, Дэвид; Кроекер, Уоррен Д.; Ласковский, М. (1976). «Нуклеаза маша I. 6. Физические, химические и каталитические свойства». Биохимия . 15 (20): 4457–4463. дои : 10.1021/bi00665a019 . ПМИД 9973 .
