✖


Jump to content

Расширенный генетический код

(Перенаправлено из нестандартных аминокислот )
Не должно быть перекрестной помехи между новой парой тРНК/синтазы и существующими молекулами тРНК/синтазы, только с рибосомами

Расширенный генетический код представляет собой искусственно модифицированный генетический код , в котором один или несколько специфических кодонов были повторно распределены , чтобы кодировать аминокислоту , которая не входит в число 22 распространенных белкогенных аминогенных аминогенных кислот . [ 1 ]

Ключевыми предпосылками для расширения генетического кода являются:

  • нестандартная аминокислота для кодирования,
  • неиспользованный кодон для принятия,
  • тРНК , которая распознает этот кодон, и
  • ТНК -синтетаза , которая распознает только эту тРНК и только нестандартную аминокислоту.

Расширение генетического кода - это область исследований синтетической биологии , прикладной биологической дисциплины, целью которой является разработка живых систем для полезных целей. Расширение генетического кода обогащает репертуар полезных инструментов, доступных для науки.

В мае 2019 года исследователи, предпринятые вехой, сообщили о создании новой синтетической (возможно, искусственной ) формы жизнеспособной жизни , варианта бактерий Escherichia coli , путем уменьшения естественного числа 64 кодонов в бактериальном геноме до 61 кодонов. (Устранение двух из шести кодонов, кодирующих серин и один из трех стоп -кодонов ), из которых 59 использовались для кодирования 20 аминокислот . [ 2 ] [ 3 ]

Введение

[ редактировать ]
Для словаря см. Глоссарий терминов экспрессии генов . Нетехническое введение в тему см. Введение в генетику .

Следует отметить, что генетический код для всех организмов в основном одинаковы, так что все живые существа используют один и тот же «генетический язык». [ 4 ] В целом, введение новых функциональных неестественных аминокислот в белки живых клеток разбивает универсальность генетического языка, что в идеале приводит к альтернативным формам жизни. [ 5 ] Белки вырабатываются благодаря молекулам трансляционной системы, которые декодируют сообщения РНК в серию аминокислот. Перевод РНК генетической информации, содержащейся в мессенджера (мРНК) в белок, катализируется рибосомами . Передача РНК (тРНК) используется в качестве ключей для декодирования мРНК в кодируемый полипептид . ТРНК распознает три специфического нуклеотидного кодона в мРНК с комплементарной последовательности, называемой антикодоном на одной из его петель. Каждый трехнуклеотидный кодон переводится в одну из двадцати природных аминокислот. [ 6 ] Существует по крайней мере одна тРНК для любого кодона, а иногда и несколько кодовых кодов для одной и той же аминокислоты. Многие тРНК совместимы с несколькими кодонами. Фермент, называемый аминоацил -синтетазой, ковалентно прикрепляет аминокислоту к соответствующей тРНК. [ 7 ] Большинство клеток имеют различную синтетазу для каждой аминокислоты (20 или более синтетаз). С другой стороны, некоторые бактерии имеют менее 20 аминоацил -синтетаз тРНК и вводят «недостающие» аминокислоты (ы) путем модификации структурно связанной аминокислоты аминотрансферазой ферментом. [ 8 ] Функцией, используемой в расширении генетического кода, является тот факт, что аминоацил -синтетаза часто не распознает антикодон, а другая часть тРНК, что означает, что если бы антикодон будет мутировано, кодирование этой аминокислоты изменится на новый кодон. В рибосоме информация в мРНК транслируется в специфическую аминокислоту, когда кодон мРНК соответствует комплементарному антикодону тРНК, а прикрепленная аминокислота добавляется в растущую полипептидную цепь. Когда он высвобождается из рибосомы, полипептидная цепь складывается в функционирующий белок. [ 7 ]

Чтобы включить новую аминокислоту в генетический код, необходимы несколько изменений. Во -первых, для успешного перевода новой аминокислоты, кодон, которому назначается новая аминокислота, не может уже кодировать для одной из 20 природных аминокислот. бессмысленный кодон ( стоп-кодон ) или кодон с четырьмя базой. Обычно используются [ 6 ] Во -вторых, требуется новая пара тРНК и аминоацил -синтетазы, они называются ортогональным набором. Ортогональный набор не должен переоборудовать с эндогенными наборами тРНК и синтетазы, в то же время функционально совместимый с рибосомой и другими компонентами трансляционного аппарата. Активный сайт синтетазы модифицируется, чтобы принять только новую аминокислоту. Чаще всего, библиотека мутантных синтетаз подвергается скринингу на одну, которая заряжает тРНК с желаемой аминокислотой. Синтетаза также модифицируется, чтобы распознать только ортогональную тРНК. [ 6 ] Пара тРНК -синтетазы часто спроектирована в других бактериях или эукариотических клетках. [ 9 ]

В этой области исследований 20 кодируемых протеиногенных аминокислот называются стандартными аминокислотами или альтернативно как натуральные или канонические аминокислоты, в то время как добавленные аминокислоты называются нестандартными аминокислотами (НБАА) или неестественными аминокислотами ( ; UAAS ​аминокислоты.

Нестандартные аминокислоты

[ редактировать ]
Тирозин и некоторые синтетические варианты тирозина, используемые для мечения белка. Различные варианты тирозина были синтезированы и могут быть включены в белки с использованием расширенного генетического кода. Варианты, изображенные здесь, используются для химического или фотохимического связывания. Это означает, что включаемый АА, специально реагирует либо с конкретной химической группой (такой как гидразиды, амины, азиды или тиолы), либо может быть активирована ультрафиолетовым активированием с другими АА.

Первым элементом системы является аминокислота, которая добавляется в генетический код определенного штамма организма.

Более 71 различных АНС были добавлены в различные штаммы клеток кишечной палочки , дрожжей или млекопитающих. [ 10 ] Из-за технических деталей (более легкий химический синтез НБАА, меньше перекрестных помех и более легкой эволюции аминоацил-тРНК-синтазы), НБАА, как правило, больше, чем стандартные аминокислоты и чаще всего имеют фенилаланиновое ядро, но с большим разнообразием различных заместителей. Они позволяют большой репертуар новых функций, таких как маркировка (см. Рисунок), как флуоресцентный репортер ( например, дансилаланин) [ 11 ] или для получения трансляционных белков в кишечной палочке с эукариотическими посттрансляционными модификациями ( например , фосфосерин, фосфотреонин и фосфотирозин). [ 10 ] [ 12 ]

Работа -основатель сообщил Рольф Фюртер, который в одиночку использовал дрожжевые тРНК Пэ /Phers пара для включения пи -одофенилаланина в E. coli . [ 13 ]

Неестественные аминокислоты, включенные в белки, включают в себя тяжелые аминокислоты, содержащие атом, для облегчения определенных рентгеновских кристаллографических исследований; аминокислоты с новыми стерическими/упаковочными и электронными свойствами; Аминокислоты PhotoCrossling Amino Acost, которые можно использовать для исследования взаимодействия белкового белка in vitro или in vivo; Кето, ацетилен, азид и боронатсодержащие аминокислоты, которые можно использовать для избирательного введения большого количества биофизических зондов, метров и новых химических функциональных групп в белки in vitro или in vivo ; окислительно -восстановительные активные аминокислоты для исследования и модуляции переноса электрона; Фотооценные и фотоизомеризуемые аминокислоты для фоторегуляции биологических процессов; Связывание металлов аминокислоты для катализа и чувства ионов металлов; аминокислоты, которые содержат флуоресцентные или инфракрасные боковые цепи, для структуры и динамики зонда; α -гидрокси кислоты и D -аминокислоты в качестве зондов конформации основной цепи и взаимодействия водородных связей; и сульфатированные аминокислоты и миметика фосфорилированных аминокислот в качестве зондов посттрансляционных модификаций. [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ]

Доступность нестандартной аминокислоты требует, чтобы организм либо импортировал его со среды, либо биосинтезировал ее. В первом случае неестественная аминокислота сначала синтезируется химически в своей оптически чистой L -форме. [ 17 ] Затем он добавляется в среду роста клетки. [ 10 ] Библиотека соединений обычно проверяется на использование при включении новой аминокислоты, но это не всегда необходимо, например, различные транспортные системы могут обрабатывать неестественные аминокислоты с аполярными боковыми цепи. Во втором случае необходимо разработать путь биосинтеза, например, штамм E. coli , который биосинтезирует новую аминокислоту (P-аминофенилаланин) из основных источников углерода и включает ее в свой генетический код. [ 16 ] [ 18 ] [ 19 ] Другой пример: производство фосфосерина, естественного метаболита и, следовательно, требует изменения потока пути для увеличения его производства. [ 12 ]

Задание кодона

[ редактировать ]

Другим элементом системы является кодон, чтобы выделить новую аминокислоту. [ Цитация необходима ]

Основная проблема для расширения генетического кода заключается в том, что нет свободных кодонов. Генетический код имеет неполученную компоновку, которая показывает речьими признаки различных этапов изначальной эволюции, однако с тех пор он заморозился на место и является почти универсально консервативным. [ 20 ] Тем не менее, некоторые кодоны реже, чем другие. Фактически, в E. coli (и во всех организмах) использование кодона не является равным, но представляет несколько редких кодонов (см. Таблицу), самым редким является янтарный кодон (UAG).

Янтарный кодон подавление

[ редактировать ]

Возможность переназначения кодонов была реализована Normanly et al. В 1990 году, когда жизнеспособный мутантный штамм E. coli UAG («Amber») прочитал через кодон . [ 22 ] Это было возможно благодаря редкости этого кодона и тому факту, что только фактор выпуска 1 делает перевод янтарного кодона. Позже, в лаборатории Schultz , Trnatyr/тирозил-тРНК-синтетаза (TYRR) из Methanococcus jannaschii , archaebacterium, [ 6 ] был использован для введения тирозина вместо остановки, значение по умолчанию янтарного кодона. [ 23 ] Это было возможно из -за различий между эндогенными бактериальными синтезами и ортологичной архаальной синтазой, которая не распознает друг друга. Впоследствии группа эволюционировала ортологическую пару тРНК/синтазы для использования нестандартного аминокислотного о -метилтирозина. [ 6 ] За этим последовал более крупный нафтилаланин [ 24 ] и фототоксингирующий бензоилфенилаланин, [ 25 ] что доказало потенциальную полезность системы.

Янтарный кодон является наименее используемым кодоном в Escherichia coli , но угон его приводит к существенной потере пригодности. На самом деле одно исследование показало, что было по меньшей мере 83 пептида, в основном затронутые чтением [ 26 ] Кроме того, маркировка была неполной. Как следствие, было сделано несколько штаммов, чтобы снизить стоимость пригодности, включая удаление всех янтарных кодонов из генома. У большинства штаммов E. coli K-12 (а именно Escherichia coli (молекулярная биология) для пейдс-родословных) существует 314 стоп-кодонов UAG. Следовательно, в замену их замены гигантского количества работы. Один из подходов, впервые подготовленных группой профессора Джорджа Черч из Гарварда, был назван магом в клетке: это полагалось на мультиплексное преобразование и последующую рекомбинацию деформации для удаления всех кодонов UAG - последняя часть представляла точку остановки в первой статье, [ 27 ] но был преодолен. Это привело к штамм E. coli C321.ΔA, в котором отсутствуют все кодоны UAG и RF1. [ 28 ] Это позволило провести эксперимент с этим штаммом, чтобы сделать его «зависимым» к аминокислотному бифенилаланину, путем развития нескольких ключевых ферментов, требующих его структурного производства, поэтому ставит его расширенный генетический код в положительный отбор. [ 29 ]

Редкий смысл кодон переназначение

[ редактировать ]

В дополнение к янтарному кодону, для использования также рассматривались кодоны редкого смысла. Кодовые коды AGG для аргинина, но штамм был успешно модифицирован, чтобы сделать его код для 6- n- Malyloxycarbonyl-Lysine. [ 30 ] Другим кандидатом является кодон AUA, который является необычным в том смысле, что его соответствующая тРНК должна дифференцироваться от AUG, что кодирует метионин (изначально, изолецин, следовательно, его местоположение). Для этого у AUA есть специальная база, лизидин. Удаление синтазы ( TILS ) была возможна благодаря замене нативной тРНК на состав Mycoplasma Mobile (без лизидина). Уменьшенная физическая форма является первым шагом к давлению на штамм, чтобы потерять все экземпляры AUA, что позволяет использовать его для расширения генетического кода. [ 31 ]

Штамм E. coli Syn61 - это вариант, в котором все использование кодонов TCG (Ser), TCA (Ser), TAG (Stop) удаляются с использованием синтетического генома (см. § Recoded Synthetic Genome ниже). Удаляя ненужные гены тРНК и RF1, был продуцирован деформация Syn61Δ3. Затем три освобожденных кодона становятся доступными для добавления трех специальных остатков, как показано в штамме «Syn61Δ3 (EV4)». [ 32 ]

Четыре базовых (четырехместные) кодоны

[ редактировать ]

В то время как триплетные кодоны являются основой генетического кода в природе, запрограммированный +1 FrameShift является естественным процессом, который позволяет использовать четырехнуклеотидную последовательность (кодон четырехлета) для кодирования аминокислоты. [ 33 ] Недавние разработки в области генетического кода также показали, что четырехлетный кодон может быть использован для кодирования нестандартных аминокислот в экспериментальных условиях. [ 34 ] [ 35 ] [ 36 ] Это позволило одновременно использовать две неестественные аминокислоты: P -азидофенилаланин (PASF) и N6-[(2-пропипинилокси) карбонил] лизин (CAK), которые сшивают друг с другом с помощью циклического цикла Huisgen . [ 37 ] Четырехдельное декодирование у нерекодированных штаммов дикого типа очень неэффективно. [ 37 ] Это связано с тем фактом, что взаимодействие между инженерными тРНК с тройными комплексами или другими компонентами трансляции не так выгодно и сильнее, как в элементах эндогенных трансляции клеток. [ 38 ] Эта проблема может быть преодолена с помощью специально инженерной и развивающейся тРНК, которая может декодировать четырехлетные кодоны у нерекодированных штаммов. [ 39 ] Таким образом могут быть получены до 4 различных четырех четырех парах ортогональных тРНК/тРНК -синтетазы. [ 40 ] Подход к декодированию кодона в четыре раза также был применен для построения вакцины против ВИЧ-1. [ 41 ]

ТРНА/Синтетаза Пара

[ редактировать ]

Другим ключевым элементом является пара тРНК/синтетазы.

Ортологичный набор синтетазы и тРНК может быть мутирован и скринин через направленную эволюцию, чтобы зарядить тРНК другой, даже новой аминокислотой. Мутации в плазмиду, содержащую пару, могут быть введены с помощью ошибки ПЦР или с помощью вырожденных праймеров для активного сайта синтетазы. Выбор включает в себя множество раундов двухэтапного процесса, где плазмида переносится в клетки, экспрессирующие хлорамфеникол ацетилтрансферазу с преждевременным янтарным кодоном. В присутствии токсического хлорамфеникола и не натуральной аминокислоты выжившие клетки будут переопределять янтарный кодон, используя ортогональную тРНК, аминоацилированную либо стандартными аминокислотами, либо не натуральным. Чтобы удалить первое, плазмида вставляется в клетки с геном барназы (токсичным) с преждевременным янтарным кодоном, но без натуральной аминокислоты, удаляя все ортогональные синтезы, которые специально не распознают не натуральную аминокислоту. [ 6 ] В дополнение к перекодированию тРНК к другому кодону, их можно мутировать, чтобы распознать четырех базовый кодон, позволяя дополнительные бесплатные параметры кодирования. [ 42 ] Неснатуральная аминокислота, в результате, вводит различные физико-химические и биологические свойства, чтобы использовать в качестве инструмента для изучения структуры и функции белка или для создания нового или усиленного белка для практических целей.

Было разработано несколько методов выбора синтетазы, которая принимает только не натуральную аминокислоту. Одним из которых является использование комбинации положительного и отрицательного выбора

Ортогональные наборы в модельных организмах

[ редактировать ]

Ортогональные пары синтетазы и тРНК, которые работают для одного организма, могут не работать для другого, поскольку синтетаза может неправильно аминоацилат эндогенные тРНК или тРНК быть неверно-аминоаацилировалась эндогенной синтетазой. В результате наборы, созданные на сегодняшний день, различаются между организмами.

Пара Источник Э. Коли Дрожжи Млекопитающие Примечания и ссылки
трна Тир -Tyrrs Methanococcus jannaschii Да Нет Нет
трна Свет –Lysrs Pyrococcus horikoshii Да Нет Нет [ 43 ]
трна Глю - Гульны Pyrococcus horikoshii Да Нет Нет [ 44 ]
трна Лея -Их TRNA: Mutant Halobacterium sp.
RS: Methanobacterium thermoautotrophicum 		Да Нет Нет [ 45 ]
трна Янтарь -Пилрс Methanosarcina Barkeri и Methanosarcina Mazei Да Да Да [ 46 ]
трна Янтарь -3 -йодотирозил -rs RS: вариант Methanocaldococcus jannaschii aars Да Нет Нет [ 47 ]
трна Tyr/Amber -Tyrrs Они продемонстрировали холод Нет Да Нет Сообщается в 2003 году, [ 48 ] упомянуто в 2014 году их [ 49 ]
трна i Met -Glnrs ТРНА: ЧЕЛОВЕК
RS: Escherichia coli 		Нет Да Нет Переключился на янтарный кодон. [ 50 ]
трна я fmet -Tyrrs ТНК: Escherichia coli
RS: S. cerevisiae 		Да Да Нет Переключился на янтарный кодон. [ 50 ]
трна Leu/Amber -Их Они продемонстрировали холод Нет Да Да Сообщается в 2004 году и мутировал для 2 -аминооктановой кислоты, о -метилдирозина и о -нитробензилцистеина. [ 49 ] Эволюционировал в дрожжах для 4,5-диметокси-2-нитробензил-серин, [ 51 ] [ 52 ] Протестировано у мышей и клеток млекопитающих с фоточувствительным 4,5-диметокси-2-нитробензил-цистеином. [ 53 ] [ 54 ]
трна Тир -Tyrrs Bacillus stearothermophilus Нет Нет Да [ 9 ]
трна TRP -Trprs Bacillus subtilis , RS модифицирован Нет Нет Да Новый AA-5-OH TRP. [ 55 ]

В 2017 году сообщалось о мышью, спроектированной с расширенным генетическим кодом, которая может производить белки с неестественными аминокислотами. [ 56 ]

Ортогональные рибосомы

[ редактировать ]

Подобно ортогональным тРНК и аминоацил -синтетазам (AARS), ортогональные рибосомы были разработаны для работы параллельно натуральным рибосомам. Ортогональные рибосомы в идеале используют различные транскрипты мРНК, чем их естественные аналоги, и, в конечном итоге, также должны опираться на отдельный пул тРНК. Это должно облегчить некоторую потерю пригодности, которая в настоящее время все еще возникает из -за таких методов, как подавление янтарного кодона. Кроме того, ортогональные рибосомы могут быть мутированы и оптимизированы для определенных задач, таких как распознавание четырехлетных кодонов. Такая оптимизация невозможна или не в значительной степени невыгодной для натуральных рибосомов.

О-рибосома

[ редактировать ]

В 2005 году были опубликованы три набора рибосом, которые не распознавали естественную мРНК, но вместо этого переводили отдельный пул ортогональной мРНК (O-мРНК). [ 57 ] Это было достигнуто путем изменения последовательности распознавания мРНК, последовательности сияния-далгарно и соответствующей последовательности распознавания в 16S рРНК рибосомов, так называемой анти-син-далгарно-последовательности. Таким образом, спаривание оснований, которое обычно теряется, если какая -либо последовательность мутирует, остается доступным. Однако мутации в 16S рРНК не ограничивались явно основательными нуклеотидами классической последовательности анти-син-далгарно.

Рибо-х

[ редактировать ]

В 2007 году группа Джейсона В. Чин представила ортогональную рибосому, которая была оптимизирована для подавления янтарного кодона. [ 58 ] 16S рРНК была мутирована таким образом, что она связала фактор высвобождения RF1 менее сильно, чем естественная рибосома. Эта рибосома не устраняла проблему пониженной клеточной пригодности, вызванной подавленными стоп -кодонами в природных белках. Однако благодаря улучшению специфичности он значительно повысил доходность правильного синтезированного белка -мишени (от ~ 20% до> 60% для одного янтарного кодона, который должен быть подавлен и от <1% до> 20% для двух амперных кодонов).

Рибо-Q.

[ редактировать ]

В 2010 году группа Джейсона У. Чин представила еще одну оптимизированную версию ортогональной рибосомы. RIBO-Q представляет собой 16S рРНК, оптимизированную для распознавания ТРНК, у которых есть четырехместные антикодоны, чтобы распознавать четырехлетные кодоны, а не естественные триплетные кодоны. [ 37 ] При таком подходе количество возможных кодонов возрастает с 64 до 256. Даже учет различных стоп -кодонов, более 200 различных аминокислот могут быть потенциально кодироваться таким образом.

Рибосома сшивание

[ редактировать ]

Ортогональные рибосомы, описанные прежде всего, фокусируются на оптимизации 16S рРНК. До настоящего времени эта оптимизированная 16S рРНК была объединена с естественными большими субъединицами для образования ортогональных рибосомов. Если 23S рРНК, основной РНК-компонент большой рибосомной субъединицы, также должен быть оптимизирован, должно быть уверено, что в сборке ортогональных и натуральных рибосомов не было (см. Figurex B). Чтобы гарантировать, что оптимизированная 23S рРНК будет образоваться только в рибосомы с оптимизированной 16S рРНК, две RRNA были объединены в одну транскрипцию. [ 59 ] Вставив последовательность для 23S рРНК в петлевую региону последовательности 16S рРНК, обе субъединицы по-прежнему принимают функционирующие складки. Поскольку два RRNA связаны и, следовательно, в постоянной близости, они предпочтительно связывают друг друга, а не другие свободные рибосомные субъединицы. [ Цитация необходима ]

Инженерный пептидил -трансферазный центр

[ редактировать ]

В 2014 году было показано, что, изменяя центр пептидилтрансферазы 23S рРНК, могут быть созданы рибосомы, которые опираются на ортогональные бассейны тРНК. [ 60 ] 3 'конец ТРНК универсально сохраняется, чтобы быть CCA. Два пары основания цитидинов с двумя гуанинами 23S рРНК для связывания тРНК с рибосомой. Это взаимодействие требуется для переводной верности. Тем не менее, путем совместного удара связывающих нуклеотидов таким образом, что они все еще могут основывать пару, трансляционная верность может быть сохранена. 3'-конец тРНК мутируется от CCA до CGA, в то время как два цитидиновых нуклеотида в рибосомах A- и P-сайты мутируют до гуанидина. Это приводит к рибосомам, которые не принимают природные тРНК в качестве субстратов и к тРНК, которые не могут быть использованы в качестве субстрата естественными рибосомами.
Чтобы эффективно использовать такие тРНК, они должны быть аминоацилированы конкретными ортогональными AARS. Наиболее естественно встречающиеся AARS распознают 3'-конец их соответствующей тРНК. [ 61 ] [ 62 ] AARS для этих 3'-мутированных тРНК еще недоступны. До настоящего времени была показано, что эта система работает только в настройке трансляции in vitro , где аминоацилирование ортогональной тРНК было достигнуто с использованием так называемых «гибковых». Флексизимы представляют собой рибозимы с тРНК-амино-аклилирующим активностью. [ 63 ]

Приложения

[ редактировать ]

При расширенном генетическом коде неестественная аминокислота может быть генетически направлена ​​на любой выбранный сайт в интересующем белке. размещением модификации по сравнению с модификацией белка пост- трансляционного Высокая эффективность и верность этого процесса обеспечивают лучшее контроль над Аминогруппа лизина. [ 64 ] Кроме того, расширенный генетический код позволяет проводить модификации in vivo . Способность к специфично-специфическому участку лабораторных химических фрагментов в белки позволяет многим типам исследований, которые в противном случае были бы чрезвычайно сложными, например::

  • Зесоцирующая структура и функция белка: с помощью аминокислот с немного различным размером, такими как о -метилтирозин или данилаланин вместо тирозина, и путем вставки генетически кодируемых репортерных фрагментов (изменяющие цвет и/или спин-активные) в выбранные сайты белка, химическая информация о структуре и функции белка могут быть измерены.
  • Исследование роли посттрансляционных модификаций в структуре и функции белка: с помощью аминокислот, которые имитируют посттрансляционные модификации, такие как фосфосерин, биологически активный белок можно получить, и сайт-специфическая природа аминокислота может привести к информации о том, как положение, плотность и распределение функции белка -фосфорилирования белка. [ 65 ] [ 66 ] [ 67 ] [ 68 ]
  • Идентификация и регулирование активности белка: с использованием аминоцидов в фотоокусах, функция белка может быть «включена или выключена путем освещения организма».
  • Изменение режима действия белка: можно начать с гена для белка, который связывает определенную последовательность ДНК и, вставляя химически активную аминокислоту в сайт связывания, преобразуйте его в белок, который разрезает ДНК, а не связывая это.
  • Улучшение иммуногенности и преодоления самостоятельности: заменив стратегически выбранные тирозины на P -Nitro фенилаланин, переносимый самопротеин может быть иммуногенным. [ 69 ]
  • Селективное разрушение выбранных клеточных компонентов: использование расширенного генетического кода, неестественных, разрушительных химических фрагментов (иногда называемых «химическими боеголовками») может быть включено в белки, которые нацелены на определенные клеточные компоненты. [ 70 ]
  • Производство лучшего белка: эволюция бактериофагов T7 на невообразовании штамма кишечной палочки , который кодировал 3-эйдотирозин на янтарном кодоне, приводил к прихожу от популяции, чем дикий тип благодаря присутствию йодотирозина в его протеоме [ 71 ]
  • Распывающая локализация белка и взаимодействие белка белка в бактериях. [ 72 ]

Будущее

[ редактировать ]

Расширение генетического кода все еще находится в зачаточном состоянии. Текущая методология использует только одну нестандартную аминокислоту в то время, тогда как в идеале можно использовать множественные. Фактически, группа Джейсона Чин недавно побила рекорд для генетически перекодированного штамма E. coli , который может одновременно включать до 4 неестественных аминокислот. [ 73 ] Более того, была разработана разработка в программном обеспечении, которое позволяет комбинации ортогональных рибосом и неестественных пар тРНК/RS, чтобы улучшить выход и верность белка. [ 73 ]

Перекодированный синтетический геном

[ редактировать ]

Одним из способов достижения кодирования множественных неестественных аминокислот является синтезирование переписанного генома. [ 74 ] В 2010 году был построен за 40 миллионов долларов организм, Mycoplasma Laboratorium , который контролировался синтетическим, но не перекодированным геномом. [ 75 ] Первый генетически перекодированный организм был создан в результате сотрудничества между лабораториями Джорджа Черч и Фаррена Исаака, когда дикий тип E. coli MG1655 был перекодирован таким образом, что все 321 известные кодоны (UAG) были заменены синонимичными кодонами UAA и выпуском Фактор 1 был выбит, чтобы устранить взаимодействие с экзогенным стоп -кодоном и улучшить неестественный синтез белка. [ 28 ] В 2019 году была создана Escherichia coli Syn61, с 4 -мегабазой, перекодированным геномом, состоящим только из 61 кодонов вместо Natural 64. [ 3 ] [ 2 ] В дополнение к устранению использования редких кодонов, специфичность системы должна быть увеличена, так как многие тРНК распознают несколько кодонов [ 74 ]

Расширенный генетический алфавит

[ редактировать ]
Основная статья: неестественная пара оснований

Другой подход заключается в расширении количества нуклеобаз для увеличения пропускной способности кодирования.

Неестественная пара оснований (UBP) представляет собой разработанную субъединицу (или нуклеобазу ) ДНК , которая создается в лаборатории и не встречается в природе. Демонстрация UBP была достигнута in vitro группой Ичиро Хирао в Институте Рикена в Японии. В 2002 году они разработали неестественную пару оснований между 2-амино-8- (2-титил) пуриновым (S) и пиридин-2-ой (Y), который функционирует in vitro в транскрипции и трансляции для специфического для сайта включения не -Таминокислоты в белках. [ 76 ] В 2006 году они создали 7- (2-ти-тихие) имидазо [4,5-B] пиридин (DS) и пиррол-2-карбальдегид (PA) в качестве третьей пары оснований для репликации и транскрипции. [ 77 ] После этого DS и 4- [3- (6-аминогексанамидо) -1-пропипин] -2-нитропиррол (PX) были обнаружены в виде пары с высокой точностью при амплификации ПЦР. [ 78 ] [ 79 ] В 2013 году они применили пару DS-PX к генерации аптамеров ДНК с помощью отбора in vitro (SELEX) и продемонстрировали генетическое расширение алфавита, значительно увеличивающее атамеры аптамеров ДНК к целевым белкам. [ 80 ]

В 2012 году группа американских ученых во главе с Флойдом Ромесбергом, химическим биологом из Научно -исследовательского института Scripps в Сан -Диего, штат Калифорния, опубликовала, что его команда разработала неестественную базовую пару (UBP). [ 81 ] Два новых искусственных нуклеотида или неестественная пара оснований (UBP) были названы « D5SICS » и « DNAM ». Более технически, эти искусственные нуклеотиды , несущие гидрофобные нуклеобазы , оснащены двумя плавными ароматическими кольцами , которые образуют комплекс (D5SICS -DNAM) или пара оснований в ДНК. [ 82 ] [ 83 ] В 2014 году та же команда из исследовательского института Scripps сообщила, что они синтезировали множество круговой ДНК, известной как плазмида , содержащая естественные пары оснований TA и CG, а также наиболее эффективную лабораторию UBP Romesberg, и вставьте ее в клетки общего. Bacterium E. coli , которая успешно воспроизводила неестественные пары оснований в течение нескольких поколений. [ 84 ] Это первый известный пример живого организма, передающего расширенный генетический код последующим поколениям. [ 82 ] [ 85 ] Частично это было достигнуто за счет добавления поддерживающего гена водорослей, который экспрессирует переносчика нуклеотида трифосфата , который эффективно импортирует трифосфаты как D5SICSTP, так и DNAMTP в бактерии E. coli . [ 82 ] Затем, натуральные пути репликации бактерий используют их для точной воспроизведения плазмиды , содержащей D5SICS -DNAM.

Успешное включение третьей пары оснований в живой микроорганизм является значительным прорывом к цели значительного расширения количества аминокислот , которые могут быть кодированы ДНК, тем самым расширяя потенциал для живых организмов для производства новых белков . [ 84 ] Искусственные строки ДНК еще не кодируют ни за что, но ученые предполагают, что они могут быть разработаны для производства новых белков, которые могут иметь промышленное или фармацевтическое использование. [ 86 ]

В мае 2014 года исследователи объявили, что они успешно ввели два новых искусственных нуклеотида в бактериальную ДНК, и, включив отдельные искусственные нуклеотиды в культуральные среды, были способны вызвать амплификацию плазмид, содержащих искусственные нуклеотиды, в 2 x 10 7 (24 удвоения); Они не создавали мРНК или белки, способные использовать искусственные нуклеотиды. [ 82 ] [ 87 ] [ 88 ] [ 89 ]

[ редактировать ]

Метод селективного включения давления (SPI) для производства аллопротеинов

[ редактировать ]

Было много исследований, которые продуцировали белок с нестандартными аминокислотами, но они не изменяют генетический код. Этот белок, называемый аллопротеином , производится путем инкубации клеток с неестественной аминокислотой в отсутствие аналогичной кодируемой аминокислоты, чтобы первое была включена в белок вместо последней, например L -2 -аминогексановой кислоты (кислота (например, L -2 -аминогексановая кислота (например, L -2 -аминогексановая кислота (например, L -2 -аминогексановая кислота ( L -2 -аминогексановая кислота ( например, L -2 -аминогексановая кислота AHX) для метионина (MET). [ 90 ]

Эти исследования основаны на естественной беспорядочной активности аминоацил -синтетазы, чтобы добавить к ее мишени неестественной аминокислоты (аналога IE), аналогичного природному субстрату, например, ошибочный изолецин метиониель-тРНК-синтазы для метионина. [ 91 ] Например, в кристаллографии белка добавление селенометионина в среду культуры метионино-оаксотрофического штамма приводит к белкам, содержащим селенометионин, в отличие от метионина ( а именно мультиволновая аномальная дисперсия по разуму). [ 92 ] Другим примером является то, что фотолейцин и фотометионин добавляются вместо лейцина и метионина к меж-мельничному белку. [ 93 ] Аналогичным образом, некоторые телеяные грибы теллуриум могут включать в себя теллуроцистеин и теллуврометинин в свой белок вместо цистеина и метионина. [ 94 ] Цель расширения генетического кода является более радикальной, поскольку он не заменяет аминокислоту, но добавляет одну или несколько в код. С другой стороны, замены всего протеома наиболее эффективно выполняются глобальными аминокислотными заменами. Например, глобальные замены природных аминокислот с фторированными аналогами были предприняты в E.coli [ 95 ] и B. subtilis . [ 96 ] Полная замена триптофана на тиенопиррол-аланина в ответ на кодоны UGG в 20899 году в E. coli была зарегистрирована в 2015 году Будисом и Соллом . [ 97 ] Более того, многие биологические явления, такие как складывание белка и стабильность, основаны на синергетических эффектах во многих положениях в последовательности белка. [ 98 ]

В этом контексте метод SPI генерирует рекомбинантные варианты белка или аллопротеины непосредственно путем замены природных аминокислот неестественными аналогами. [ 99 ] Аминокислотный ауксотрофный хозяин экспрессии дополняется аналогом аминокислот во время экспрессии белка -мишени. [ 100 ] Этот подход позволяет избежать ловушек методов, основанных на подавлении [ 101 ] И это превосходит его с точки зрения эффективности, воспроизводимости и чрезвычайно простой экспериментальной установки. [ 102 ] Многочисленные исследования показали, как глобальная замещение канонических аминокислот различными изостериными аналогами вызывала минимальные структурные возмущения, но драматические изменения в термодинамических, [ 103 ] Складывание, [ 104 ] агрегация [ 105 ] спектральные свойства [ 106 ] [ 107 ] и ферментативная активность. [ 108 ]

in vitro синтез

[ редактировать ]
Основная статья: дисплей мРНК

Расширение генетического кода, описанное выше, является in vivo . Альтернативой является изменение кодирования in vitro экспериментов по переводу . Это требует истощения всех тРНК и селективного реинтродукции определенных аминоацилированных TRNAS, некоторые химически аминоацилированные. [ 109 ]

Химический синтез

[ редактировать ]
Основная статья: синтез пептидов

Существует несколько методов для химического производства пептидов , как правило, это с помощью твердофазной защиты химии. Это означает, что любая (защищенная) аминокислота может быть добавлена ​​в зарождающуюся последовательность. [ Цитация необходима ]

В ноябре 2017 года команда из Научно-исследовательского института Scripps сообщила, что построила полусинтетический геном бактерий E. coli с использованием шести различных нуклеотидов (по сравнению с четырьмя, найденными в природе). Две дополнительные «буквы» образуют третью неестественную пару оснований. Полученные организмы были способны процветать и синтезировать белки, используя «неестественные аминокислоты». [ 110 ] [ 111 ] Используемая неестественная пара оснований является DNAM -DTPT3. [ 111 ] Эта неестественная пара оснований была продемонстрирована ранее, [ 112 ] [ 113 ] Но это первый отчет о транскрипции и трансляции белков с использованием неестественной пары оснований.

Смотрите также

[ редактировать ]

Ссылки

[ редактировать ]
  1. ^ Xie J, Schultz PG (декабрь 2005 г.). «Добавление аминокислот в генетический репертуар». Современное мнение о химической биологии . 9 (6): 548–54. doi : 10.1016/j.cbpa.2005.10.011 . PMID   16260173 .
  2. ^ Jump up to: а беременный Циммер С (15 мая 2019 г.). Ученые создали бактерии с синтетическим геномом. Это искусственная жизнь? « New York Times . Получено 16 мая 2019 года .
  3. ^ Jump up to: а беременный Fredens J, Wang K, De La Torre D, Funke LF, Robertson WE, Christova Y, et al. (Май 2019). «Полный синтез Escherichia coli с перекодированным геномом» . Природа . 569 (7757): 514–518. Bibcode : 2019natur.569..514f . doi : 10.1038/s41586-019-1192-5 . PMC   7039709 . PMID   31092918 .
  4. ^ Kubyshkin V, Acevedo-Rocha CG, Budisa N (февраль 2018 г.). «О универсальных кодирующих событиях в биогенезе белка» . Биосистемы . 164 : 16–25. Bibcode : 2018bisys.164 ... 16K . doi : 10.1016/j.biosystems.2017.10.004 . PMID   29030023 .
  5. ^ Kubyshkin V, Budisa N (август 2017 г.). «Синтетическое отчуждение микробных организмов с использованием инженерии генетического кода: почему и как?». Биотехнологический журнал . 12 (8): 1600097. DOI : 10.1002/Biot.201600097 . PMID   28671771 .
  6. ^ Jump up to: а беременный в дюймовый и фон Ван Л., Брок А., Герберих Б., Шульц П.Г. (апрель 2001 г.). «Расширение генетического кода Escherichia coli». Наука . 292 (5516): 498–500. Bibcode : 2001sci ... 292..498W . doi : 10.1126/science.1060077 . PMID   11313494 . S2CID   6702011 .
  7. ^ Jump up to: а беременный Альбертс Б., Джонсон А., Льюис Дж., Рафф М., Робертс К., Уолтер П. (2008). Молекулярная биология клетки (5 -е изд.). Нью -Йорк: Гарлендская наука. ISBN  978-0-8153-4105-5 .
  8. ^ Woese CR, Olsen GJ, Ibba M, Söll D (март 2000 г.). «Аминоацил-тРНК-синтетазы, генетический код и эволюционный процесс» . Микробиология и молекулярная биология обзоры . 64 (1): 202–36. doi : 10.1128/mmbr.64.1.202-236.2000 . PMC   98992 . PMID   10704480 .
  9. ^ Jump up to: а беременный Сакамото К., Хаяси А., Сакамото А., Кига Д., Накаяма Х., Сома А. и др. (Ноябрь 2002). «Сайт-специфическое включение неестественной аминокислоты в белки в клетках млекопитающих» . Исследование нуклеиновых кислот . 30 (21): 4692–9. doi : 10.1093/nar/gkf589 . PMC   135798 . PMID   12409460 .
  10. ^ Jump up to: а беременный в Liu CC, Schultz PG (2010). «Добавление новой химии в генетический код». Ежегодный обзор биохимии . 79 : 413–44. doi : 10.1146/annurev.biochem.052308.105824 . PMID   20307192 .
  11. ^ Summerer D, Chen S, Wu N, Deiters A, Chin JW, Schultz PG (июнь 2006 г.). «Генетически кодируемая флуоресцентная аминокислота» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 103 (26): 9785–9. Bibcode : 2006pnas..103.9785s . doi : 10.1073/pnas.0603965103 . PMC   1502531 . PMID   16785423 .
  12. ^ Jump up to: а беременный Steinfeld JB, Aerni HR, Rogulina S, Liu Y, Rinehart J (май 2014). «Расширенные клеточные аминокислотные пулы, содержащие фосфосерин, фосфотреонин и фосфотирозин» . ACS Химическая биология . 9 (5): 1104–12. doi : 10.1021/cb5000532 . PMC   4027946 . PMID   24646179 .
  13. ^ Фюртер R (февраль 1998 г.). «Расширение генетического кода: сайт-ориентированное P-фтор-фенилаланиновое включение в Escherichia coli» . Белковая наука . 7 (2): 419–26. doi : 10.1002/pro.5560070223 . PMC   2143905 . PMID   9521119 .
  14. ^ Wang L, Xie J, Schultz PG (2006). «Расширение генетического кода». Ежегодный обзор биофизики и биомолекулярной структуры . 35 : 225–49. doi : 10.1146/annurev.biophys.35.101105.121507 . PMID   16689635 .
  15. ^ Young TS, Schultz PG (апрель 2010 г.). «Помимо канонических 20 аминокислот: расширение генетического лексикона» . Журнал биологической химии . 285 (15): 11039–44. doi : 10.1074/jbc.r109.091306 . PMC   2856976 . PMID   20147747 .
  16. ^ Jump up to: а беременный «Лаборатория Питера Г. Шульца» . Schultz.scripps.edu. Архивировано с оригинала 2018-07-12 . Получено 2015-05-05 .
  17. ^ Cardillo G, Gentilucci L, Tolomelli A (март 2006 г.). «Необычные аминокислоты: синтез и введение в природные пептиды и биологически активные аналоги». Мини -обзоры по лекарственной химии . 6 (3): 293–304. doi : 10.2174/1389555706776073394 . PMID   16515468 .
  18. ^ Мел Р.А., Андерсон Дж.С., Санторо С.В., Ван Л., Мартин А.Б., Кинг Д.С., Хорн Д.М., Шульц П.Г. (январь 2003 г.). «Генерация бактерии с 21 аминокислотным генетическим кодом». Журнал Американского химического общества . 125 (4): 935–9. doi : 10.1021/ja0284153 . PMID   12537491 .
  19. ^ «Контекст :: 21-аминокислотные бактерии: расширение генетического кода» . Straddle3.net . Получено 2015-05-05 .
  20. ^ Koonin EV, Новожилов как (февраль 2009 г.). «Происхождение и эволюция генетического кода: универсальная загадка» . Жизнь iubmb . 61 (2): 99–111. Arxiv : 0807.4749 . doi : 10.1002/iub.146 . PMC   3293468 . PMID   19117371 .
  21. ^ Малой С.Р., Долина Джозеф Стюарт В.Дж., Тейлор Р.К. (1996). Генетический анализ патогенных бактерий: лабораторное руководство . Нью -Йорк: лаборатория Cold Spring Harbour. ISBN  978-0-87969-453-1 .
  22. ^ Normanly J, Kleina LG, Masson JM, Abelson J, Miller JH (июнь 1990 г.). «Строительство генов тРНК Escherichia coli Amber Dupressor TRNA. III. Определение специфичности тРНК». Журнал молекулярной биологии . 213 (4): 719–26. doi : 10.1016/s0022-2836 (05) 80258-x . PMID   2141650 .
  23. ^ Wang L, Magliery TJ, Liu DR, Schultz PG (2000). «Новая функциональная супрессора тРНК/аминоацил-тРНК-синтетаза для включения in vivo неестественных аминокислот в белки» (PDF) . J. Am. Химический Соц ​ 122 (20): 5010–5011. doi : 10.1021/ja000595y . Архивировано из оригинала (PDF) 2011-09-27 . Получено 2010-12-02 .
  24. ^ Wang L, Brock A, Schultz PG (март 2002 г.). «Добавление L-3- (2-нафтил) аланин в генетический код E. coli». Журнал Американского химического общества . 124 (9): 1836–7. doi : 10.1021/ja012307j . PMID   11866580 .
  25. ^ Чин Дж.В., Мартин А.Б., Кинг Д.С., Ван Л., Шульц П.Г. (август 2002 г.). «Добавление аминокислоты Photocrossling в генетический код Escherichia coli» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 99 (17): 11020–4. Bibcode : 2002pnas ... 9911020c . doi : 10.1073/pnas.172226299 . PMC   123203 . PMID   12154230 .
  26. ^ Эрни Хр, Шифман М.А., Рогулина С., О'Донохью П., Райнехарт Дж (январь 2015 г.). «Выявление аминокислотного состава белков в расширенном генетическом коде» . Исследование нуклеиновых кислот . 43 (2): E8. doi : 10.1093/nar/gku1087 . PMC   4333366 . PMID   25378305 .
  27. ^ Исаакс Ф.Дж., Карр П.А., Ван Х.Х., Ладжой М.Дж., Стерлинг Б., Краал Л. и др. (Июль 2011). «Точная манипуляция с хромосом in vivo позволяет заменить кодон по всему геному» . Наука . 333 (6040): 348–53. Bibcode : 2011sci ... 333..348i . doi : 10.1126/science.1205822 . PMC   5472332 . PMID   21764749 .
  28. ^ Jump up to: а беременный Lajoie MJ, Rovner AJ, Goodman DB, Aerni HR, Haimovich AD, Kuznetsov G, et al. (Октябрь 2013). «Геномически перекодированные организмы расширяют биологические функции» . Наука . 342 (6156): 357–60. Bibcode : 2013sci ... 342..357L . doi : 10.1126/science.1241459 . PMC   4924538 . PMID   24136966 .
  29. ^ Mandell DJ, Lajoie MJ, Mee Mt, Takeuchi R, Kuznetsov G, Norville JE, et al. (Февраль 2015 г.). «Биоконтрация генетически модифицированных организмов с помощью синтетического дизайна белка» . Природа . 518 (7537): 55–60. Bibcode : 2015natur.518 ... 55M . doi : 10.1038/nature14121 . PMC   4422498 . PMID   25607366 .
  30. ^ Zeng Y, Wang W, Liu WR (август 2014 г.). «Чтобы переназначить редкий кодон AGG в Escherichia coli» . Химбиохим . 15 (12): 1750–4. doi : 10.1002/cbic.201400075 . PMC   4167342 . PMID   25044341 .
  31. ^ Bohlke N, Budisa N (февраль 2014 г.). «Основное эмансипация кодона для во всем протеоме включено неканонических аминокислот: редкий изолециновый кодон AUA в качестве мишени для расширения генетического кода» . Письма микробиологии FEMS . 351 (2): 133–44. doi : 10.1111/1574-6968.12371 . PMC   4237120 . PMID   24433543 .
  32. ^ Робертсон, Уэсли Э.; Функе, Луиза Ф.Х.; де ла Торре, Даниэль; Фреденс, Юлий; Эллиотт, Томас С.; Спинк, Мартин; Кристова, Йонка; Черветтини, Даниэле; Böge, Franz L.; Лю, Ким С.; Благосад, Сальвадор; Маслен, Сара; Салмонд, Джордж ПК; Чин, Джейсон В. (4 июня 2021 года). «Перераспределение Sense Codon обеспечивает устойчивость к вирусам и кодируемому синтезу полимера» . Наука . 372 (6546): 1057–1062. Bibcode : 2021sci ... 372.1057R . doi : 10.1126/science.abg3029 . PMC   7611380 . PMID   34083482 .
  33. ^ Аткинс, JF; Bjoerk, Gr "Захватывающая сказка о рибосомном рамке: экстрагенные супрессоры мутаций FrameShift Spotlight P-Site Redignment". Микробиол. Мол Биол. Rev. 2009, 73, 178-210.
  34. ^ Андерсон, JC; Wu, n.; Санторо, SW; Лакшман, В.; Король, DS; Schultz, PG «Расширенный генетический код с функциональным кодоном в четырех четырех лет». Прокурор Нат. Академический Наука США 2004, 101, 7566-7571.
  35. ^ Neumann, H.; Ван, К.; Дэвис, Л.; Garcia-Alai, M.; Подбородок, JW «Кодирование множественных неестественных аминокислот посредством эволюции декомодирующей четырехлетней рибосомы». Nature 2010, 464, 441-444.
  36. ^ Niu, w.; Schultz, pg; Го Дж. ACS Chem. Биол. 2013, 8, 1640-1645.
  37. ^ Jump up to: а беременный в Neumann H, Wang K, Davis L, Garcia-Alai M, Chin JW (март 2010 г.). «Кодирование множественных неестественных аминокислот посредством эволюции декосомы в четыре раза» . Природа . 464 (7287): 441–4. Bibcode : 2010natur.464..441n . doi : 10.1038/nature08817 . PMID   20154731 . S2CID   4390989 .
  38. ^ Hong S, Sunita S, Maehigashi T, Hoffer ED, Dunkle JA, Dunham CM (октябрь 2018 г.). «Механизм тРНК-опосредованного +1 рибосомального кадрирования» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 115 (44): 11226–11231. Bibcode : 2018pnas..11511226H . doi : 10.1073/pnas.1809319115 . PMC   6217423 . PMID   30262649 .
  39. ^ Niu, W., Schultz, PG и Guo, J. (2013) Расширенный генетический код в клетках млекопитающих с функциональным кодоном в четыре раза. ACS Chem Biol 8, 1640-1645.
  40. ^ Debenedictis EA, Carver GD, Chung CZ, Söll D, Badran AH (сентябрь 2021 г.). «Мультиплексное подавление четырех четырех четырехместных кодонов через эволюцию, направленную на тРНК» . Природная связь . 12 (1): 5706. Bibcode : 2021Natco..12.5706d . doi : 10.1038/s41467-021-25948-y . PMC   8481270 . PMID   34588441 .
  41. ^ Chen, Y., Wan, Y., Wang, N., Yuan, Z., Niu, W., Li, Q., and Guo, J. (2018). Контроль репликации геномно перекодированного ВИЧ-1 с Функциональный кодон четырехлета в клетках млекопитающих. ACS Synth. Биол. 7, 1612-1617.
  42. ^ Ватанабе Т., Муранака Н., Хохсака Т (март 2008 г.). «Многопосредованный кодоном кодон мутагенез насыщений в бесклеточной системе трансляции». Журнал биологии и биоинженерии . 105 (3): 211–5. doi : 10.1263/jbb.105.211 . PMID   18397770 .
  43. ^ Anderson JC, Wu N, Santoro SW, Lakshman V, King DS, Schultz PG (май 2004 г.). «Расширенный генетический код с функциональным четырехлетным кодоном» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 101 (20): 7566–71. Bibcode : 2004pnas..101.7566a . doi : 10.1073/pnas.0401517101 . PMC   419646 . PMID   15138302 .
  44. ^ Санторо С.В., Андерсон Дж.С., Лакшман В., Шульц П.Г. (декабрь 2003 г.). «Архебактерий, полученная из глутамил-тРНК-синтетазы и тРНК, для не зернистого аминокислотного мутагенеза белков в эсшерики Coli » нуклеиновых кислот Исследование 31 (23): 6700–9 Doi : 10.1093/ nar/ gkg9  290271PMC  14627803PMID
  45. ^ Андерсон JC, Schultz PG (август 2003 г.). «Адаптация ортогональной архейной ливой лейцил-тРНК и синтетазной пары для подавления четырех базой, янтаря и опала». Биохимия . 42 (32): 9598–608. doi : 10.1021/bi034550w . PMID   12911301 .
  46. ^ Hancock SM, Uprety R, Deiters A, Chin JW (октябрь 2010). «Расширение генетического кода дрожжей для включения разнообразных неестественных аминокислот через пирролизил-тРНК-синтетазу/тРНК» . Журнал Американского химического общества . 132 (42): 14819–24. doi : 10.1021/ja104609m . PMC   2956376 . PMID   20925334 .
  47. ^ Минаба М, Като Y (март 2014 г.). «Высокодоходная система экспрессии с нулевой лишней с трансляционным переключателем с использованием специфического для сайта неестественного включения аминокислот» . Прикладная и экологическая микробиология . 80 (5): 1718–25. Bibcode : 2014apenm..80.1718m . doi : 10.1128/aem.03417-13 . PMC   3957627 . PMID   24375139 .
  48. ^ Chin JW, Cropp TA, Anderson JC, Mukherji M, Zhang Z, Schultz PG (август 2003 г.). «Расширенный эукариотический генетический код». Наука . 301 (5635): 964–7. Bibcode : 2003sci ... 301..964c . doi : 10.1126/science.1084772 . PMID   12920298 . S2CID   2376187 .
  49. ^ Jump up to: а беременный Wu N, Deiters A, Cropp TA, King D, Schultz PG (ноябрь 2004 г.). «Генетически кодируемая аминокислота в фотоокусах». Журнал Американского химического общества . 126 (44): 14306–7. doi : 10.1021/ja040175z . PMID   15521721 .
  50. ^ Jump up to: а беременный Kowal AK, Kohrer C, Rajbhandary UL (февраль 2001 г.). «Двадцать первая аминоацил-тРНК-синтетаза-супрессора пары тРНК для возможного использования в специфичном для участков в включении аминокислотных аналогов в белки у эукариот и в эубактериях» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 98 (5): 2268–73. Bibcode : 2001pnas ... 98.2268K . doi : 10.1073/pnas.031488298 . PMC   30127 . PMID   11226228 .
  51. ^ Lemke EA, Summerer D, Geiersanger BH, Brittain SM, Schultz PG (декабрь 2007 г.). «Контроль фосфорилирования белка с генетически кодируемой аминокислотой в фотоокусах» . Природная химическая биология . 3 (12): 769–72. doi : 10.1038/nchembio.2007.44 . PMID   17965709 .
  52. ^ Palei S, Buchmuller B, Wolffgramm J, Muñoz-Lopez A, Jung S, Czodrowski P, Summerer D (апрель 2020 г.). «Легкие активируемые тети-диоксигеназы показывают динамику 5-метилцитозинового окисления и реорганизации транскриптома». Журнал Американского химического общества . 142 (16): 7289–7294. doi : 10.1021/jacs.0c01193 . PMID   32286069 . S2CID   215757172 .
  53. ^ Kang Jy, Kawaguchi D, Coin I, Xiang Z, O'Leary DD, Slesinger PA, Wang L (октябрь 2013 г.). «Экспрессия in vivo активируемого светового калиевого канала с использованием неестественных аминокислот» . Нейрон . 80 (2): 358–70. doi : 10.1016/j.neuron.2013.08.016 . PMC   3815458 . PMID   24139041 .
  54. ^ Wolfgram J, Buchmiller B, Bale S, Muñoz-Lüopz A, Cancer J, Janning P, et al. (Июнь 2021 г.). «Световая активация или трансквация ДНК-мила» . Анге Стены Химия . 60 (24): 13507–13512. doi : 10,1002/any.202103945 . PMC   8251764 . PMID   33826797 .
  55. ^ Zhang Z, Alfonta L, Tian F, Bursulaya B, Uryu S, King DS, Schultz PG (июнь 2004 г.). «Селективное включение 5-гидрокситриптофана в белки в клетках млекопитающих» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 101 (24): 8882–7. Bibcode : 2004pnas..101.8882z . doi : 10.1073/pnas.0307029101 . PMC   428441 . PMID   15187228 .
  56. ^ Хан С., Ян А., Ли С., Ли Х.В., Парк CB, Park HS (февраль 2017 г.). «Расширение генетического кода Mus Musculus» . Природная связь . 8 : 14568. Bibcode : 2017natco ... 814568h . doi : 10.1038/ncomms14568 . PMC   5321798 . PMID   28220771 .
  57. ^ Rackham O, Chin JW (август 2005 г.). «Сеть ортогональной пары мРНК рибосомы x». Природная химическая биология . 1 (3): 159–66. doi : 10.1038/nchembio719 . PMID   16408021 . S2CID   37181098 .
  58. ^ Ван К., Нейман Х, Пик Чу-Си, Чин Дж.В. (июль 2007 г.). «Развивающиеся ортогональные рибосомы повышают эффективность расширения синтетического генетического кода» (PDF) . Nature Biotechnology . 25 (7): 770–7. doi : 10.1038/nbt1314 . PMID   17592474 . S2CID   19683574 .
  59. ^ Fried SD, Schmied WH, Uttamapinant C, Chin JW (октябрь 2015). «Рибосома субъединица сшивание для ортогонального перевода в кишечной палочке» . Angewandte Chemie . 54 (43): 12791–4. doi : 10.1002/anie.201506311 . PMC   4678508 . PMID   26465656 .
  60. ^ Terasaka N, Hayashi G, Katoh T, Suga H (июль 2014 г.). «Парта ортогональная рибосом-трна посредством инженерии центра пептидилтрансферазы». Природная химическая биология . 10 (7): 555–7. doi : 10.1038/nchembio.1549 . PMID   24907900 .
  61. ^ Moras D (январь 1993 г.). 4-трем ситетазы FASEB Journal 7 (1): 79–8 doi : 10.1096/fasbej . PMID   8422978 . S2CID   46222849 .
  62. ^ Schimmel PR, Söll D (1979). «Аминоацил-трна синтетазы: общие особенности и распознавание трансферных РНК». Ежегодный обзор биохимии . 48 : 601–48. doi : 10.1146/annurev.bi.48.070179.003125 . PMID   382994 .
  63. ^ Ohuchi M, Murakami H, Suga H (октябрь 2007 г.). «Система Flexizyme: очень гибкий инструмент аминоацилирования тРНК для трансляционного аппарата». Современное мнение о химической биологии . 11 (5): 537–42. doi : 10.1016/j.cbpa.2007.08.011 . PMID   17884697 .
  64. ^ Wang Q, Parrish AR, Wang L (март 2009 г.). «Расширение генетического кода для биологических исследований» . Химия и биология . 16 (3): 323–36. doi : 10.1016/j.chembiol.2009.03.001 . PMC   2696486 . PMID   19318213 .
  65. ^ Park HS, Hohn MJ, Umehara T, Guo LT, Osborne EM, Benner J, et al. (Август 2011 г.). «Расширение генетического кода Escherichia coli с помощью фосфосерина» . Наука . 333 (6046): 1151–4. Bibcode : 2011sci ... 333.1151p . doi : 10.1126/science.1207203 . PMC   5547737 . PMID   21868676 .
  66. ^ Oza JP, Aerni HR, Pirman NL, Barber KW, Ter Haar CM, Rogulina S, et al. (Сентябрь 2015). «Надежная продукция рекомбинантных фосфопротеинов с использованием бесклеточного синтеза белка» . Природная связь . 6 : 8168. Bibcode : 2015natco ... 6.8168o . doi : 10.1038/ncomms9168 . PMC   4566161 . PMID   26350765 .
  67. ^ Pirman NL, Barber KW, Aerni HR, Ma NJ, Haimovich AD, Rogulina S, et al. (Сентябрь 2015). «Гибкий кодон в геномически перекодированной Escherichia coli позволяет программируемому фосфорилированию белка» . Природная связь . 6 : 8130. Bibcode : 2015natco ... 6.8130p . doi : 10.1038/ncomms9130 . PMC   4566969 . PMID   26350500 .
  68. ^ Rogerson DT, Sachdeva A, Wang K, Haq T, Kazlauskaite A, Hancock SM, et al. (Июль 2015). «Эффективное генетическое кодирование фосфосерина и его негидролизируемый аналог» . Природная химическая биология . 11 (7): 496–503. doi : 10.1038/nchembio.1823 . PMC   4830402 . PMID   26030730 .
  69. ^ Gauba V, Grünewald J, Gorney V, Deaton LM, Kang M, Bursulaya B, et al. (Август 2011 г.). «Потеря CD4-Т-клеточной толерантности к белкам с модифицированными аминокислотами» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 108 (31): 12821–6. Bibcode : 2011pnas..10812821G . doi : 10.1073/pnas.1110042108 . PMC   3150954 . PMID   21768354 .
  70. ^ Лю С.К., Мак А.В., Брустад Э.М., Миллс Дж. Х., Грофф Д., Смидер В.В., Шульц П.Г. (июль 2009 г.). «Эволюция белков с генетически кодируемыми« химическими боеголовками » . Журнал Американского химического общества . 131 (28): 9616–7. doi : 10.1021/ja902985e . PMC   2745334 . PMID   19555063 .
  71. ^ Hammerling MJ, Ellefson JW, Boutz DR, Marcotte EM, Ellington AD, Barrick Je (март 2014 г.). «Бактериофаги используют расширенный генетический код по эволюционным путям к более высокой пригодности» . Природная химическая биология . 10 (3): 178–80. doi : 10.1038/nchembio.1450 . PMC   3932624 . PMID   24487692 .
  72. ^ Kipper K, Lundius EG, ćurrić V, Nikić I, Wiessler M, Lemke EA, Elf J (февраль 2017 г.). «Применение неканонических аминокислот для белкового лаборатория в гениально перекодированной Escheria coli» ACS Синтетическая биология 6 (2): 233–2 Doi : 10.1021/ acssynbio.6b0  27775882PMID
  73. ^ Jump up to: а беременный Dunkelmann DL, OEHM SB, Bitttie AT, Chin JW (август 2021 г.). «Генетический код 68-кодона для включения четырех различных неканонических аминокислот, включенных с помощью автоматизированной ортогональной конструкции мРНК» . Природная химия . 13 (11): 1110–1117. Bibcode : 2021natch..13.1110d . doi : 10.1038/s41557-021-00764-5 . PMC   7612796 . PMID   34426682 . S2CID   237271721 .
  74. ^ Jump up to: а беременный Кришнакумар Р., Лин Дж (январь 2014 г.). «Экспериментальные проблемы смены Sense Codon: инновационный подход к расширению генетического кода» . Письма Febs . 588 (3): 383–8. Bibcode : 2014febsl.588..383k . doi : 10.1016/j.febslet.2013.11.039 . PMID   24333334 . S2CID   10152595 .
  75. ^ Gibson DG, Glass Ji, Lartigue C, Noskov VN, Chuang Ry, Algire MA, et al. (Июль 2010). «Создание бактериальной клетки, контролируемой химически синтезированным геномом» . Наука . 329 (5987): 52–6. Bibcode : 2010sci ... 329 ... 52G . doi : 10.1126/science.1190719 . PMID   20488990 .
  76. ^ Hirao I, Ohtsuki T, Fujiwara T, Mitsui T, Yokogawa T, Okuni T, et al. (Февраль 2002 г.). «Неестественная пара оснований для включения аналогов аминокислот в белки». Nature Biotechnology . 20 (2): 177–82. doi : 10.1038/nbt0202-177 . PMID   11821864 . S2CID   22055476 .
  77. ^ Хирао I, Кимото М., Мицуи Т., Фудзивара Т., Кавай Р., Сато А. и др. (Сентябрь 2006 г.). «Неестественная гидрофобная система пары оснований: сайт-специфическое включение нуклеотидных аналогов в ДНК и РНК». Природные методы . 3 (9): 729–35. doi : 10.1038/nmeth915 . PMID   16929319 . S2CID   6494156 .
  78. ^ Кимото М., Каваи Р., Мицуи Т., Йокояма С., Хирао I (февраль 2009 г.). «Неестественная система пары оснований для эффективной амплификации ПЦР и функционализации молекул ДНК» . Исследование нуклеиновых кислот . 37 (2): E14. doi : 10.1093/nar/gkn956 . PMC   2632903 . PMID   19073696 .
  79. ^ Yamashige R, Kimoto M, Takzawa Y, Sato A, Mitsui T, Yokoyama S, Hirao I (март 2012 г.). «Очень специфические неестественные системы пары оснований в качестве третьей пары оснований для амплификации ПЦР» . Исследование нуклеиновых кислот . 40 (6): 2793–806. doi : 10.1093/nar/gkr1068 . PMC   3315302 . PMID   22121213 .
  80. ^ Кимото М., Ямашиге Р., Мацунага К., Йокояма С., Хирао I (май 2013). «Генерация высокоаффинных аптамеров ДНК с использованием расширенного генетического алфавита». Nature Biotechnology . 31 (5): 453–7. doi : 10.1038/nbt.2556 . PMID   23563318 . S2CID   23329867 .
  81. ^ Малишев Д.А., Дэми К., Квач Х.Т., Лавергне Т., Оркукханян П., Торкамани А., Ромсберг Фе (июль 2012 г.). «Эффективная и независимая от последовательности репликация ДНК, содержащей третью пару оснований, устанавливает функциональный генетический алфавит с шестью буквами» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 109 (30): 12005–10. Bibcode : 2012pnas..10912005M . doi : 10.1073/pnas.1205176109 . PMC   3409741 . PMID   22773812 .
  82. ^ Jump up to: а беременный в дюймовый Малишев Д.А., Дэми К., Лавернь Т., Чен Т., Дай Н., Фостер Дж. М. и др. (Май 2014). «Полусинтетический организм с расширенным генетическим алфавитом» . Природа . 509 (7500): 385–8. Bibcode : 2014natur.509..385m . doi : 10.1038/nature13314 . PMC   4058825 . PMID   24805238 .
  83. ^ Callaway E (7 мая 2014 г.). «Ученые создают первый живой организм с« искусственной »ДНК» . Nature News . Huffington Post . Получено 8 мая 2014 года .
  84. ^ Jump up to: а беременный Fikes BJ (8 мая 2014 г.). «Жизнь спроектирована с расширенным генетическим кодом» . Сан -Диего Юнион Трибьюн . Архивировано из оригинала 9 мая 2014 года . Получено 8 мая 2014 года .
  85. ^ Образец I (7 мая 2014 г.). «Первая жизнь формирует искусственную ДНК, спроектированную американскими учеными» . Хранитель . Получено 8 мая 2014 года .
  86. ^ Поллак A (7 мая 2014 г.). «Ученые добавляют буквы в алфавит ДНК, поднимая надежду и страх» . New York Times . Получено 8 мая 2014 года .
  87. ^ Поллак A (7 мая 2014 г.). «Исследователи сообщают о прорыве в создании искусственного генетического кода» . New York Times . Получено 7 мая 2014 года .
  88. ^ Callaway E (7 мая 2014 г.). «Первая жизнь с« инопланетной »ДНК» . Природа . doi : 10.1038/nature.2014.15179 . S2CID   86967999 . Получено 7 мая 2014 года .
  89. ^ Amos J (8 мая 2014 г.). «Полусинтетическая ошибка расширяет« алфавит жизни » . BBC News . Получено 2014-05-09 .
  90. ^ Koide H, Yokoyama S, Kawai G, Ha JM, Oka T, Kawai S, et al. (Сентябрь 1988 г.). «Биосинтез белка, содержащего непротеиновую аминокислоту Escherichia coli: L-2-аминогексановая кислота в положении 21 в эпидермальном факторе роста человека» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 85 (17): 6237–41. Bibcode : 1988pnas ... 85.6237K . doi : 10.1073/pnas.85.17.6237 . PMC   281944 . PMID   3045813 .
  91. ^ Ферла -депутат, Патрик Вм (август 2014 г.). «Бактериальный биосинтез метионина» . Микробиология . 160 (Pt 8): 1571–1584. doi : 10.1099/mic.0.077826-0 . PMID   24939187 .
  92. ^ Doublié S (2007). «Производство селенометионильных белков в прокариотических и эукариотических системах экспрессии» . Макромолекулярная кристаллография протоколов . Методы в молекулярной биологии. Тол. 363. С. 91–108 . doi : 10.1007/978-1-59745-209-0_5 . ISBN  978-1-58829-292-6 Полем PMID   17272838 .
  93. ^ Sularanek M, Radzikowska A, Thiele C (апрель 2005 г.). «Фото-лейцина и фотометинин позволяют идентифицировать взаимодействия белка белка в живых клетках» . Природные методы . 2 (4): 261–7. doi : 10.1038/nmeth752 . PMID   15782218 .
  94. ^ Рамадан С.Е., Разак А.А., Рагаб А.М., Эль-Мелеиги М (июнь 1989 г.). «Включение теллуриума в аминокислоты и белки в грибах, устойчивых к теллуриуму». Биологическое исследование следовых элементов . 20 (3): 225–32. doi : 10.1007/bf02917437 . PMID   2484755 . S2CID   9439946 .
  95. ^ Bacher JM, Ellington AD (сентябрь 2001 г.). «Отбор и характеристика вариантов Escherichia coli, способных к росту на аналоге с токсическим триптофаном» . Журнал бактериологии . 183 (18): 5414–25. doi : 10.1128/jb.183.18.5414-5425.2001 . PMC   95426 . PMID   11514527 .
  96. ^ Вонг JT (октябрь 1983 г.). «Членская мутация генетического кода: потеря пригодности от триптофана» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 80 (20): 6303–6. Bibcode : 1983pnas ... 80.6303W . doi : 10.1073/pnas.80.20.6303 . PMC   394285 . PMID   6413975 .
  97. ^ Hoesl MG, Oehm S, Durkin P, Darmon E, Peil L, Aerni HR, et al. (Август 2015). «Химическая эволюция бактериального протеома» . Angewandte Chemie . 54 (34): 10030–4. doi : 10.1002/anie.201502868 . PMC   4782924 . PMID   26136259 . NIHMSID: NIHMS711205
  98. ^ Moroder L, Budisa N (апрель 2010 г.). «Синтетическая биология складывания белка». Chemphyschem . 11 (6): 1181–7. doi : 10.1002/cphc.201000035 . PMID   20391526 .
  99. ^ Будиса Н (декабрь 2004 г.). «Prolegomena для будущих экспериментальных усилий по разработке генетического кода путем расширения своего аминокислотного репертуара». Angewandte Chemie . 43 (47): 6426–63. doi : 10.1002/anie.200300646 . PMID   15578784 .
  100. ^ Link AJ, Mock ML, Tirrell DA (декабрь 2003 г.). «Неканонические аминокислоты в белковой инженерии». Текущее мнение о биотехнологии . 14 (6): 603–9. doi : 10.1016/j.copbio.2003.10.011 . PMID   14662389 .
  101. ^ Nehring S, Budisa N, Wiltschi B (2012). «Анализ производительности ортогональных пар, разработанных для расширенного эукариотического генетического кода» . Plos один . 7 (4): E31992. BIBCODE : 2012PLOSO ... 731992N . doi : 10.1371/journal.pone.0031992 . PMC   3320878 . PMID   22493661 .
  102. ^ Agostini F, Völler JS, Koksch B, Acevedo-Rocha CG, Kubyshkin V, Budisa N (август 2017 г.). «Биокатализ с неестественными аминокислотами: фермерт соответствует ксенобиологии». Angewandte Chemie . 56 (33): 9680–9703. doi : 10.1002/anie.201610129 . PMID   28085996 .
  103. ^ Рубини М., Лепфен С., Голбик Р., Будиса Н (июль 2006 г.). «Аминотриптофансодержащий Barstar: структура-функциональный компромисс в проектировании и инженерии белка с расширенным генетическим кодом». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - белки и протеомика . 1764 (7): 1147–58. doi : 10.1016/j.bbapap.2006.04.012 . PMID   16782415 .
  104. ^ Штайнер Т., Хесс П., Бэ Дж. Х., Уилтчи Б., Мородер Л., Будиса Н (февраль 2008 г.). «Синтетическая биология белков: настройка складывания и стабильность GFP с флуоропролином» . Plos один . 3 (2): E1680. Bibcode : 2008ploso ... 3.1680s . doi : 10.1371/journal.pone.0001680 . PMC   2243022 . PMID   18301757 .
  105. ^ Wolschner C, Giese A, Kretzschmar HA, Huber R, Moroder L, Budisa N (май 2009 г.). «Конструкция вариантов анти- и проаггрегации для оценки эффектов окисления метионина в прионном белке человека» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 106 (19): 7756–61. Bibcode : 2009pnas..106.7756w . doi : 10.1073/pnas.0902688106 . PMC   2674404 . PMID   19416900 .
  106. ^ Lepthien S, Hoesl MG, Merkel L, Budisa N (октябрь 2008 г.). «Азатриптофаны наделяют белки внутренней синей флуоресценцией» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 105 (42): 16095–100. Bibcode : 2008pnas..10516095L . doi : 10.1073/pnas.0802804105 . PMC   2571030 . PMID   18854410 .
  107. ^ Bae JH, Rubini M, Jung G, Wiegand G, Seifert MH, Azim MK, et al. (Май 2003 г.). «Расширение генетического кода позволяет проектировать новый« золотой »класс зеленых флуоресцентных белков» . Журнал молекулярной биологии . 328 (5): 1071–81. doi : 10.1016/s0022-2836 (03) 00364-4 . PMID   12729742 . Архивировано из оригинала 2017-08-11 . Получено 2017-08-11 .
  108. ^ Hoesl MG, Acevedo-Rocha CG, Nehring S, Royter M, Wolschner C, Wiltschi B, Budisa N, Antranikian G (2011). «Lipase Congeners, разработанные инженерией генетического кода». Chemcatchem . 3 (1): 213–221. doi : 10.1002/cctc.201000253 . ISSN   1867-3880 . S2CID   86352672 .
  109. ^ Hong SH, Kwon YC, Jewett MC (2014). «Нестандартное включение аминокислот в белки с использованием синтеза белка белков Escherichia coli» . Границы в химии . 2 : 34. Bibcode : 2014frch .... 2 ... 34H . doi : 10.3389/fchem.2014.00034 . PMC   4050362 . PMID   24959531 .
  110. ^ «Неестественный» микроб может делать белки . BBC News . 29 ноября 2017 года.
  111. ^ Jump up to: а беременный Zhang Y, Ptacin JL, Fischer EC, Aerni HR, Caffaro CE, San Hose K, et al. (Ноябрь 2017). «Полусинтетический организм, который хранит и извлекает повышенную генетическую информацию» . Природа . 551 (7682): 644–647. Bibcode : 2017natur.551..644Z . doi : 10.1038/nature24659 . PMC   5796663 . PMID   29189780 .
  112. ^ Howgego J (февраль 2014 г.). «На незнакомцах нуклеотидов» . Мир химии .
  113. ^ Li L, Degardin M, Lavergne T, Malyshev DA, Dhami K, Ordoukhanian P, Romesberg FE (январь 2014 г.). «Естественная репликация неестественной пары оснований для расширения генетических алфавитных и биотехнологических применений» . Журнал Американского химического общества . 136 (3): 826–9. doi : 10.1021/ja408814g . PMC   3979842 . PMID   24152106 .
Retrieved from "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Expanded_genetic_code&oldid=1231111915"
Arc.Ask3.Ru: конец переведенного документа.
Arc.Ask3.Ru
Номер скриншота №: 442e86f21a57ede86a7951b624ba0ccc__1719402120
URL1:https://arc.ask3.ru/arc/aa/44/cc/442e86f21a57ede86a7951b624ba0ccc.html
Заголовок, (Title) документа по адресу, URL1:
Expanded genetic code - Wikipedia
Данный printscreen веб страницы (снимок веб страницы, скриншот веб страницы), визуально-программная копия документа расположенного по адресу URL1 и сохраненная в файл, имеет: квалифицированную, усовершенствованную (подтверждены: метки времени, валидность сертификата), открепленную ЭЦП (приложена к данному файлу), что может быть использовано для подтверждения содержания и факта существования документа в этот момент времени. Права на данный скриншот принадлежат администрации Ask3.ru, использование в качестве доказательства только с письменного разрешения правообладателя скриншота. Администрация Ask3.ru не несет ответственности за информацию размещенную на данном скриншоте. Права на прочие зарегистрированные элементы любого права, изображенные на снимках принадлежат их владельцам. Качество перевода предоставляется как есть. Любые претензии, иски не могут быть предъявлены. Если вы не согласны с любым пунктом перечисленным выше, вы не можете использовать данный сайт и информация размещенную на нем (сайте/странице), немедленно покиньте данный сайт. В случае нарушения любого пункта перечисленного выше, штраф 55! (Пятьдесят пять факториал, Денежную единицу (имеющую самостоятельную стоимость) можете выбрать самостоятельно, выплаичвается товарами в течение 7 дней с момента нарушения.)