Тест Кумбса

Тест Кумбса
Тест Кумбса
МеШ	D003298
МедлайнПлюс	003344

Прямой и непрямой тест Кумбса , также известный как антиглобулиновый тест ( АГТ ), представляет собой анализ крови, используемый в иммуногематологии . Прямой тест Кумбса обнаруживает антитела, прилипшие к поверхности эритроцитов. ^{[ 1 ]} Поскольку эти антитела иногда разрушают эритроциты, они могут вызвать анемию ; этот тест может помочь прояснить состояние. Непрямой тест Кумбса выявляет антитела, свободно плавающие в крови. ^{[ 1 ]} Эти антитела могут действовать против определенных эритроцитов; тест можно проводить для диагностики реакций на переливание крови . ^{[ 1 ]}

Прямой тест Кумбса используется для выявления аутоиммунной гемолитической анемии — состояния, при котором иммунная система разрушает эритроциты , что приводит к анемии. Прямой тест Кумбса используется для обнаружения антител или белков комплемента, прикрепленных к поверхности эритроцитов. Для проведения теста берется образец крови, эритроциты промываются (удаляя плазму пациента и несвязанные антитела из эритроцитов), а затем инкубируются с античеловеческим глобулином («реактив Кумбса»). Если эритроциты затем агглютинируют , тест положительный, что является визуальным признаком того, что антитела или белки комплемента связываются с поверхностью эритроцитов и могут вызывать разрушение этих клеток.

Непрямой тест Кумбса используется при пренатальном обследовании беременных и при обследовании перед переливанием крови. Тест обнаруживает антитела против чужеродных эритроцитов. В этом случае сыворотку извлекают из образца крови, взятого у пациента. Сыворотку инкубируют с чужеродными эритроцитами известной антигенности . Наконец, добавляется античеловеческий глобулин. При возникновении агглютинации непрямая реакция Кумбса положительна. ^{[ 2 ]}

Механизм

Два теста Кумбса основаны на связывании античеловеческих антител с человеческими антителами, обычно IgG или IgM . Эти античеловеческие антитела продуцируются плазматическими клетками животных, отличных от человека, после иммунизации их человеческой плазмой . Кроме того, эти античеловеческие антитела также будут связываться с человеческими антителами, которые могут фиксироваться на антигенах на поверхности эритроцитов (эритроцитов). В соответствующих условиях пробирки это может привести к агглютинации эритроцитов и позволить визуализировать образующиеся сгустки эритроцитов. Если наблюдается слипание, проба Кумбса положительна; в противном случае тест Кумбса отрицательный. ^{[ 3 ]}

Обычное клиническое применение теста Кумбса включает подготовку крови к переливанию при перекрестном сопоставлении , определение атипичных антител в плазме крови беременных дородовой женщин в рамках помощи и обнаружение антител для диагностики иммуноопосредованных гемолитических анемий . ^{[ 4 ]}

Тесты Кумбса проводятся с использованием эритроцитов или сыворотки (прямой или непрямой соответственно) из образцов венозной цельной крови, взятых у пациентов путем венепункции . Венозная кровь доставляется в лабораторию (или банк крови), где обученный научно-технический персонал проводит тесты Кумбса. Клиническую значимость результата оценивает врач , запросивший тест Кумбса, возможно, с помощью лабораторного гематолога . ^{[ нужна ссылка ]}

Прямой тест Кумбса

Прямой тест Кумбса, также называемый прямым антиглобулиновым тестом (DAT), используется для определения того, системы комплемента связались ли антитела или факторы эритроцитов . с поверхностными антигенами ^{[ 5 ]} DAT не требуется для тестирования перед переливанием крови. ^{[ 6 ]} но может проводиться в некоторых лабораториях. ^{[ нужны разъяснения ]} Перед переливанием крови непрямую часто проводят пробу Кумбса.

Использование

Прямой тест Кумбса применяется в клинике при подозрении на иммуноопосредованную гемолитическую анемию (разрушение эритроцитов, опосредованное антителами). пациента Положительный тест Кумбса указывает на то, что иммунный механизм атакует эритроциты . Этот механизм может быть аутоиммунным , аллоиммунным или иммуноопосредованным механизмом, индуцированным лекарственными средствами. ^{[ 3 ]}

Примеры аллоиммунного гемолиза

Гемолитическая болезнь новорожденных (также известная как ГБН или эритробластоз плода)
- Гемолитическая болезнь новорожденных Rh D (также известная как резус-болезнь)
- Гемолитическая болезнь новорожденных по системе АВО (прямая проба Кумбса может быть лишь слабоположительной)
- Анти-Келл гемолитическая болезнь новорожденных
- Резус-с гемолитическая болезнь новорожденных.
- Rh E гемолитическая болезнь новорожденных
- Несовместимость по другим группам крови (RhC, Rhe, Кидд, Даффи, Льюис, MN, P и другие)
Аллоиммунные гемолитические трансфузионные реакции

Примеры аутоиммунного гемолиза/иммуногемолитического гемолиза

Аутоиммунная гемолитическая анемия с теплыми антителами
- идиопатический
- Системная красная волчанка
- Синдром Эванса (антитела к тромбоцитам и гемолитические антитела)
Иммуногемолитическая анемия с холодовыми антителами

Лекарственный иммуноопосредованный гемолиз

Метилдопа (IgG-опосредованная гиперчувствительность II типа)
Пенициллин (высокая доза)
Хинидин (IgM-опосредованная активация классического пути комплемента и комплекса мембранной атаки, MAC)

( Устройство памяти , позволяющее запомнить, что DAT проверяет эритроциты и используется для проверки младенцев на гемолитическую болезнь новорожденного : R h болезнь  ; R = эритроциты, D = DAT.)

Лаборатория

пациента Эритроциты пациента промывают (удаляя собственную сыворотку ), а затем центрифугируют с античеловеческим глобулином (также известным как реагент Кумбса). Если иммуноглобулин или факторы комплемента были зафиксированы на поверхности эритроцитов in vitro , античеловеческий глобулин агглютинирует эритроциты, и прямой тест Кумбса будет положительным. (Визуальное изображение положительного прямого теста Кумбса показано в верхней половине схемы). ^{[ нужна ссылка ]}

Непрямой тест Кумбса

Непрямой тест Кумбса, также называемый непрямым антиглобулиновым тестом (IAT), используется для обнаружения in vitro реакций антитело-антиген . Он используется для обнаружения очень низких концентраций антител, присутствующих в плазме/сыворотке пациента перед переливанием крови. В дородовом уходе ИАТ используется для проверки беременных женщин на антитела, которые могут вызвать гемолитическую болезнь новорожденного . IAT также можно использовать для тестирования совместимости , идентификации антител, фенотипирования эритроцитов и исследований титрования. ^{[ нужна ссылка ]}

Использование

Подготовка к переливанию крови

Непрямой тест Кумбса используется для выявления антител при подготовке крови для переливания . Кровь донора и реципиента должна быть совместима по АВО и Rh D. Донорскую кровь для переливания также проверяют на инфекции в отдельных процессах. ^{[ нужна ссылка ]}

Скрининг антител

Образец крови реципиента и образец крови из каждой единицы донорской крови проверяются на наличие антител с помощью непрямого теста Кумбса. Каждый образец инкубируется против широкого спектра эритроцитов, которые вместе демонстрируют полный спектр поверхностных антигенов (т.е. групп крови ).

Перекрестное сопоставление

Непрямой тест Кумбса используется для проверки образца сыворотки реципиента на наличие антител против образца эритроцитов донора . Иногда это называют перекрестным совпадением крови.

Антенатальный скрининг на антитела

Непрямой тест Кумбса используется для скрининга беременных женщин на наличие IgG антител , которые могут проникнуть через плаценту в кровь плода и вызвать гемолитическую болезнь новорожденного . ^{[ нужна ссылка ]}

Лабораторный метод

IAT — это двухэтапный тест. (Перекрестное совпадение показано визуально в нижней половине схемы как пример непрямого теста Кумбса). ^{[ нужна ссылка ]}

Первый этап

Непациентские, промытые эритроциты (эритроциты) с известными антигенами инкубируют с сывороткой пациента, содержащей неизвестное содержание антител. Если сыворотка содержит антитела к антигенам на поверхности эритроцитов, антитела будут связываться с поверхностью эритроцитов. ^{[ нужна ссылка ]}

Второй этап

Эритроциты три или четыре раза промывают изотоническим солевым раствором, а затем инкубируют с античеловеческим глобулином. Если антитела связались с поверхностными антигенами эритроцитов на первом этапе, эритроциты будут агглютинировать при инкубации с античеловеческим глобулином (также известным как реагент Кумбса) на этом этапе, и непрямой тест Кумбса будет положительным.

Титрование

Разбавив сыворотку, содержащую антитела, можно определить количество антител в сыворотке. Это делается путем выполнения серийных разведений сыворотки и определения максимального разведения тестируемой сыворотки, которое способно вызвать агглютинацию соответствующих эритроцитов. ^{[ нужна ссылка ]}

Реактив Кумбса

Реагент Кумбса (также известный как антиглобулин Кумбса или античеловеческий глобулин ) используется как в прямом тесте Кумбса, так и в непрямом тесте Кумбса. Реагент Кумбса – античеловеческий глобулин . Его получают путем инъекции животным человеческого глобулина, который вырабатывает поликлональные антитела, специфичные к иммуноглобулинам человека и факторам системы комплемента человека. более специфические реагенты Кумбса или моноклональные антитела . Можно использовать ^{[ нужна ссылка ]}

Улучшение медиа

прочно IgM и IgG Антитела связываются с комплементарными им антигенами. Антитела IgG наиболее реактивны при 37°C. Антитела IgM легко обнаруживаются в физиологическом растворе при комнатной температуре , поскольку антитела IgM способны образовывать мостики между эритроцитами из-за их большого размера, эффективно создавая то, что называется агглютинацией . Антитела IgG меньше по размеру, и им требуется помощь, чтобы образовать достаточно хорошие мостики для формирования реакции визуальной агглютинации . Реагенты, используемые для усиления обнаружения IgG, называются потенциаторами. Эритроциты имеют суммарный отрицательный заряд, называемый дзета-потенциалом, который вызывает у них естественное отталкивание друг к другу. Потенциаторы снижают зета-потенциал мембран эритроцитов. Общие потенциаторы включают раствор с низкой ионной силой (LISS), альбумин , полиэтиленгликоль (ПЭГ) и протеолитические ферменты .

История

Тест Кумбса был впервые описан в 1945 году кембриджскими иммунологами Робином Кумбсом (в честь которого он назван), Артуром Мурантом и Робом Рейсом . ^{[ 8 ]} Исторически это делалось в пробирках . Сегодня это обычно делается с использованием автоматизированной твердофазной или гелевой технологии.

Ссылки

^ Jump up to: ^а ^б ^с «Тест Кумбса: Медицинская энциклопедия MedlinePlus» . medlineplus.gov . Проверено 06 мая 2019 г.
^ Ф. Розен и Р. Геха, Тематические исследования в иммунологии, 4-е изд. , Гарленд Сайенс, стр.173.
^ Jump up to: ^а ^б Зантек, Николь Д.; Копселл, Скотт А. (12 апреля 2012 г.). «Прямой антиглобулиновый тест: важный шаг в оценке гемолиза» . Американский журнал гематологии . 87 (7): 707–709. дои : 10.1002/ajh.23218 . ПМИД 22566278 .
^ Тайсс, Сэмюэл Р. (2023). Тест Кумбса . ООО «СтатПерлс Паблишинг». ПМИД 31613487 .
^ Рид М.Э., Ломас-Фрэнсис С. (23 декабря 2015 г.). «Глава 136: Антигены и антитела эритроцитов». Гематология Уильямса (9-е изд.). Нью-Йорк: МакГроу-Хилл. ISBN 9780071833004 . OCLC 913870019 .
^ «13.3: Тестирование перед переливанием крови» . Объединенный профессиональный консультативный комитет Службы переливания крови и трансплантации тканей Соединенного Королевства (Великобритания). 4 октября 2023 г.
^ Изображение Микаэля Хэггстрема, доктора медицинских наук. Источник условий: Джо Чаффин (27 февраля 2017 г.). «028: Кто DAT? со Сью Джонсон» . Цитирование: С. Фельдман и Дж. О'Коннор.
^ Кумбс, Р.Р.; Мурант, А.Е.; Гонка, Р.Р. (1945). «Новый тест для выявления слабых и неполных резус-агглютининов» . Британский журнал экспериментальной патологии . 26 (4): 255–66. ПМК 2065689 . ПМИД 21006651 .

Внешние ссылки

Тест Кумбса — Medlineplus.org.
Лекарственные средства, вызывающие гемолитическую анемию – Руководство Merck.
Тест Кумбса + в Национальной медицинской библиотеке США по медицинским предметным рубрикам (MeSH)

[Medline_3344-1] Jump up to: ^а ^б ^с «Тест Кумбса: Медицинская энциклопедия MedlinePlus» . medlineplus.gov . Проверено 06 мая 2019 г.

[2] Ф. Розен и Р. Геха, Тематические исследования в иммунологии, 4-е изд. , Гарленд Сайенс, стр.173.

[Zantek_et_al._2012-3] Jump up to: ^а ^б Зантек, Николь Д.; Копселл, Скотт А. (12 апреля 2012 г.). «Прямой антиглобулиновый тест: важный шаг в оценке гемолиза» . Американский журнал гематологии . 87 (7): 707–709. дои : 10.1002/ajh.23218 . ПМИД 22566278 .

[Theis_and_Hasmhmi_2020-4] Тайсс, Сэмюэл Р. (2023). Тест Кумбса . ООО «СтатПерлс Паблишинг». ПМИД 31613487 .

[5] Рид М.Э., Ломас-Фрэнсис С. (23 декабря 2015 г.). «Глава 136: Антигены и антитела эритроцитов». Гематология Уильямса (9-е изд.). Нью-Йорк: МакГроу-Хилл. ISBN 9780071833004 . OCLC 913870019 .

[JPAC_Guidelines-6] «13.3: Тестирование перед переливанием крови» . Объединенный профессиональный консультативный комитет Службы переливания крови и трансплантации тканей Соединенного Королевства (Великобритания). 4 октября 2023 г.

[7] Изображение Микаэля Хэггстрема, доктора медицинских наук. Источник условий: Джо Чаффин (27 февраля 2017 г.). «028: Кто DAT? со Сью Джонсон» . Цитирование: С. Фельдман и Дж. О'Коннор.

[8] Кумбс, Р.Р.; Мурант, А.Е.; Гонка, Р.Р. (1945). «Новый тест для выявления слабых и неполных резус-агглютининов» . Британский журнал экспериментальной патологии . 26 (4): 255–66. ПМК 2065689 . ПМИД 21006651 .

[ 1 ]

[ 2 ]

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

v т и Переливание крови и трансфузиологическая медицина
Blood products	Whole blood Platelets Platelet transfusion Red blood cells Plasma Fresh frozen plasma PF24 Cryoprecipitate Cryosupernatant White blood cells Granulocyte transfusion Blood substitutes
General concepts	Blood bank Blood donation Blood management International Society of Blood Transfusion ISBT 128
Methods	Apheresis (plasmapheresis, plateletpheresis, leukapheresis) Exchange transfusion Intraoperative blood salvage
Tests	Blood compatibility testing Cross-matching Coombs test Kleihauer–Betke test Antibody elution Monocyte monolayer assay
Transfusion reactions and adverse effects	Transfusion hemosiderosis Transfusion related acute lung injury Transfusion associated circulatory overload Transfusion-associated graft versus host disease Febrile non-hemolytic transfusion reaction Hemolytic reaction acute delayed Serum sickness Transfusion transmitted infection
Blood group systems	Blood types ABO Secretor status Augustine CD59 Chido-Rodgers Colton Cromer Diego Dombrock Duffy Er FORS Gerbich GIL GLOB Hh Ii Indian JR JMH KANNO Kell (Xk) Kidd Knops Lan Lewis Lutheran LW MNS OK P1PK Raph Rh and RHAG Scianna Sid T-Tn Vel Xg Yt Other

v т и Медицинские тесты, используемые в иммунологии ( CPT 86000–86849)
Immunoprecipitation	Chromatin immunoprecipitation Immunodiffusion Ouchterlony double immunodiffusion Radial immunodiffusion Immunoelectrophoresis Counterimmunoelectrophoresis
Immunoassay	Chemiluminescent immunoassay ELISA ELISpot Enzyme multiplied immunoassay technique RAST test Radioimmunoassay Radiobinding assay Immunofluorescence
Agglutination	Hemagglutination/Hemagglutinin Coombs test Latex fixation test
Other	Diagnostic immunology Nephelometry Complement fixation test Immunocytochemistry Immunohistochemistry Direct fluorescent antibody Epitope mapping Skin allergy test Patch test Total complement activity MELISA